Scielo RSS <![CDATA[Revista argentina de microbiología]]> http://www.scielo.org.ar/rss.php?pid=0325-754120100001&lang=es vol. 42 num. 1 lang. es <![CDATA[SciELO Logo]]> http://www.scielo.org.ar/img/en/fbpelogp.gif http://www.scielo.org.ar <![CDATA[Trabajo interdisciplinario e interinstitucional: ser o no ser]]> http://www.scielo.org.ar/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0325-75412010000100001&lng=es&nrm=iso&tlng=es <![CDATA[Preparación de un lote semilla de trabajo de BCG y control de calidad por genotipificación por PCR]]> http://www.scielo.org.ar/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0325-75412010000100002&lng=es&nrm=iso&tlng=es The bacillus Calmette-Guérin (BCG) was obtained in 1920 after successive passages leading to the attenuation of a Mycobacterium bovis strain. For the following 40 years, BCG had been replicated, resulting in substrains with genotypic and phenotypic differences. Several genomic studies have compared two BCG strains, M. bovis and Mycobacterium tuberculosis, and observed that deleted regions in the different strains could be related to differences in antigenic properties. In this work, a working seed lot was obtained from a lyophilized secondary seed lot from the BCG Pasteur strain 1173 P2 and genetically characterized. The genome was analyzed by PCR directed to five regions (RD1, RD2, RD14, RD15, DU2), using the seed lot and different available strains as templates. No genetic differences were found in the fragments studied as compared to the Pasteur strain. A total of 20 passages were carried out and no differences were found in the size of the fragments amplified by PCR. In conclusion, this method allows to control a working seed lot genotypically and to assess the stability of the BCG genome.<hr/>El bacilo de Calmette-Guérin (BCG) se obtuvo en 1920, después de sucesivos pasajes que llevaron a la atenuación de una cepa de Mycobacterium bovis. A lo largo de los 40 años subsiguientes la cepa BCG fue replicada y surgieron subcepas con diferencias fenotípicas y genotípicas. Se realizaron varios estudios de comparación genómica de diferentes cepas de BCG, M. bovis y Mycobacterium tuberculosis, y se observó que las deleciones de regiones en las diferentes cepas podrían estar relacionadas con diferencias en las propiedades antigénicas. En este trabajo se describe la preparación y caracterización genética de un lote semilla de trabajo obtenido a partir de un lote semilla secundaria liofilizado de la cepa BCG Pasteur 1173 P2. Se analizaron por PCR cinco regiones (RD1, RD2, RD14, RD15, DU2) en el lote semilla de trabajo utilizando como control las diferentes cepas disponibles. No se hallaron diferencias genéticas en los fragmentos estudiados al comparar el lote semilla de trabajo con la cepa BCG Pasteur 1173 P2. Asimismo, se efectuaron hasta 20 pasajes y no se encontraron diferencias en el tamaño de los fragmentos amplificados por PCR. En conclusión, se ha puesto a punto un método que permite controlar el genotipo de un lote semilla de trabajo y evaluar la estabilidad del genoma del BCG. <![CDATA[Evaluación de los patrones de neutralización de las únicas cinco cepas argentinas descritas de arteritis viral equina]]> http://www.scielo.org.ar/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0325-75412010000100003&lng=es&nrm=iso&tlng=es Equine viral arteritis (EVA) is a contagious viral disease that frequently causes mild or subclinical infections in adult horses. Only one EAV serotype has been described. However, there are differences in antigenicity, pathogenicity and neutralization characteristics of virus field strains. The interaction of two viral proteins, GP5 and M, is critical for infectivity and amino acid changes in the GP5 sequences have an effect on the neutralizing phenotype, regardless the effects of other viral proteins. The objective of the present study was to evaluate the neutralization phenotypes of the 5 unique Argentine EAV strains reported and to compare them with the neutralization phenotypes of the EAV-UCD reference strain, with special emphasis on the analysis of M and GP5 proteins. The strains had a similar neutralization phenotype pattern when anti-EAV serum, derived from EAV seropositive horses, was used in the analysis. Meanwhile, low titers were observed when equine polyclonal anti-EAV reference sera were used in the assay. Argentine strains have almost the same amino acid substitutions, with the exception of LP01 strain, that mainly involves the first variable region V1, especially in neutralization sites B and C. However, they are fairly different from the EAV-UCD strain. Nevertheless, the nucleotide and amino acid differences observed among the Argentine strains LP02/R, LP02/C, LP02/P and LP-LT-ARG did not show any variations in the neutralization phenotype.