Resumen

SOUZA CANADA, Eduardo Daniel; FETTIG, Sebastian; ZIEGLER, Paul  y  BECK, Erwin. Transformación de un genotipo Argentino de trigo primaveral: optimización de los protocolos para el bombardeo de partículas de embriones inmaduros extraídos y aislamiento rápido de plantas transgénicas. BAG, J. basic appl. genet. [online]. 2015, vol.26, n.1, pp.18-37. ISSN 1852-6233.

Klein Brujo es un genotipo argentino de trigo de primavera prometedor para estudios de transformacion. En el presente trabajo se optimizo la transformacion biolistica de callos embriogenicos escutelares de este genotipo. Primero se identificaron los medios de induccion de callo escutelar (SCIM) mas promisorios para la regeneracion embriogenica in vitro de Klein Brujo. Luego, se co-bombardearon embriones de Klein Brujo y de Bobwhite, una linea altamente transformable, en medios seleccionados con particulas de oro (1 μm) recubiertas de dos plasmidos. Un plasmido contuvo dos genes, el marcador gfp (vinculado a CaMV35S) y el de seleccion bar (resistencia a fosfinotricina: PPT, vinculado a Ubi1) y el segundo al gen ipt (isopenteniltransferasa), controlado por el promotor HvS40 o SAG12. Eficacias de transformacion de hasta 16% con Klein Brujo y 6% con Bobwhite, se obtuvieron con embriones pre-cultivados en SCIM por 96 h y sujetos a tratamiento osmotico pre- (4-5 h) y post-bombardeo (16 h). Los callos transgenicos y las plantas regeneradas in vitro se identificaron por la deteccion de la expresion de GFP y la resistencia a PPT. Se transplantaron a suelo, 103 lineas transgenicas de Klein Brujo -mucho mas que de Bobwhite (12 lineas- con frecuencia en un lapso de solo nueve semanas. La frecuencia de co-transformacion de gfp y/o bar e ipt supero el 97% para ambos genotipos, y los tres genes co-segregaron en individuos seleccionados. El gen ipt fue estructuralmente estable hasta en la generacion T3, mientras que gfp y bar fueron susceptibles al silenciamiento.

Palabras clave : Parametros de bombardeo de particulas; Co-transformacion; Proteina verde fluorescente; Resistencia a fosfinotricina; Segregación del transgen.

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