Scielo RSS <![CDATA[Acta bioquímica clínica latinoamericana]]> http://www.scielo.org.ar/rss.php?pid=0325-295720060001&lang=es vol. 40 num. 1 lang. es <![CDATA[SciELO Logo]]> http://www.scielo.org.ar/img/en/fbpelogp.gif http://www.scielo.org.ar <link>http://www.scielo.org.ar/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0325-29572006000100001&lng=es&nrm=iso&tlng=es</link> <description/> </item> <item> <title/> <link>http://www.scielo.org.ar/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0325-29572006000100002&lng=es&nrm=iso&tlng=es</link> <description/> </item> <item> <title><![CDATA[La producción nacional de vacuna a virus Junin vivo atenuado (Candid #1) anti-fiebre hemorrágica argentina]]> http://www.scielo.org.ar/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0325-29572006000100003&lng=es&nrm=iso&tlng=es La emergencia de la fiebre hemorrágica argentina (fha) a comienzos de la década del ´50 representó para los científicos argentinos un desafío excepcional: una patología humana de alta letalidad, nueva para el mundo, se presentaba solamente en una región (de gran importancia económica) del territorio argentino. El afrontar ese desafío con dedicación y, sin duda, con más recursos intelectuales que financieros, permitió que a los tres años de la descripción clínica de la enfermedad se demostrara que el virus Junin era el agente etiológico de la FHA, siendo éste el segundo arenavirus descripto luego del virus de la Coriomeningitis Linfocitaria, prototipo del grupo, aislado en 1933. En las décadas de los ’60 y los ’70 se realizaron avances fundamentales con la detección del reservorio natural del virus Junin y el conocimiento de múltiples aspectos de la fisiopatología y la epidemiología de la enfermedad. Esto permitió conocer que se trataba de una enfermedad controlable pero no erradicable. Fue en este mismo período en que se encontró un tratamiento para la FHA que disminuyó drásticamente su mortalidad y se iniciaron diversas líneas de investigación para desarrollar una vacuna eficaz que permitiera controlar la enfermedad. Este trabajo es un relato no exhaustivo de los acontecimientos que condujeron a la elaboración en Argentina de una vacuna (Candid #1) para prevenir la FHA, y fue realizado para rendir homenaje al gran inmunólogo argentino Dr. Ricardo Margni mostrando cómo los principios de la inmunología, difundidos por el Dr. Margni durante su extensa trayectoria como científico y docente contribuyeron, por este camino, a mejorar la calidad de vida de la sociedad.<hr/>The emergence of Argentine hemorrhagic fever (AHF) at the beginning of the ´50s represented an exceptional challenge to Argentine scientists: a new human pathology with a high lethality rate was affecting a conspicuous region -of high economical importance- of the Argentine territory. Facing this challenge with dedication and, undoubtedly, more intellectual than financial resources, made it possible that three years after the clinical description of the disease, Junin virus was shown to be its etiological agent, being this the second arenavirus reported, following the prototype of the arenavirus group Lymphocytic Choriomeningitis virus, isolated in 1933. During the ´60s and ´70s fundamental progress was made with the demonstration of Junin virus natural reservoir and many findings on the physiopathology and epidemiology of AHF, being already envisioned that this was a controllable but not an eradicable disease. During this same period the therapeutical use of convalescent´s plasma (neutralizing antibodies transference) was shown to dramatically decrease the mortality rate of the disease, and several important research projects were started to develop an efficacious vaccine to control AHF. This paper is a non exhaustive chronicle of events that led to the manufacture of a vaccine (Candid #1) against AHF in Argentina, and was written to honor Dr. Ricardo Margni, a great immunologist. It is also intented to show one of the many ways in which immunology principles, diffused by Dr. Margni along his rich research and teaching background, can improve society’s life quality. <![CDATA[Establecimiento de la línea PL104 Modelo de estudio del balance muerte/sobrevida de células tumorales]]> http://www.scielo.org.ar/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0325-29572006000100004&lng=es&nrm=iso&tlng=es La apoptosis es un proceso fisiológico crítico para el crecimiento celular, regulado por factores pro y anti-apoptóticos. Defectos en su control llevan a una ventaja selectiva en la sobrevida celular favoreciendo el desarrollo de patologías neoplásicas. NFkB puede promover la proliferación celular por lo que el uso de inhibidores selectivos lleva a un aumento de la apoptosis. El objetivo del presente trabajo fue caracterizar la línea celular PL104, obtenida de células de punción de médula ósea de una paciente con diagnóstico de leucemia mieloide aguda (LMA) atípica y evaluar la susceptibilidad de la misma frente a los quimioterápicos Doxorubicina (DOX), Vincristina (VCR), Gemcitabina e inhibidores de NFkB, CAPE y MG-132. El fenotipo evaluado por citometría de flujo resultó positivo para CD19, CD20, CD22, CD38, CD45, CD79a, HLA-DR y cadena lambda con expresión aberrante de CD71. Se verificó el efecto de los agentes mencionados sobre la proliferación celular resultando a las 24 h en un 5.2 + 0.7%, 42.8 + 3.6%, 2.4 + 0.4%, 0.7 + 0.2% y 0.7 + 0.3% (p < 0.001) de sobrevida celular para DOX (4 µM), VCR (10 µM), Gemcitabina (0.04 µM), CAPE (360 µM) y MG-132 (4 µM), respectivamente. La apoptosis evaluada con bromuro de etidio-naranja de acridina para DOX (1.5 µM), VCR (1 µM), CAPE (360 µM) y MG-132 (4 µM) a las 24 h fue de 28.9 + 1.9%, 47 + 2.7%, 77.1 + 5.7% y 92,8 + 2.9% (p < 0.001) respectivamente vs. 6.6 + 0.2% para las células sin tratar, datos confirmados por Annexin-V. Se concluye que la línea PL104 derivada de una LMA corresponde a linfocitos B sensibles tanto a la acción de los quimioterápicos testeados como a los inhibidores de NFkB, lo que indica la implicancia de dicho factor en la sobrevida de estas células.<hr/>Apoptosis is a physiological process regulated by a delicate balance be-tween pro and anti-apoptotic factors, which plays a critical role in cell growth. Defects in its balance may lead to a selective advantage in cell survival that promotes neoplasia and malignancy. NFkB enhances cell proliferation thus, the use of selective inhibitors induces apoptosis. The aim of the present study was to characterise the cell line PL104 obtained in this laboratory from bone marrow cells of a young patient with an atypical acute myeloid leukaemia (AML) and to evaluate its susceptibility against the chemotherapeutic agents Doxorubicine (DOX), Vincristine (VCR) Gemcitabine and the inhibitors of NFkB, CAPE and MG-132. PL104 phenotype, evaluated by flow cytometry, showed expression of the following markers: CD19, CD20, CD22, CD38, CD45, CD79a, HLA-DR and lambda chain plus aberrant expression of CD71. The effect of these compounds on cell proliferation was evaluated resulting in 5.2 + 0.7%, 42.8 + 3.6%, 2.4 + 0.4%, 0.7 +0.2% and 0.7 + 0.3% (p < 0.001) of cell growth for DOX (4 µM), VCR (10 µM), Gemcitabina (0.04 µM), CAPE (360 µM) and MG-132 (4 µM) respectively after 24 h of treatment. Apoptosis assessed by acridine orange and ethidium bromide staining after 24 h showed 28.9 + 1.9%, 47 + 2.7%, 77.1 + 5.7% and 92,8 + 2.9% (p < 0.001) for DOX (1.5 µM), VCR (1 µM), CAPE (360 µM) and MG-132 (4 µM) respectively versus 6.63 + 0.2% for untreated cells, data confirmed by Annexin-V test. It can be concluded that the cell line PL104, originated from an AML, corresponds to B lymphocytes significantly susceptible to the chemotherapeutic agents and inhibitors tested. Therefore, NFkB’s implication in controlling these cells’ survival has been demonstrated. <![CDATA[Manifestación de porfiria cutánea tardía en pacientes infectados con el virus de la inmunodeficiencia humana]]> http://www.scielo.org.ar/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0325-29572006000100005&lng=es&nrm=iso&tlng=es Las porfirias son consecuencia de una deficiencia parcial y específica de alguna de las enzimas del camino del hemo. En la Porfiria Cutánea Tardía (PCT) la deficiencia en la uroporfirinógeno decarboxilasa (URO-D) conduce a la acumulación de porfirinas altamente carboxiladas en hígado, plasma y orina. La enzima en sangre diferencia dos tipos de PCT: familiar y esporádica. Clínicamente presenta hiperpigmentación, hipertricosis, ampollas y fragilidad cutánea. En su patogénesis están implicados alcohol, estrógenos, drogas hepatotóxicas, compuestos polihalogenados, sobrecarga de hierro e infecciones con virus de hepatitis (VHC y VHB) y de la inmunodeficiencia humana (VIH). Se presenta una revisión de los pacientes PCT-VIH estudiados entre 1990 y 2004. Se diagnosticaron 91 individuos VIH como pacientes PCT (20 - 50 años), sólo 3 eran mujeres; 48 consumían alcohol y drogas de abuso, 16 consumían sólo alcohol, 10 eran adictos a drogas de abuso y 41 estaban coinfectados con VHC. En 25 pacientes había abuso de alcohol, drogas e infección con VHC. Sólo en 2 la URO-D estuvo disminuída. El tratamiento con bajas dosis de cloroquina y la terapia combinada (S-adenosil-L-metionina y cloroquina) fue bien tolerado con normalización de signos clínicos y bioquímicos. Se concluye que la población VIH positiva debería ser considerada como un grupo de riesgo de desarrollar PCT.