<hr/>La arteritis viral equina (AVE) ocasiona infecciones, en su mayoría subclínicas, pero puede causar abortos y enfermedad respiratoria. Si bien se ha descrito un solo serotipo de AVE, existen diferencias en cuanto a la antigenicidad, patogenicidad y patrones de neutralización en las cepas de campo. Los ORF5 y ORF6 del virus codifican las proteínas de envoltura GP5 y M; la interacción entre estas proteínas es crítica para la infectividad. Los cambios en las secuencias de aminoácidos en la proteína GP5, especialmente en la región V1, afectan el fenotipo neutralizante, sin tener en cuenta variaciones aminoacídicas de otras proteínas virales. En este estudio evaluamos los fenotipos neutralizantes de las 5 únicas cepas de arteritis viral equina aisladas en Argentina y los comparamos con los de la cepa de referencia EAV-UCD por virus neutralización cruzada y análisis de secuencias aminoacídicas de las proteínas M y GP5. Las cepas argentinas presentaron un patrón de neutralización similar cuando se utilizaron sueros positivos del banco de sueros, mientras que fueron neutralizadas en menor medida por los sueros policlonales de referencia anti-AVE. A excepción de la cepa LP01, las cepas argentinas tienen casi las mismas sustituciones aminoacídicas en la primera región variable V1 de la proteína GP5, específicamente en los sitios neutralizantes B y C, pero difieren en gran medida respecto de la cepa de referencia EAV-UCD. Las diferencias encontradas en los aislamientos LP02/R, LP02/C, LP02/P y LT-LP-ARG no se reflejaron en variaciones en el fenotipo neutralizante. <![CDATA[Efecto de Mycoplasma y del agente de eliminación de micoplasmas en la actividad de las hidrolasas en fibroblastos de pacientes con enfermedades lisosomales]]> http://www.scielo.org.ar/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0325-75412010000100004&lng=es&nrm=iso&tlng=es This study was designed to evaluate the effect of mycoplasma contamination on acid hydrolase activity and the action of the mycoplasma removal agent (MRA), in cultures of human fibroblasts from individuals with lysosomal diseases. For this purpose, we measured the activity of the b-galactosidase, arylsulphatase B (ASB), hexosaminidase A and a-glucosidase enzymes. The activity of the above mentioned enzymes in fibroblasts contaminated by mycoplasma was measured before and after the addition of the MRA. The results were then compared to the enzymatic activity in contamination-free cultures. Only the ASB enzyme showed significant alteration in activity both in the presence of mycoplasma and MRA. The remaining enzymes did not suffer significant interference by the presence of the two agents. Of the four enzymes tested, three did not suffer significant alterations by the presence of the mycoplasma nor from the MRA. However, the activity measured in the ASB enzyme increased significantly in the presence of mycoplasma and MRA and could lead to a doubtful diagnosis. Therefore, we suggest that contamination should be prevented by using aseptic techniques as well as the MRA in those fibroblast cultures that cannot be discarded.<hr/>Este estudio fue diseñado para evaluar el efecto de la contaminación por micoplasmas sobre la actividad de hidrolasas ácidas y la acción del agente de eliminación de micoplasmas (MRA) en cultivos de fibroblastos humanos de pacientes con enfermedades lisosomales. Se midió la actividad de la b-galactosidasa, arilsulfatasa B (ASB), hexosaminidasa A y a-glucosidasa en estos cultivos. La actividad de estas enzimas en los fibroblastos contaminados por micoplasmas se midió antes y después de la adición de MRA. Los resultados se compararon con los obtenidos en cultivos libres de contaminación. Sólo la enzima ASB demostró alteración significativa en la actividad, tanto en presencia de micoplasmas como con la adición de MRA. Las enzimas restantes no sufrieron alteraciones significativas en presencia de micoplasmas, ni tras la adición de MRA. La actividad medida para la enzima ASB aumentó significativamente en presencia de micoplasmas y MRA, lo que podría conducir a un diagnóstico dudoso. Por lo tanto, sugerimos evitar la contaminación con micoplasmas mediante el uso de técnicas asépticas y la utilización de MRA en los cultivos de fibroblastos que no se puedan descartar. <![CDATA[Detección de genes que codifican proteínas mosquitocidas Cry11 de Bacillus thuringiensis mediante un método de PCR-RFLP novedoso]]> http://www.scielo.org.ar/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0325-75412010000100005&lng=es&nrm=iso&tlng=es A polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) method for detection of cry11 genes from Bacillus thuringiensis was established. Based on the analysis of conserved regions of the cry11 genes, 2 oligonucleotide primers were designed to amplify a 1459-bp fragment of the cry11Aa gene, and a 1471-bp of the cry11Ba and cry11Bb genes. The amplification products were digested with restriction endonuclease HinfI. Exotic B. thuringiensis strains and native isolates collected from soils, leaves and stored product dust of Argentina were analyzed to study the distribution of cry11 genes. The PCR-RFLP patterns revealed the detection of cry11 genes in 3 of 64 exotic strains and in 10 of 107 native B. thuringiensis isolates tested. Just the cry11Aa gene subclass was detected among these bacteria. Since the methodology was also developed to detect cry11Ba and cry11Bb genes, an experimental future confirmation will be required. Based on the results obtained, the PCR-RFLP method presented may be a valuable tool for specific detection of the mosquitocidal toxin genes encoding Cry11 proteins from B. thuringiensis.