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Acta bioquímica clínica latinoamericana

versão impressa ISSN 0325-2957

Resumo

MARTINEZ-LOPEZ, Miriam Carolina et al. Genes com Ilhas CpG amplificados com a mistura formamida, albumina sérica bovina, e dimetilsulfóxido. Acta bioquím. clín. latinoam. [online]. 2012, vol.46, n.2, pp. 285-292. ISSN 0325-2957.

Diversos aditivos químicos têm sido utilizados para garantir a polimerização de genes com ilhas CpG. O objetivo do trabalho foi desenhar uma mistura que potencie PCR para amplificar genes com ilhas CpG. Para esta finalidade foram analisados fragmentos dos genes IRS2 e HNF1a com o programa EMBOSS CpG Report. Os iniciadores foram desenhados com o programa Primer 3 e se analisaram com o programa e-PCR. Foram utilizados três aditivos químicos: Albumina sérica bovina (0,1µg/µlL, Dimetilsulfóxido (5%) e formamida (5%) para 5 ensaios de PCR: dois usando um único aditivo, dois combinando dois aditivos e um combinando três aditivos. As amplificações com as misturas se realizaram com as enzimas, Taq Nativa, taq Recombinante e Taq Platinum. A qualidade das ampliações foi provada por sequenciação. Fragmentos sem ilhas CpG (HNF-1a) amplificaram com as três enzimas, sem o uso dos aditivos porém apresentaram problemas de pureza na sequenciação. Os fragmentos do gene IRS2 com ilhas CpG ampli­ficaram apenas com a combinação de três aditivos dimetilsulfóxido, albumina sérica bovina e formamida, independentemente da enzima usada, as sequências foram limpas. A conclusão que a mistura de três aditivos é uma solução que permite obter ampliações de alta qualidade em genes com ilhas CpG, com cromatogramas limpos na secuenciação.

Palavras-chave : Ilhas CpG; Potenciadores de reação em cadeia da polimerase; Gene substrato receptor da insulina 2; Gene fator nuclear do hepatócito 1a.

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