<hr/>Porphyrias are metabolic disorders caused by a decreased activity of one of the haem enzymes. Porphyria Cutanea Tarda (PCT) is due to subnormal activity of Uroporphyrinogen Decarboxylase (URO-D), and its value in erythrocytes allows differentiation between familiar and sporadic PCT, leading to increased levels of highly carboxylated porphyrins in liver, plasma and urine. Clinical symptoms include hyperpigmentation, hyperthricosis, blisters, skin photosensitivity and fragility. Factors such as alcohol, estrogens, polyhalogenated compounds, iron overload and infections with hepatitis viruses (HBV and HCV) and human immunodeficiency virus (HIV), have been implicated in its pathogenesis. All Argentine PCT-HIV cases studied from 1990 to 2004 were rewiewed. A group of 91 HIV positive subjects were diagnosed as PCT patients (20 to 50 years). Only 3 were women; 48 alcohol and drug abusers, 16 only heavy drinkers, 10 drug abusers and 41 were also coinfected with HCV. In 25 patients an overlapping of alcohol, drug abuse and HCV infection was found. In only 2 of the PCT-HIV studied URO-D was diminished. Treatment with low doses of chloroquine or the combined therapy (SAMe and chloroquine) is well tolerated, with normalization of clinical and biochemical signs. It can be concluded that HIV infected subjects should be considered a risk group, highly susceptible to developing Porphyria. <![CDATA[Evaluación de la calidad del diagnóstico micológico]]> http://www.scielo.org.ar/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0325-29572006000100006&lng=es&nrm=iso&tlng=es Para evaluar la capacidad de identificación de especies fúngicas y el tipo y número de prácticas micológicas realizadas por los laboratorios participantes del Subprograma Micología del Programa de Evaluación Externa de Calidad (PEEC) de la Fundación Bioquímica Argentina, se llevó a cabo entre ellos una encuesta anónima y no obligatoria. Ciento treinta y cinco laboratorios (34%) respondieron a la totalidad de las preguntas; de ellos cerca del 75% procesaba entre 1 y 10 estudios micológicos mensuales y alrededor del 10% hacía lo propio con más de 50. Alrededor del 35% de los participantes refirió capacidad para determinar el género de hongo dermatofito aislado y otro 35%, de establecer, además, la especie. Cifras similares correspondieron a la identificación de levaduras del género Candida, mientras que con los aislamientos de Aspergillus, Mucorales e Histoplasma capsulatum, entre 20 y 40% de los laboratorios refirieron incapacidad para reconocerlos. El 22% de los laboratorios refirió identificar a Pneumocystis jiroveci en secreciones respiratorias, empleando para ello el 87%, la coloración de Giemsa. Más del 95% de los laboratorios respondió no determinar la susceptibilidad antifúngica in vitro de los aislamientos ni la presencia de anticuerpos específicos, así como tampoco realizar pruebas cutáneas de lectura retardada con antígenos fúngicos. La mayor parte de los laboratorios participantes pueden clasificarse como de “baja complejidad” y muchos deberán esforzarse para mejorar su capacidad de identificación de las especies fúngicas de importancia médica.<hr/>An anonymous and not compulsory inquiry among participant laboratories in the Mycology Sub-Program of the Quality Assurance System (QAS) from Fundación Bioquímica Argentina was carried out in order to evaluate their capacity for identification of fungal species and the type and number of mycological practices performed by them. One hundred and thirty five laboratories (34%) answered the formulated questions whom Nearly 75% of them processed monthly 1-10 mycologycal studies and nearly 10% did the same with ≥ 50. About 35% of the participants referred to their ability to determine the genus of the isolated dermatophytes and other 35% stated they were also able to identify the species. Similar values corresponded to the identification of yeasts of the genus Candida, while 20-40% of the laboratories said they were unable to recognize the isolates of Aspergillus, Mucorales and Histoplasma capsulatum. Twenty two per cent of the laboratories admitted being able to identify Pneumocystis jiroveci in respiratory samples, 87% of them using the Giemsa stain. More than 95% of the laboratories answered that they determine neither the antifungal susceptibility in vitro of the isolated strains nor the presence of specific antibodies, or the delayed skin tests with fungal antigens. Most participant laboratories can be classified as “low complexity” and most of them should have to make an effort to improve their capacity of identification of medically important fungal species. <![CDATA[Toxocara canis en caninos.: Prevalencia en la ciudad de La Plata]]> http://www.scielo.org.ar/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0325-29572006000100007&lng=es&nrm=iso&tlng=es Toxocara canis es un parásito intestinal muy común en caninos que produce diversas lesiones y síntomas. En humanos Toxocara canis es el agente causal de síndromes de variada gravedad como larva migrans visceral, larva migrans ocular, toxocarosis neurológica y toxocarosis encubierta. El objetivo de este trabajo fue determinar la prevalencia de Toxocara canis en caninos con y sin dueños en la ciudad de La Plata. Fueron examinados 250 animales: 105 machos, 93 hembras de hasta un año de edad y 52 hembras adultas. La técnica diagnóstica empleada fue el método de Fülleborn. El 42% de las muestras fueron positivas para huevos de Toxocara canis. La positividad respecto a edad y sexo resultó, en los caninos de hasta un año de edad, 41 hembras y 47 machos, y 17 hembras adultas. La distribución de positividad respecto a tenencia fue de 64 animales sin dueño y 41 animales con dueño. La población canina sin dueño de la ciudad de La Plata estuvo más infectada que el grupo con dueño. Sin embargo, este grupo presentó también un alto porcentaje de positividad (32,8%).