<hr/>En el presente estudio se estableció una estrategia basada en la amplificación génica (PCR) y el posterior análisis de restricción (RFLP) para detectar todos los genes cry11 de Bacillus thuringiensis informados hasta ahora. De acuerdo con el análisis de las regiones conservadas en los genes cry11, se diseñaron dos cebadores para amplificar un fragmento de 1459 pb de los genes cry11Aa y un fragmento de 1471 pb de los genes cry11Ba y cry11Bb. Los productos de la amplificación fueron digeridos con la enzima de restricción HinfI. Se analizaron cepas exóticas de B. thuringiensis y aislamientos nativos de Argentina obtenidos a partir de muestras de suelos, hojas y polvillo de silos, para estudiar la distribución de los genes cry11. Los patrones de PCR-RFLP revelaron la presencia de genes cry11 en 3 de las 64 cepas exóticas y en 10 de los 107 aislamientos nativos de B. thuringiensis ensayados. Sólo se detectó la subclase cry11Aa entre estas bacterias. Ya que esta metodología fue también desarrollada para detectar genes cry11Ba y cry11Bb, se requeriría una futura confirmación experimental. Los resultados obtenidos nos permiten inferir que el método de PCR-RFLP constituiría una herramienta valiosa para la detección específica de genes que codifican proteínas mosquitocidas Cry11 de B. thuringiensis. <![CDATA[Prevalencia de anticuerpos contra el virus Kilham en colonias experimentales de ratas de Argentina]]> http://www.scielo.org.ar/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0325-75412010000100006&lng=es&nrm=iso&tlng=es The Kilham rat virus (KRV) is a parvovirus originally isolated from a rat sarcoma in the late 1950s. The clinical signs associated with a natural KRV infection include foetal resorption in dams, runtin, ataxia, cerebellar hypoplasia and jaundice in suckling rats, and sudden death, scrotal cyanosis, abdominal swelling and dehydration in juvenile rats. The ability of this virus to produce persistent infections has resulted in a high frequency of contamination of cell cultures and transplantable-tumor system. In addition, the virus may interfere with research in other ways. The remarkable resistance to environmental conditions determines the importance of the detection and control of this agent, especially in the laboratory animal production. This study determines the seroprevalence of Kilham antibodies from sera of adult rats from conventional facilities, using the haemagglutination inhibition test. The seroprevalence varied between 27.8% and 75%. This result confirms that the virus is circulating in Argentinean conventional facilities and might be interfering with research. The recognized Kilham virus may be prevented from supply sources by implementing a health monitoring schedule including a regular serological surveillance, and by keeping the animals under barrier systems.<hr/>El virus Kilham es un parvovirus aislado originalmente a partir de un sarcoma de rata, a fines de la década del 50. Los signos clínicos que produce son reabsorción fetal, disminución del crecimiento, ataxia, hipoplasia cerebelar, ictericia en lactantes, muerte súbita, cianosis escrotal, hinchazón abdominal y deshidratación de ratas jóvenes. La capacidad del virus para producir infecciones persistentes hace que los cultivos celulares derivados de ratas puedan estar contaminados. Además, el virus puede interferir con los ensayos de investigación de diferentes formas. La resistencia a las condiciones ambientales determina la importancia de la detección y el control de este agente, particularmente en la producción de animales de laboratorio. En este estudio se analizó la prevalencia de anticuerpos contra el virus Kilham en ratas adultas provenientes de bioterios convencionales de Argentina utilizando la prueba de inhibición de la hemoaglutinación. La seroprevalencia varió entre 27,8% y 75%. Este resultado confirma que el virus está circulando en los bioterios convencionales de Argentina, por lo que podría estar interfiriendo con las investigaciones. La infección por este virus debe ser prevenida aplicando sistemas de vigilancia y control, y manteniendo a los animales con sistemas de barrera. <![CDATA[Estado de portador nasofaríngeo de Streptococcus pneumoniae en madres e hijos de la población indígena Panare del estado Bolívar, Venezuela]]> http://www.scielo.org.ar/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0325-75412010000100007&lng=es&nrm=iso&tlng=es En América del Norte, los grupos indígenas se han identificado como una población con un riesgo elevado de ser portadora de Streptococcus pneumoniae, así como de desarrollar enfermedad neumocócica invasora. Sin embargo, hay poca información con respecto a los indígenas de Latinoamérica. En el presente estudio se evaluó el estado de portador nasofaríngeo y la distribución de los serotipos de S. pneumoniae en madres e hijos de la población panare de Venezuela. Durante el mes de mayo de 2008 se obtuvieron 148 muestras nasofaríngeas de 64 madres y 84 niños menores de 5 años pertenecientes a 8 comunidades panare. Mediante procedimientos estándares se identificaron 65 cepas de S. pneumoniae. Dichas cepas fueron tipificadas por PCR múltiple, y sus patrones de sensibilidad a los antimicrobianos se determinaron por el método de difusión con discos. El 11% de las madres y el 69% de los niños eran portadores de S. pneumoniae. Los serotipos 6B (49%), 33F (21,5%), 6A (6%), 19A (3,1%) y 23F (1,5%) fueron los más frecuentes. El mismo serotipo se identificó en 3 de los 6 grupos madre-hijo/s colonizados. Todas las cepas fueron sensibles a la penicilina y el 13,7% fue resistente a los macrólidos. La elevada tasa de colonización en la población panare sugiere que los niños presentan un alto riesgo de desarrollar enfermedad invasora por S. pneumoniae; por lo tanto podrían beneficiarse de la vacunación. Cuatro serotipos de la vacuna conjugada (6B, 6A, 19A y 23F), que representaron el 58% de las cepas aisladas, estaban presentes en la población al momento del estudio. La resistencia a los antibióticos no se presenta como un problema dentro de esta población.