Resumo

RIPOLI, M.V; ROGBERG-MUNOZ, A; LIRON, J.P  e  GIOVAMBATTISTA, G. Development of typing methods based on pyrosequencing technology fot the analysis of six bovine genes related to marbling. BAG, J. basic appl. genet. [online]. 2013, vol.24, n.2, pp.46-54. ISSN 1852-6233.

Diversos métodos como PCR-RFLP, OLA, secuenciación de ADN, PCR-SSCP y ARMS-PCR han sido desarrollados para detectar las va­riaciones alélicas presentes en las sustituciones K232A del gen DGAT1, GH6.1 del gen GH, F279Y de GHR, R4C de LEP, I74V de FABP4, y en la transición detectada en la secuencia 5´ líder del gen TG. La mayoría de estos métodos son procesos manuales que consumen mucho tiempo para realizar el ensayo y limitan el número de animales analizados. En el presente trabajo se describe el desarrollo de métodos de pirosecuenciación aplicables a los genes bovinos DGAT1, GH, GHR, LEP, FABP4 y TG, cuyos polimorfismos han sido asociados a variaciones en la composición de la carcasa. Este método se validó mediante el análisis de muestras de ADN pertenecientes a las razas Aberdeen Angus y Hereford previamente tipi­ficadas por PCR-SSCP, PCR-RFLP y/o secuenciación de ADN. Los resultados obtenidos evidenciaron que, después de estudios de secuenciación o asociación genómica (etapa de descubrimiento), la pirosecuenciación sería de gran utilidad para validar (etapa de validación) un polimorfismo de nucleótido único (SNP) particular en un gen candidato localizado en una región previamente mapeada en poblaciones independientes (con diferentes genotipos y/o sistemas de producción). Concluimos que los métodos basados en pirosecuenciación pueden ser de gran utilidad en la ge­notipificación de alto rendimiento de SNPs de genes candidatos en razas bovinas y en otras especies animales, representando un rápido e interesante método de validación para estudios poblacionales o de asociación.

Palavras-chave : Marcadores moleculares bovinos; Polimorfismos; Pirosecuenciación; Marmoleo.

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