Resumen

AMARAL, M. M. et al. Detección de la actividad de la proteasa que cliva al factor von Willebrand en la patofisiología de las microangiopatías. Medicina (B. Aires) [online]. 2003, vol.63, n.2, pp.130-136. ISSN 0025-7680.

La proteasa que cliva al factor von Willebrand (VWFCP) controla el tamaño multimérico del factor von Willebrand (VWF) en plasma normal. Sus niveles se encuentran disminuidos en diferentes situaciones fisiológicas y patológicas. Diferentes técnicas se desarrollaron para desplegar al VWF purificado (perfusión a alta fuerza de cizallamiento, diálisis contra urea en filtros de nitrocelulosa), para detectar la actividad de la VWFCP (análisis multimérico del VWF, enlace del VWF al colágeno) y para usar el plasma del paciente como fuente de enzima (VWFCP) y de sustrato (VWF). Este trabajo compara los métodos descritos con métodos nuevos: plasma dializado en membranas en lugar de VWF purificado, diálisis de la muestra contra urea en tubos, en lugar de filtros de nitrocelulosa y plasma sonicado para remover el VWF endógeno. El ensayo de perfusión y la detección por análisis mutimérico mostró un límite de detección de la actividad de la VWFCP del 25%. La diálisis contra urea en ambos soportes y la detección por análisis multimérico arrojó un límite mejor (3%), pero la recuperación de las muestras no fue tan eficiente en filtros de nitrocelulosa como en tubos. La detección por enlace del VWF al colágeno posee mayores ventajas al analizar más muestras en el mismo ensayo. La diálisis de plasma en membranas, para obtener VWF exógeno, no requiere equipos complejos. El método que usa el plasma del paciente como fuente de enzima y sustrato fue inaplicable en nuestras manos ya que los valores no pudieron ser interpolados en la curva de referencia.

Palabras clave : Factor von Willebrand; Proteasa; Púrpura trombocitopénica trombótica.

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