<hr/>In North America, the indigenous groups have been identified as a population with increased risk of pneumococcal colonization and pneumococcal invasive disease. However, little information is available from South American natives. In the present study we evaluated the nasopharyngeal carriage and serotype distribution of Streptococcus pneumoniae in mothers and children of the Panare people from Venezuela. In May 2008, in 8 distinct geographically isolated communities, 148 nasopharyngeal samples were obtained from 64 healthy mothers and 84 healthy Panare children under 5 years of age. S. pneumoniae was isolated and identified by standard techniques. Strains were typified by multiplex PCR and resistance patterns were determined by the disk diffusion method. A total of 65 strains were isolated; 11% of the mothers and 69% of the children carried S. pneumoniae. Serotypes 6B (48%), 33F (21,5%), 6A (6%), 19A (3,1%) and 23F (1,5%) were the most predominant. Of the 6 colonized mother-child pairs, 3 pairs (2 with 6B), were colonized with the same serotype. All strains were sensitive to penicillin and 13,7% were resistant to macrolides. The high colonization rates in the Panare people suggest that the children are at increased risk of pneumococcal invasive disease and could benefit from vaccination. Four conjugate vaccine serotypes (6B, 6A, 19A and 23F) representing 58 % of all strains were present in the population at the moment of sampling. Resistance to antibiotics is (still) not a problem. <![CDATA[Utilidad de los antígenos preparados con cepas rugosas de Brucella en el diagnóstico de brucelosis canina]]> http://www.scielo.org.ar/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0325-75412010000100008&lng=es&nrm=iso&tlng=es Clinical diagnosis of canine brucellosis is not sensitive enough and a negative blood culture cannot rule out the disease. Indirect methods of serological testing such as agar gel immunodiffusion (AGID), rapid slide agglutination test (RSAT) and indirect enzyme linked immunoassay (IELISA) are preferred for routine diagnosis. Since Brucella canis shares antigenic components with the Brucella ovis and Brucella abortus RB51 strain, it would seem that either strain could be used as antigen. We present data on AGID and IELISA tests using the B. ovis antigen, RSAT and IELISA using the B. canis antigen and IELISA using the B. abortus RB51 antigen. The cut-off values were adjusted by the ROC analysis; the IELISA-B. ovis cut-off value was 23 (%P) and the IELISA-B. abortus RB51, 24 (%P), with 100% sensitivity and 98.8% specificity. RSAT detected 100% of positive cases, while AGID was less sensitive. The sera from dogs treated with antibiotic showed that %P correlated well with the clinical course. Sera from dogs presumptively infected with B. suis were negative in all tests performed with the rough Brucella strains. RSAT is a very sensitive screening test and IELISA-B. canis, B. ovis and B. abortus RB51 could be used as confirmatory tests, since they show good specificity and sensitivity.<hr/>Las técnicas más usadas en el diagnóstico de brucelosis canina son la inmunodifusión en gel de agar (AGID), la microaglutinación en portaobjetos (RSAT) y el ELISA indirecto ya que el diagnóstico clínico es poco sensible y el bacteriológico no excluye la enfermedad. Como Brucella canis comparte componentes antigénicos con Brucella ovis y Brucella abortus RB51, estas cepas podrían ser usadas indistintamente como antígenos. En este trabajo presentamos datos sobre las pruebas de AGID e IELISA con antígeno B. ovis, RSAT e IELISA con antígeno B. canis e IELISA con antígeno B. abortus RB51. Los puntos de corte ajustados con la curva ROC fueron (%P) 23 para IELISA-B. ovis y (%P) 24 para IELISA-RB51 con 100% de sensibilidad y 98,8% de especificidad. RSAT detectó el 100% de los casos positivos, pero AGID fue menos sensible. Los sueros de los perros tratados con antibióticos tuvieron un %P que correlacionó con la evolución clínica. Los perros presumiblemente infectados con B. suis fueron negativos a todos los ensayos realizados con antígenos de cepas de Brucella rugosas. RSAT es muy sensible como prueba tamiz y los IELISA con antígenos de B. canis, B. ovis y B. abortus RB51 podrían ser usados como confirmatorios ya que han demostrado alta sensibilidad y especificidad. <![CDATA[Caracterización molecular de Streptococcus pyogenes causantes de enfermedad invasora y síndrome de shock tóxico estreptocócico]]> http://www.scielo.org.ar/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0325-75412010000100009&lng=es&nrm=iso&tlng=es Streptococcus pyogenes es el agente causal de varias enfermedades comunes entre las que se incluyen la faringoamigdalitis, la escarlatina y el impétigo. Sin embargo, en las últimas décadas se ha registrado mundialmente un resurgimiento de casos de enfermedad invasora y síndrome de shock tóxico estreptocócico (SSTE). El propósito del presente trabajo fue estudiar la diversidad genética, los factores de virulencia (genes spe, sme, ssa) y la sensibilidad a los antibióticos de 10 cepas de S. pyogenes causantes de enfermedad invasora y SSTE. Los aislamientos fueron recuperados de hemocultivos de pacientes internados en el Hospital Santamarina y en la Nueva Clínica Chacabuco (Tandil, Argentina) entre diciembre de 2000 y abril de 2005. Predominaron 2 patrones de electroforesis en campo pulsante. El más frecuente comprendió 5 aislamientos del tipo emm1-T1, con perfil de toxinas speA, speB, speF, speG y smeZ. El segundo patrón más frecuente incluyó 2 aislamientos tipo emm3-TNT (speB, speF, speG). Estos dos tipos (emm1 y emm3) fueron los prevalentes en las infecciones invasoras. Las otras tres cepas correspondieron a los tipos emm49-TNT (speB, speC, speF, speG), emm75-T25 (speB, speF, speG) y emm83-TNT (speB, speF, speG, ssa, smeZ). Se encontró diversidad genética entre las cepas aisladas, pero todos los aislamientos fueron sensibles a penicilina, cefotaxima, eritromicina, clindamicina, cloranfenicol, tetraciclina y rifampicina. Por tal motivo, aún es válido el tratamiento empírico con penicilina asociada a clindamicina.