<hr/>Toxocara canis is an intestinal parasite, which is very common in dogs and which produces diverse lesions and symptoms. In humans, Toxocara canis is the causal agent of syndromes of varied seriousness such as: visceral larva migrans, ocular larva migrans, neurological toxocarosis and covert toxocarosis. The aim of this work was to determine the prevalence of Toxocara canis in dogs , with or without owners in the city of La Plata. Two-hundred and fifty dogs were examined: 105 males and 93 females up to 1 year old, and 52 adult females. The diagnostic technique performed on the faeces was the Fulleborn method. Forty-two percent 42% of the samples were positive for Toxocara canis eggs. Positivity as regards age and sex: up to 1-year-old group 41 females and 47 males, 17 adult females. Distribution of positivity as regards ownership: 64 ownerless animals and 41 animals with owners. The ownerless dog population of the city of La Plata showed to be more infected than the group with owners.Nevertheless,in the latter, there was also a high percentage of positivity (32,8%). <![CDATA[Conceptos actuales del metabolismo del glutatión Utilización de los isótopos estables para la evaluación de su homeostasis]]> http://www.scielo.org.ar/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0325-29572006000100008&lng=es&nrm=iso&tlng=es El glutatión (GSH) juega un papel fundamental en la protección celular contra la injuria oxidativa. Los cambios de la concentración de GSH en sangre podrían dar una medida del stress oxidativo in vivo. El GSH disminuye con el envejecimiento, el ejercicio violento y también en ciertas patologías como diabetes, fibrosis quística, SIDA, cirrosis, infecciones, malnutrición proteica y tratamientos quimioterápicos, entre otros. El rol del GSH en diferentes funciones fisiológicas y en diversas patologías puede estudiarse empleando moléculas etiquetadas con isótopos estables, como por ejemplo con 13C. La cinética del 13CO2, generado a partir de un 13C-sustrato, constituye una herramienta útil en el estudio de rutas metabólicas. La 13C-oxatiazolidina carboxilato (OTC) permite evaluar el balance del glutatión en diferentes condiciones patológicas y fisiológicas, determinando el estado redox en cada situación. En este trabajo se discuten aspectos básicos del metabolismo del glutatión y su vinculación con determinadas patologías en el hombre; también se analiza la utilización de los isótopos estables como una herramienta no invasiva para evaluar el balance de glutatión en seres humanos.<hr/>Glutathione (GSH) plays an important role against free radicals, its blood concentration showing a strong correlation with in vivo oxidative stress. GSH concentration decreases with aging, strong fitness and oxidative stress among other pathologies like diabetes, cystic fibrosis, AIDS, cirrhosis, infections, protein malnutrition and chemotherapy treatments. The GSH performance in different physiological functions and diverse pathologies can be studied using labeled molecules with stable isotopes, for instance using 13C. The kinetic of the 13CO2, generated from a 13C-substrate, constitutes a useful tool for the studies of metabolic routes. The carboxilato 13C-oxatiazolidina (OTC) enables the evaluation of the glutathione balance in different pathological and physiological conditions, determining the redox state in each situation. In this work, different basic aspects of glutathione metabolism are discussed, as well as its relationship with different pathologies. The usefulness of stable isotopes is also analyzed as a non invasive tool for determining glutathione balance in human beings. <![CDATA[Consecuencias del tipo de actividad laboral sobre algunos indicadores bioquímicos de riesgo aterogénico.: Estudio en población geriátrica del nordeste argentino]]> http://www.scielo.org.ar/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0325-29572006000100009&lng=es&nrm=iso&tlng=es La actividad laboral puede desencadenar cambios que repercuten en el estado de salud. El propósito de este trabajo fue indagar las consecuencias que distintos tipos de actividad laboral pudieran haber producido sobre algunos parámetros bioquímicos indicadores de riesgo aterogénico en población senil. Se estudiaron 320 personas sanas de ambos sexos, con edades de 60 a 92 años, residentes en las provincias de Corrientes, Chaco y Misiones. A partir de un diseño en bloques se efectuó análisis de la variancia por modelo lineal a dos vías. Los promedios generales obtenidos en plasma para glucosa (5,17 ± 0,71 mmol/L), fructosamina (332 ± 50 µmol/L), colesterol total (5,64 ± 1,19 mmol/L), triglicéridos (1,48 ± 0,32 mmol/L) y lipoproteína beta (54,6 ± 8,2%) resultaron más altos que los admitidos para población general. Por su parte, las lipoproteínas alfa (34,5 ± 5,1%) y pre-beta (10,9 ± 2,3%) se ajustaron a dicho intervalo de referencia. Los indicadores de riesgo aterogénico resultaron significativamente más bajos en los gerontes laboralmente inactivos. Las tareas sedentarias se plasmaron en desfavorables niveles lipídicos y las ocupaciones de alto riesgo en altos valores glucídicos. Los oficios que demandaron esfuerzo físico y poca tensión emocional sugirieron un mejor equilibrio metabólico. Se confirma que en la tercera edad los indicadores de riesgo aterogénico son afectados por el tipo de actividad laboral.