Abstract

PAVAN, María Elisa; PAVAN, Esteban Enrique; CAIRO, Fabián Martín  and  PETTINARI, María Julia. Expresión y renaturalización del antígeno protector de Bacillus anthracis: un modelo para evaluar el replegado de proteínas antigénicas recombinantes a gran escala. Rev. argent. microbiol. [online]. 2016, vol.48, n.1, pp.5-14. ISSN 0325-7541.  http://dx.doi.org/10.1016/j.ram.2015.10.004.

El antígeno protector de Bacillus anthracis (protective antigen, PA) es una importante proteína inmunogénica, en la que se basan tanto las vacunas contra el ántrax/carbunclo como varios métodos diagnósticos. Para estas aplicaciones es esencial que el PA mantenga sus propiedades antigénicas, para lo cual debe estar correctamente plegado. En este estudio se obtuvieron altos niveles del PA en Escherichia coli recombinante. Inicialmente, la proteína se acumuló desnaturalizada en cuerpos de inclusión, lo que facilitó su eficiente purificación en simples pasos de lavado, pero no fue reconocida por anticuerpos específicos. Se analizaron las condiciones de replegado con un sistema de alto rendimiento, evaluando simultáneamente casi un centenar de condiciones diferentes. La recuperación de la capacidad del PA de ser reconocido por los anticuerpos se evaluó por dot blot utilizando un coeficiente que proporcionó una medida de los niveles de proteína correctamente plegada, con un alto grado de discriminación. Las mejores condiciones de renaturalización permitieron un aumento de diez veces en la intensidad de los dot blots con respecto del control. El único aditivo que produjo buenos resultados de forma constante fue la L-arginina. El análisis estadístico de las interacciones entre los diferentes aditivos de replegado permitió identificar tanto interacciones cooperativas como negativas. El enfoque de alto rendimiento descripto en este trabajo, que permitió la sobreproducción, purificación y plegado del PA de una manera sencilla y directa, puede ser potencialmente útil para el rápido screening de las condiciones adecuadas de replegado cuando se sobreexpresan otras proteínas antigénicas.

Keywords : Bacillus anthracis; Antígeno protector; Replegado de proteínas; Evaluación de alto rendimiento del replegado.