<hr/>Streptococcus pyogenes causes a variety of common human diseases, including pharyngitis, scarlet fever and impetigo. Nevertheless, the past decades have witnessed a worldwide resurgence in invasive disease and streptococcal toxic shock syndrome (STSS). The objective of the present study is to evaluate the genetic diversity, virulence gene distribution (spe, sme and ssa genes) and susceptibility pattern of 10 S. pyogenes isolates causing invasive disease and STSS. The isolates were recovered from blood cultures of hospitalized patients at Hospital Santamarina and Nueva Clínica Chacabuco, Tandil, Buenos Aires, Argentina between 12/2000-04/2005. Two pulse field gel electrophoretic patterns predominated. The most frequent one included 5 characteristic isolates of emm1-T1 type, toxin gene profile speA, speB, speF, speG and smeZ. The second pattern included 2 characteristic isolates of emm3-TNT type (speB, speF, speG). The other 3 isolates corresponded to types emm49-TNT (speB, speC, speF, speG), emm75-T25 (speB, speF, speG) and emm83-TNT (speB, speF, speG, ssa, smeZ). All isolates were susceptible to penicillin, cefotaxime, erythromycin, clindamycin, chloramphenicol, tetracycline and rifampicin. The data from the present study demonstrated genetic diversity among the strains. Types emm1 and emm3 were prevalent in invasive disease. The empirical treatment with the combination of penicillin and clindamicin is still valid. <![CDATA[Caracterización de cepas de Escherichia coli O157 no productoras de toxina Shiga aisladas de perros]]> http://www.scielo.org.ar/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0325-75412010000100010&lng=es&nrm=iso&tlng=es Shiga toxin-negative Escherichia coli O157 strains of various H types have been associated with diarrhea in children and are considered potentially pathogenic for humans. In this study, we describe non-Shiga toxin-producing E. coli O157 E. coli strains previously obtained from dogs in Argentina. Different E. coli phylogenetic lineages corresponding to flagellar types H16, H29 and H45 were identified. E. coli serotypes O157:H16 and O157:H45 contained intimin subtypes e and a1, respectively. Serotype O157:H45 carried the bfp gene encoding the bundle-forming pilus. Localized adherence-like patterns to HEp-2 cells were observed in O157:H16 strains, while O157:H45 adhered in a typical localized pattern. A total of eight different XbaI-pulse field electrophoresis patterns with more than 74 % similarity were identified among the nine E. coli O157:H16 strains. Our data emphasized the fact that dogs may harbor human pathogenic E. coli O157 which do not correspond to Shiga toxin-producing strains and whose potential human health hazard should not be underestimated.<hr/>Cepas de E. coli O157 no productoras de toxina Shiga (Stx) que presentan diversos antígenos flagelares han sido aisladas de niños con diarrea y se consideran potencialmente patógenas para humanos. En el presente trabajo se describen cepas Stx-negativas de E. coli O157 de distintos tipos flagelares previamente aisladas de perros en Argentina. Los tipos flagelares H16, H29 y H45 correspondieron a diferentes grupos filogenéticos. Los serotipos O157:H16 y O157:H45 presentaron los subtipos de intimina e y a1, respectivamente. En el serotipo O157:H45 se detectó la presencia del gen bfp, codificante de la fimbria bundle-forming pili. El patrón de adherencia en células HEp-2 correspondió al tipo simil a localizada para E. coli O157:H16, mientras que O157:H45 mostró adherencia localizada típica. Dentro de las 9 cepas de E. coli O157:H16 estudiadas se detectaron 8 patrones de XbaI-PFGE con más del 74% de similitud. Nuestros datos confirman que los perros pueden ser portadores de E. coli O157 patógenas no productoras de Stx, las que representan un riesgo para la salud pública que no debe ser subestimado. <![CDATA[Resistencia a los antimicrobianos en bacterias indicadoras y zoonóticas aisladas de animales domésticos en Argentina]]> http://www.scielo.org.ar/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0325-75412010000100011&lng=es&nrm=iso&tlng=es Se estudiaron los patrones de resistencia a diversos antimicrobianos en bacterias indicadoras y zoonóticas aisladas de muestras fecales de individuos sanos, sin signología clínica, pertenecientes a los siguientes grupos animales: bovinos, equinos, ovinos, porcinos, gallinas ponedoras y caninos. Los antimicrobianos seleccionados fueron los empleados con mayor frecuencia en medicina veterinaria y humana, y el método de evaluación utilizado fue el de difusión en agar con discos. Los resultados obtenidos a partir de 240 Escherichia coli, 189 Enterococcus spp., 11 Campylobacter spp. y 2 Salmonella Gaminara (16:d:1,7), revelaron un mayor porcentaje de resistencia y multirresistencia en porcinos y aves, esto es, en animales de cría intensiva. El perfil de resistencia observado en los aislamientos de E. coli incluyó a la ampicilina, la estreptomicina, la tetraciclina y el ácido nalidíxico, en coincidencia con los antimicrobianos más utilizados en las explotaciones animales, al igual que lo detectado en Enterococcus spp. respecto a la tetraciclina y la eritromicina. Las cepas de Salmonella Gaminara (16:d:1,7) fueron sensibles a todos los antimicrobianos probados. En Campylobacter spp., si bien el número de aislamientos evaluados fue reducido, se observó una mayor resistencia a tetraciclina y quinolonas. Teniendo en cuenta la falta de datos en nuestro país sobre resistencia a los antimicrobianos en bacterias indicadoras y zoonóticas en animales domésticos, consideramos que la información obtenida podría utilizarse como punto de partida para futuros programas de monitoreo.