<hr/>Job type is able to cause changes that could affect health. The aim of this study was to investigate the job activity influence on some atherogenic risk biochemical indicators in elderly people, who are exposed to higher risk due to ageing. Both sexes people from Corrientes, Chaco and Misiones provinces (60 to 92 years old, n = 320), were studied through a blocks design. Analysis of variance was performed by two-way linear model. General means obtained for plasmatic glucose (5.17 ± 0.71 mmol/L), fructosamine (332 ± 50 µmol/L), total cholesterol (5.64 ± 1.19 mmol/L), triglycerides (1.48 ± 0.32 mmol/L) and beta lipoprotein (54.6 ± 8.2%) were higher than those obtained in the general population. On the other hand, alpha lipoprotein (34.5 ± 5.1%) and pre-beta lipoprotein (10.9 ± 2.3%) remained within that reference interval. Atherogenic risk indicators were significantly lower in retired elderly people. Studied parameters were significantly influenced by occupation developed along life. Unfavorable lipid levels were found in sedentary occupations, and high carbohydrate values were registered in high risk activities. Studied parameters remained more balanced in occupations that required high physical effort and low emotional tension. Results obtained in elderly people confirm that atherogenic risk indicators are affected by the job type. <![CDATA[Inhibición del factor tisular por lipoproteínas de baja densidad*]]> http://www.scielo.org.ar/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0325-29572006000100010&lng=es&nrm=iso&tlng=es Las lipoproteínas de baja densidad (LDL) se cuentan entre los inhibidores circulantes de la actividad procoagulante del factor tisular. El objetivo del trabajo fue explorar el comportamiento electroforético de las proteínas involucradas y la cinética de inhibición que permitieran desarrollar un ensayo cuantitativo in vitro capaz de poner en evidencia dicha capacidad. El ensayo cinético consistió en incubar tromboplastina cálcica comercial a 37 ºC con volúmenes crecientes de LDL aislada por precipitación selectiva redisuelta; se realizó a distintos tiempos el tiempo de protrombina en una etapa; se calcularon las actividades respectivas y el porcentaje de inhibición de la coagulabilidad respecto a un blanco. Los resultados muestran inhibición creciente hasta los 60 min en el intervalo entre 0,013 y 0,026 nmol de apoB, parámetros que definen las condiciones seleccionadas del ensayo que aplicado sobre 30 muestras de personas normolipémicas de ambos sexos (edades entre 30 y 70 años) presentó una media +/- SEM de 2.512 +/- 101,4 expresadas en porcentaje de inhibición de la coagulabilidad / nmol de apoB, hallando diferencia significativa en la condición diabética. El comportamiento electroforético, evaluado a tiempo cero mostró dos bandas pre-beta y beta, atribuibles a la tromboplastina y a la LDL respectivamente; en tanto que luego de incubar 60 min se observó una única banda intensificada de migración pre-beta que se podría atribuir a la presencia del complejo LDL - factor tisular. Son necesarios estudios clínicos que permitan evaluar los alcances de aplicación de los ensayos propuestos.<hr/>The objective of the present work was to explore the electrophoretic mobility of the involved proteins and the kinetic of pro - coagulant activity inhibition, that allow us to propose a quantitative in vitro assay of potential clinical use. For the kinetic assay, commercial calcic thromboplastine was incubated with increasing volumes of redisolved - selectively precipitated LDL at 37 ºC. Then the prothrombine time in one step was made; the inhibitory activity and percentage of inhibition against a blank were calculated. The results show an increasing inhibition of pro-coagulant activity until 60 min between 0.013 - 0.026 nmol apoB. The conditions for the assay of 30 samples of normolipemic individuals (ages between 30 - 70 years old) were selected on the basis of these results. The assay of % coagulation inhibition / nmol apoB showed signficative differences for control group versus diabetic one. The protein electrophoresis showed two bands in pre-beta and beta positions corresponding to thromboplastine and LDL respectively at time zero. After 60 min of incubation one intense band corresponding to LDL - tissue factor complex can be observed. This work proposes a