<hr/>Antimicrobial resistance profiles in indicator and zoonotic bacteria isolated from faeces of healthy animals without clinical signs of the following species: bovine, equine, ovine, porcine, layer hens, and canine, were studied. The chosen antimicrobials are frequently used in veterinary and human medicine. The agar diffusion was the method used. The obtained results of 240 Escherichia coli, 189 Enterococcus spp., 11 Campylobacter spp. and 2 Salmonella Gaminara (16:d:1,7) showed a greater percentage of resistance and multiresistance in intensive breeding animals, porcines and layer hens. The observed resistance to ampicillin, streptomycin, tetracycline and nalidixic acid in E. coli coincides with the antimicrobials most commonly used on animal farms, the same as tetracycline and erithromycin in Enterococcus spp. The strains of Salmonella Gaminara (16:d:1,7) were susceptible to the antimicrobials tested. In Campylobacter spp. the scarce number of isolates hindered an adequate interpretation of the results. Owing to the lack of data in our country on antimicrobial resistance in indicator and zoonotic bacteria in domestic animals, we consider that the obtained values could be used as a starting point for a future monitoring program. <![CDATA[Actividad in vitro de la tigeciclina en aislamientos clínicos de Acinetobacter spp. multirresistentes: Comparación de diferentes métodos de evaluación]]> http://www.scielo.org.ar/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0325-75412010000100012&lng=es&nrm=iso&tlng=es Las infecciones causadas por Acinetobacter spp. multirresistentes (AMR) se han incrementado en todo el mundo; en este contexto, la tigeciclina provee una nueva opción terapéutica para el tratamiento de dichas infecciones. En este trabajo se realizó la validación de una metodología por microdilución (MD) in house frente a la metodología de MD comercial (gold standard) evaluando la sensibilidad de 32 aislamientos de AMR. Asimismo, en un grupo de 60 aislamientos de AMR obtenidos en dos períodos de tiempo diferentes (2000-2003 y 2006-2008) se evaluó la sensibilidad a la tigeciclina mediante las metodologías de MD in house, dilución en agar (DA) y difusión con discos (DD), según lo descrito por el CLSI, y se determinó la CIM90 de este agente frente a los aislamientos obtenidos en cada período. La sensibilidad fue interpretada utilizando los puntos de corte sugeridos por la FDA para Enterobacteriaceae. Se evaluó la correlación entre las metodologías citadas mediante curvas de dispersión y se estimaron los errores de los métodos ensayados. El coeficiente de correlación r entre la técnica de MD in house y la de DA y entre la técnica de MD in house y la de DD fue de 0,68 en ambos casos. La CIM90 por el método de MD in house fue para el período 2002-2003 de 1 μg/ml y para el período 2006-2008 de 2 μg/ml. Utilizando los puntos de corte de la FDA observamos un error menor no admisible (17,6%) por la técnica de DD debido a valores "falsos intermedios", dado que la CIM90 se encontraba entre 1 y 2 μg/ml.<hr/>Infections caused by multidrug resistant (MDRA) Acinetobacter spp. have increased worldwide. Tigecycline provides a new therapeutic option for treating these infections. We conducted a study tailored to validate an in house methodology by broth microdilution (BM) vs. commercial BM in 32 MDRA isolates. Sixty MDRA isolated in 2 time periods (2000-2003 and 2006-2008) were compared by BM, agar dilution (AD) and disk diffusion (DD) methods, as described by the CLSI and the MIC90 for each period was determined. Susceptibility was interpreted by using the breakpoints suggested by the FDA for Enterobacteriaceae. The correlation between the methodologies was performed by a scattergram, and the errors between methods were calculated. The correlation coefficients between AD and BM, and BM and DD were, r: 0.68 in both cases. For 2002-2003, the MIC90 for BM was: 1 g/ml, and for 2006-2008: 2 μg/ml. Using the FDA breakpoints for DD, we observed an unacceptable minor error (17.6%) because of false-intermediate values, considering the MIC90 was 1-2 μg/ml. <![CDATA[Extracción y caracterización de poligaracturonasa de Fomes sclerodermeus producida por fermentación en estado sólido]]> http://www.scielo.org.ar/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0325-75412010000100013&lng=es&nrm=iso&tlng=es Polygalacturonase (PG) production by Fomes sclerodermeus using solid-state fermentation (SSF) was carried out. Maximal PG activity (26 U/gdw) was obtained between days 11 and 13 at the end of exponential growth. PG activity in the crude extract was more stable at pH 5-6 and 30 °C and had optimum activity at pH 5 and 50 °C. Optimal conditions for PG extraction were: one time extraction with Na2SO4 as solvent with 10 min. of agitation. In a scale-up system, PG activity per gram of dry substrate decreased about 60% compared with the activity obtained in an Erlenmeyer flask; however, high total PG activity was obtained.