simple assay for the evaluation of LDL role in haemostatic control in pathological conditions, although further clinical assays are still required. <![CDATA[La respuesta inmune innata entre los factores ambientales y el aborto.: Modelo de tolerancia al lipopolisacárido durante la gestación]]> http://www.scielo.org.ar/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0325-29572006000100011&lng=es&nrm=iso&tlng=es El aborto inmunológico del modelo animal CBA/j x DBA/2 es dependiente de factores ambientales tipo liposacárido (LPS) y de una respuesta inflamatoria local exacerbada. Al considerar que ratones deficientes en receptores Tlr4 de la respuesta inmune innata específicos para LPS son resistentes al aborto inducido por la endotoxina, se ha estudiado el efecto de la tolerización con LPS en la prevención del aborto y en la producción de citoquinas placentarias del modelo CBA/j x DBA/2. Para ello se inocularon bajas dosis de LPS en etapas pre y post-implantatorias, y con el fin de analizar el efecto tolerizante, se cultivaron placentas y esplenocitos en presencia de una dosis abortogénica de LPS. Los resultados obtenidos muestran que la inoculación post-implantatoria de 1 µg/día de LPS disminuyó el índice de aborto, mientras que indujo una baja respuesta al desafío con altas dosis de LPS en la síntesis de IL-6, tanto en bazo como en placenta. Sin embargo, el mismo desafío incrementó los niveles de TNF-a en placenta, aunque los disminuyó en bazo. A partir de estos resultados se puede concluir que la inducción de tolerancia al LPS es dependiente del órgano y de la citoquina estudiada.<hr/>The exacerbated local inflammatory response that triggers immunological abortion on CBA/j x DBA/2 murine model depends on environmental factors such as LPS. Since deficient Tlr4 mice are resistant to LPS-induced abortion, the effect of LPS tolerization on the prevention of fetal losses, as well as on the synthesis of placental cytokines on CBA/j x DBA/2 model has been studied. Low doses of LPS were inoculated during pre and post-implantatory stages on CBA/j pregnant mice. In order to investigate tolerization effect, abortogenic doses of LPS were added to placental and splenocyte cultures. Results obtained with post-implantatory inoculation of 1µg/day LPS showed a decrease in the abortion rate as well as an IL-6 hyporesponsive to LPS booster, both in placenta and splenocyte cultures. However, stimulation with abortogenic dose of LPS modified TNF-a levels by an increase in placenta but a decrease in splenocyte culture supernatants. Considering these results, it can be concluded that LPS tolerance induction depends on the organ as well as on the cytokine studied. <![CDATA[Screening de macroprolactina con polietilenglicol: límite de corte]]> http://www.scielo.org.ar/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0325-29572006000100012&lng=es&nrm=iso&tlng=es La prolactina (PRL), de acuerdo a su tamaño molecular, se puede encontrar en circulación como un monómero de 23 kDa (little PRL), un dímero de 45 kDa (big PRL) o como macroprolactina ( big-big PRL o MPRL). La MPRL, en la mayoría de los casos, está formada por una molécula monomérica y una inmunoglobulina G (IgG). La cromatografía por filtración en gel se considera el método patrón para determinar las diferentes formas moleculares. La precipitación con polietilenglicol (PEG) al 25% resulta un método alternativo para realizar el screening de MPRL. El objetivo de este trabajo fue establecer un valor de corte para determinar la presencia de MPRL utilizando PEG y el sistema IRMA DPC para dosar PRL. Se analizaron 172 sueros: 20 muestras con niveles de PRL menores a 18 ng/mL y 152 muestras con PRL mayores a 30 ng/mL. En los sueros con PRL menor a 18 ng/mL el porcentaje de recuperación de prolactina monomérica post PEG fue de 106 ± 11% (X ± 2 DE) y menor al 50% en el 23% de las muestras con PRL mayor a 30 ng/mL. Se cromatografiaron 6 muestras con porcentajes de recuperación de prolactina monomérica post PEG menor al 50% y 3 muestras con porcentaje de recuperación mayor al 50%. Recuperaciones de PRL monomérica menores al 50%, correspondieron a perfiles cromatográficos con incremento de la MPRL. Los resultados obtenidos permitieron establecer un valor de corte del 50% al precipitar con PEG. Sin embargo, por tratarse de un método inespecífico, recuperaciones de PRL monomérica entre 40% y 60% deberían confirmarse por cromatografía.<hr/>The prolactin hormone (PRL) is a heterogeneous protein molecule found principally in three forms according to its size: monomeric (little PRL-23 kDa), dimeric form (big PRL-50 kDa) and macroprolactin (big-big PRL@ 150 - 170 kDa). The macroprolactin is formed, generally, by the association between the monomeric molecule and IgG immunoglobulins. The gel filtration chromatography (GFC) is considered the gold standard method for studying this macroprotein, but it is impractical and expensive. However, screening with precipitation with PEG 6000 is another method that is much more simple and inexpensive, but which needs to be previously validated by GFC. The objective of the authors was to establish a cut off to do the macroprolactin screening, using the precipitation with PEG and the DPC IRMA system. Twenty samples with serum levels of prolactin less than 18 ng/mL and 152 samples with serum prolactin levels greater than 30 ng/mL were analyzed. In patients with serum levels of PRL less than 18 ng/mL, the percentage of recovery of little PRL was 106 ± 11% (X ± 2 SD) and values lower than 50% were found in 23% of the samples with serum Prl greater than 30 ng/mL. In view of the percentage of recovery of PRL post precipitation with PEG, 6 samples with values of PRL lower than 50% of recovery post PEG and 3 greater than 50% were selected and chromatographed. In this work, a cut-off of 50% for the PEG method was found and GFC for all the samples between 40-60% of recovery is recommended. <![CDATA[Guías del laboratorio para screening, diagnóstico y monitoreo de la injuria hepática]]> http://www.scielo.org.ar/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0325-29572006000100013&lng=es&nrm=iso&tlng=es La prolactina (PRL), de acuerdo a su tamaño molecular, se puede encontrar en circulación como un monómero de 23 kDa (little PRL), un dímero de 45 kDa (big PRL) o como macroprolactina ( big-big PRL o MPRL). La MPRL, en la mayoría de los casos, está formada por una molécula monomérica y una inmunoglobulina G (IgG). La cromatografía por filtración en gel se considera el método patrón para determinar las diferentes formas moleculares. La precipitación con polietilenglicol (PEG) al 25% resulta un método alternativo para realizar el screening de MPRL. El objetivo de este trabajo fue establecer un valor de corte para determinar la presencia de MPRL utilizando PEG y el sistema IRMA DPC para dosar PRL. Se analizaron 172 sueros: 20 muestras con niveles de PRL menores a 18 ng/mL y 152 muestras con PRL mayores a 30 ng/mL. En los sueros con PRL menor a 18 ng/mL el porcentaje de recuperación de prolactina monomérica post PEG fue de 106 ± 11% (X ± 2 DE) y menor al 50% en el 23% de las muestras con PRL mayor a 30 ng/mL. Se cromatografiaron 6 muestras con porcentajes de recuperación de prolactina monomérica post PEG menor al 50% y 3 muestras con porcentaje de recuperación mayor al 50%. Recuperaciones de PRL monomérica menores al 50%, correspondieron a perfiles cromatográficos con incremento de la MPRL. Los resultados obtenidos permitieron establecer un valor de corte del 50% al precipitar con PEG. Sin embargo, por tratarse de un método inespecífico, recuperaciones de PRL monomérica entre 40% y 60% deberían confirmarse por cromatografía.<hr/>The prolactin hormone (PRL) is a heterogeneous protein molecule found principally in three forms according to its size: monomeric (little PRL-23 kDa), dimeric form (big PRL-50 kDa) and macroprolactin (big-big PRL@ 150 - 170 kDa). The macroprolactin is formed, generally, by the association between the monomeric molecule and IgG immunoglobulins. The gel filtration chromatography (GFC) is considered the gold standard method for studying this macroprotein, but it is impractical and expensive. However, screening with precipitation with PEG 6000 is another method that is much more simple and inexpensive, but which needs to be previously validated by GFC. The objective of the authors was to establish a cut off to do the macroprolactin screening, using the precipitation with PEG and the DPC IRMA system. Twenty samples with serum levels of prolactin less than 18 ng/mL and 152 samples with serum prolactin levels greater than 30 ng/mL were analyzed. In patients with serum levels of PRL less than 18 ng/mL, the percentage of recovery of little PRL was 106 ± 11% (X ± 2 SD) and values lower than 50% were found in 23% of the samples with serum Prl greater than 30 ng/mL. In view of the percentage of recovery of PRL post precipitation with PEG, 6 samples with values of PRL lower than 50% of recovery post PEG and 3 greater than 50% were selected and chromatographed. In this work, a cut-off of 50% for the PEG method was found and GFC for all the samples between 40-60% of recovery is recommended. <![CDATA[Nueva vacuna contra la brucelosis]]> http://www.scielo.org.ar/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0325-29572006000100014&lng=es&nrm=iso&tlng=es La prolactina (PRL), de acuerdo a su tamaño molecular, se puede encontrar en circulación como un monómero de 23 kDa (little PRL), un dímero de 45 kDa (big PRL) o como macroprolactina ( big-big PRL o MPRL). La MPRL, en la mayoría de los casos, está formada por una molécula monomérica y una inmunoglobulina G (IgG). La cromatografía por filtración en gel se considera el método patrón para determinar las diferentes formas moleculares. La precipitación con polietilenglicol (PEG) al 25% resulta un método alternativo para realizar el screening de MPRL. El objetivo de este trabajo fue establecer un valor de corte para determinar la presencia de MPRL utilizando PEG y el