<hr/>Se estudió la producción de poligalacturonasa (PG) por Fomes sclerodermeus usando técnicas de fermentación en estado sólido. La actividad PG máxima (26 U/g ps) fue observada entre los días 11 y 13. La actividad PG en los extractos crudos fue más estable a pH 5-6 y 30 °C, con una actividad óptima a pH 5 y a 50 °C. Las condiciones óptimas para la extracción de PG se lograron con una única extracción empleando Na2SO4 como solvente, con 10 minutos de agitación. En el escalado del sistema, la actividad PG por gramo de peso seco de sustrato disminuyó cerca de 60% comparada con la obtenida en frascos Erlenmeyer, pero la actividad total fue mayor. <![CDATA[Integrones: los coleccionistas de genes]]> http://www.scielo.org.ar/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0325-75412010000100014&lng=es&nrm=iso&tlng=es Los integrones son estructuras genéticas que han despertado gran interés, debido a que algunos de ellos vehiculizan genes de resistencia a los antimicrobianos. Están formados por un fragmento que codifica una integrasa (intI) y, a continuación, una secuencia attI a la que se unen los genes en casetes que codifican diferentes mecanismos de resistencia. Dentro de intI, en su extremo 3´, hay una secuencia promotora Pc a partir de la cual se transcriben los casetes de resistencia integrados, ya que estos genes carecen de promotor. Sin embargo, estos casetes presentan una secuencia específica denominada attC, la cual es reconocida por la integrasa que se une, por recombinación, a la secuencia attI del integrón en la orientación adecuada para su expresión. Los integrones se han clasificado según la secuencia de su integrasa, pero en la actualidad se prefiere clasificarlos según su localización. Se habla, en general, de "integrones móviles" para referirse a aquellos asociados a secuencias de inserción, transposones y/o plásmidos conjugativos, los que en su mayoría median mecanismos de resistencia, y de "superintegrones", de localización cromosómica y con grandes arreglos de genes en casetes. Los integrones móviles de clase 1 son los más abundantes en aislamientos clínicos y suelen estar asociados a transposones del subgrupo Tn21, seguidos por los de clase 2, derivados principalmente de Tn7. Estos elementos no son móviles por sí mismos, pero su asociación con elementos que sí lo son facilita su transferencia horizontal, lo que explica su amplia difusión entre las bacterias. Esta revisión intenta recopilar la información disponible acerca de los integrones móviles descritos en Argentina hasta la fecha.<hr/>Integrons gained great interest due to their participation in resistance gene recruitment and expression. Their basic structure includes a fragment that encodes an integrase (intI) followed by a recognition sequence (attI) into which they may incorporate gene cassettes (encoding resistance mechanisms). A promoter (Pc) embedded within the integrase gene controls the transcription of integrated resistance markers, as these genes do not have their own promoters. When in cassettes, resistance genes are flanked by specific sequences (attC), which are recognized by the integrase that, by site specific recombination, incorporates them after attI in proper orientation for their expression. In the past, integrons were classified according to their sequence homology; currently they are classified according to their location. In general, they are divided into "mobile" integrons (those associated with insertion sequences, transposons and/or plasmids, being most of them associated with resistance mechanisms), and chromosomally-located "super" integrons with large arrangements of cassette genes. "Mobile" class 1 integrons are the most abundant in clinical isolates and are generally associated with Tn21 subgroup transposons, followed by class 2, derived primarily from Tn7. These elements are not mobile themselves, but their association with mobile platforms that facilitate horizontal transfer, explains their wide distribution among bacteria. This review also attempts to describe the mobile integrons described so far in Argentina. <![CDATA[Yersinia enterocolitica en la materia fecal de 6 pacientes pediátricos de la ciudad de Córdoba]]> http://www.scielo.org.ar/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0325-75412010000100015&lng=es&nrm=iso&tlng=es Los integrones son estructuras genéticas que han despertado gran interés, debido a que algunos de ellos vehiculizan genes de resistencia a los antimicrobianos. Están formados por un fragmento que codifica una integrasa (intI) y, a continuación, una secuencia attI a la que se unen los genes en casetes que codifican diferentes mecanismos de resistencia. Dentro de intI, en su extremo 3´, hay una secuencia promotora Pc a partir de la cual se transcriben los casetes de resistencia integrados, ya que estos genes carecen de promotor. Sin embargo, estos casetes presentan una secuencia específica denominada attC, la cual es reconocida por la integrasa que se une, por recombinación, a la secuencia attI del integrón en la orientación adecuada para su expresión. Los integrones se han clasificado según la secuencia de su integrasa, pero en la actualidad se prefiere clasificarlos según su localización. Se habla, en general, de "integrones móviles" para referirse a aquellos asociados a secuencias de inserción, transposones y/o plásmidos conjugativos, los que en su mayoría median mecanismos de resistencia, y de "superintegrones", de localización cromosómica y con grandes arreglos de genes en casetes. Los integrones móviles de clase 1 son los más abundantes en aislamientos clínicos y suelen estar asociados a transposones del subgrupo Tn21, seguidos por los de clase 2, derivados principalmente de Tn7. Estos elementos no son móviles por sí mismos, pero su asociación con elementos que sí lo son facilita su transferencia horizontal, lo que explica su amplia difusión entre las bacterias. Esta revisión intenta recopilar la información disponible acerca de los integrones móviles descritos en Argentina hasta la fecha.