sistema IRMA DPC para dosar PRL. Se analizaron 172 sueros: 20 muestras con niveles de PRL menores a 18 ng/mL y 152 muestras con PRL mayores a 30 ng/mL. En los sueros con PRL menor a 18 ng/mL el porcentaje de recuperación de prolactina monomérica post PEG fue de 106 ± 11% (X ± 2 DE) y menor al 50% en el 23% de las muestras con PRL mayor a 30 ng/mL. Se cromatografiaron 6 muestras con porcentajes de recuperación de prolactina monomérica post PEG menor al 50% y 3 muestras con porcentaje de recuperación mayor al 50%. Recuperaciones de PRL monomérica menores al 50%, correspondieron a perfiles cromatográficos con incremento de la MPRL. Los resultados obtenidos permitieron establecer un valor de corte del 50% al precipitar con PEG. Sin embargo, por tratarse de un método inespecífico, recuperaciones de PRL monomérica entre 40% y 60% deberían confirmarse por cromatografía.<hr/>The prolactin hormone (PRL) is a heterogeneous protein molecule found principally in three forms according to its size: monomeric (little PRL-23 kDa), dimeric form (big PRL-50 kDa) and macroprolactin (big-big PRL@ 150 - 170 kDa). The macroprolactin is formed, generally, by the association between the monomeric molecule and IgG immunoglobulins. The gel filtration chromatography (GFC) is considered the gold standard method for studying this macroprotein, but it is impractical and expensive. However, screening with precipitation with PEG 6000 is another method that is much more simple and inexpensive, but which needs to be previously validated by GFC. The objective of the authors was to establish a cut off to do the macroprolactin screening, using the precipitation with PEG and the DPC IRMA system. Twenty samples with serum levels of prolactin less than 18 ng/mL and 152 samples with serum prolactin levels greater than 30 ng/mL were analyzed. In patients with serum levels of PRL less than 18 ng/mL, the percentage of recovery of little PRL was 106 ± 11% (X ± 2 SD) and values lower than 50% were found in 23% of the samples with serum Prl greater than 30 ng/mL. In view of the percentage of recovery of PRL post precipitation with PEG, 6 samples with values of PRL lower than 50% of recovery post PEG and 3 greater than 50% were selected and chromatographed. In this work, a cut-off of 50% for the PEG method was found and GFC for all the samples between 40-60% of recovery is recommended. <![CDATA[Optimization of Methylenetetrahydrofolate Reductase C677T polimorphism detection]]> http://www.scielo.org.ar/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0325-29572006000100015&lng=es&nrm=iso&tlng=es A mutação (C677T) no gene que codifica a enzima metilenotetrahidrofolato redutase (MTHFR) tem sido associada a hiperhomocisteinemia e possivelmente ao risco elevado para doenças vasculares. O objetivo deste trabalho foi otimizar sua detecção por PCR para faciliar estudos populacionais. Foram testadas metodologias alternativas de purificação do DNA genômico humano e os resultados obtidos permitiram padronizar uma técnica com redução de reagentes para extração de DNA por precipitação com NaCl. Foram realizados experimentos variando a concentração dos componentes da reação de PCR que permitiram definir que reações contendo metade do volume inicial de deoxinucleotídeos e iniciadores (primers), assim como 0,5U de Taq DNA polimerase produzem essencialmente a mesma quantidade de amplificado que a reação anteriormente utilizada. Testou-se ainda, a redução do volume da reação de PCR com objetivo de utilizar o produto de amplificação diretamente para digestão com a enzima HinfI, evitando assim, etapas de pipetagem que acarretam em risco de contaminação. Obteve-se sucesso com 15 mL de volume final; que permitiu a utilização do sistema de PCR completo para digestão do produto amplificado. A importância deste estudo pode ser justificada pela significância que as doenças vasculares apresentam em termos populacionais e por este polimorfismo estar potencialmente relacionado com o risco de DAC (doença artério-coronariana) precoce.<hr/>A common mutation C677T in methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR) gene, involved in the metabolism of homocysteine, has been suggested to play a role in increasing cardiovascular disease risk. In order to facilitate the obtainment of population data, the objective of this work was improve its PCR detection. Leucocytes DNA purification alternative protocols were tested and a new low cost method of NaCl precipitation was developed. The composition of PCR mixture was also tested and it defined that the concentration of deoxynucleotides, primers and Taq DNA polimerase could be reduced in a half. The final volume of PCR mixture was reduced to 15 µL, enabling the utilization of the same tube to amplification and HinfI digestion processes, avoiding extra steps. The significance of cardiovascular disease in populational data and the possibility of involvement of this mutation as risk factor of precocious ACD (arterial cardiovascular disease) justify this work.