<hr/>Integrons gained great interest due to their participation in resistance gene recruitment and expression. Their basic structure includes a fragment that encodes an integrase (intI) followed by a recognition sequence (attI) into which they may incorporate gene cassettes (encoding resistance mechanisms). A promoter (Pc) embedded within the integrase gene controls the transcription of integrated resistance markers, as these genes do not have their own promoters. When in cassettes, resistance genes are flanked by specific sequences (attC), which are recognized by the integrase that, by site specific recombination, incorporates them after attI in proper orientation for their expression. In the past, integrons were classified according to their sequence homology; currently they are classified according to their location. In general, they are divided into "mobile" integrons (those associated with insertion sequences, transposons and/or plasmids, being most of them associated with resistance mechanisms), and chromosomally-located "super" integrons with large arrangements of cassette genes. "Mobile" class 1 integrons are the most abundant in clinical isolates and are generally associated with Tn21 subgroup transposons, followed by class 2, derived primarily from Tn7. These elements are not mobile themselves, but their association with mobile platforms that facilitate horizontal transfer, explains their wide distribution among bacteria. This review also attempts to describe the mobile integrons described so far in Argentina. <![CDATA[Ascosphaera apis, agente etiológico de la cría yesificada de las abejas]]> http://www.scielo.org.ar/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0325-75412010000100016&lng=es&nrm=iso&tlng=es Los integrones son estructuras genéticas que han despertado gran interés, debido a que algunos de ellos vehiculizan genes de resistencia a los antimicrobianos. Están formados por un fragmento que codifica una integrasa (intI) y, a continuación, una secuencia attI a la que se unen los genes en casetes que codifican diferentes mecanismos de resistencia. Dentro de intI, en su extremo 3´, hay una secuencia promotora Pc a partir de la cual se transcriben los casetes de resistencia integrados, ya que estos genes carecen de promotor. Sin embargo, estos casetes presentan una secuencia específica denominada attC, la cual es reconocida por la integrasa que se une, por recombinación, a la secuencia attI del integrón en la orientación adecuada para su expresión. Los integrones se han clasificado según la secuencia de su integrasa, pero en la actualidad se prefiere clasificarlos según su localización. Se habla, en general, de "integrones móviles" para referirse a aquellos asociados a secuencias de inserción, transposones y/o plásmidos conjugativos, los que en su mayoría median mecanismos de resistencia, y de "superintegrones", de localización cromosómica y con grandes arreglos de genes en casetes. Los integrones móviles de clase 1 son los más abundantes en aislamientos clínicos y suelen estar asociados a transposones del subgrupo Tn21, seguidos por los de clase 2, derivados principalmente de Tn7. Estos elementos no son móviles por sí mismos, pero su asociación con elementos que sí lo son facilita su transferencia horizontal, lo que explica su amplia difusión entre las bacterias. Esta revisión intenta recopilar la información disponible acerca de los integrones móviles descritos en Argentina hasta la fecha.<hr/>Integrons gained great interest due to their participation in resistance gene recruitment and expression. Their basic structure includes a fragment that encodes an integrase (intI) followed by a recognition sequence (attI) into which they may incorporate gene cassettes (encoding resistance mechanisms). A promoter (Pc) embedded within the integrase gene controls the transcription of integrated resistance markers, as these genes do not have their own promoters. When in cassettes, resistance genes are flanked by specific sequences (attC), which are recognized by the integrase that, by site specific recombination, incorporates them after attI in proper orientation for their expression. In the past, integrons were classified according to their sequence homology; currently they are classified according to their location. In general, they are divided into "mobile" integrons (those associated with insertion sequences, transposons and/or plasmids, being most of them associated with resistance mechanisms), and chromosomally-located "super" integrons with large arrangements of cassette genes. "Mobile" class 1 integrons are the most abundant in clinical isolates and are generally associated with Tn21 subgroup transposons, followed by class 2, derived primarily from Tn7. These elements are not mobile themselves, but their association with mobile platforms that facilitate horizontal transfer, explains their wide distribution among bacteria. This review also attempts to describe the mobile integrons described so far in Argentina.