Liberación de endotelina-1 por angiotensina ll en miocitos cardíacos aislados

María C. Villa-Abrille^**, Horacio E. Cingolani^*, Carolina D. Garciarena^**, Irene L. Ennis^*, Ernesto A. Aiello^*

^* Miembros de la Carrera del Investigador del Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET).
^** Becarias del Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET).

Centro de Investigaciones Cardiovasculares, Facultad de Ciencias Médicas, Universidad Nacional de La Plata

Dirección postal: Dra. María Celeste Villa-Abrille, Centro de Investigaciones Cardiovasculares, Facultad de Ciencias Médicas, UNLP, 60 y 120, 1900 La Plata, Argentina. Fax: (54-221) 483-4833
E-mail: mcvillaabrille@atlas.med.unlp.edu.ar

Resumen
Muchos de los efectos de la angiotensina II (Ang II) son mediados en realidad por la acción de endotelina (ET) endógena liberada y/o producida en respuesta a la Ang II. En este trabajo evaluamos la interacción Ang II/ET-1, sus consecuencias en la contractilidad cardíaca y el papel de las especies reactivas del oxígeno (EROs). Se usaron cardiomiocitos aislados de gato. La Ang II, 1 nM, produjo un efecto inotrópico positivo (EIP) de 31.8±3.8% que fue cancelado por inhibición de los receptores AT1, de los receptores de ET, del intercambiador Na⁺/H⁺ (NHE), del modo inverso del intercambiador Na⁺/Ca²⁺ (NCX) o por el secuestro de EROs. La Ang II, 100 nM, produjo un EIP de 70.5±7.6% que fue cancelado por inhibición de los receptores AT1 y bloqueado en parte por inhibición de los receptores de ET, del NHE, del modo inverso del NCX o por el secuestro de EROs. La Ang II, 1 nM, incrementó el ARNm de la preproET-1 lo cual fue anulado por el bloqueo de los receptores AT1. Los resultados permiten concluir que el EIP de la Ang II es debido a la acción de la ET-1 endógena liberada/formada por la Ang II. La ET-1 produce: estimulación del NHE, activación del modo inverso del NCX y un consecuente EIP. Dentro de esta cascada también participarían los EROs.

Palabras clave: Angiotensina II, Endotelina, Intercambiador Na⁺/Ca²⁺, Especies reactivas del oxígeno, Intercambiador Na⁺/H⁺ 

Abstract
Angiotensin II-induced endothelin-1 release in cardiac myocytes. Many of the effects thought to be due to angiotensin II (Ang II) are due to the release/formation of endothelin (ET). We tested whether Ang II elicits its positive inotropic effect (PIE) by the action of endogenous ET-1 and the role played by the reactive oxygen species (ROS) in this mechanism. Experiments were performed in cat isolated ventricular myocytes in which sarcomere shortening (SS) was measured to asses contractility after pharmacological interventions and the effect of Ang II on inotropism were analyzed. Ang II 1 nM increased SS by 31.8±3.8% (p<0.05). This PIE was cancelled by AT1 receptor blockade, by ET-1 receptors blockade, by Na⁺/H⁺ exchanger (NHE) inhibition, by reverse mode Na⁺/Ca²⁺ exchanger (NCX) blockade or by ROS scavenging. Ang II 100 nM increases SS by 70.5±7.6% (p<0.05). This PIE was completely abolished by AT1 receptors blockade and were partially bocked by ET-1 receptors blockade, by NHE inhibition, by reverse mode NCX blockade or by ROS scavenging. Ang II increased preproET-1 mRNA, effect that was blunted by AT1 receptors blockade. We conclude that Ang II induces (through its AT1 receptor) release/formation of ET-1, which acting in autocrine fashion on ET receptors of the isolated myocytes increases inotropism through NHE stimulation and NCX reverse mode activation. The participation of ROS is involved is this chain of events.

Key words: Angiotensin II, Endothelin, Na⁺/Ca²⁺ exchanger, Reactive oxygen species, Na⁺/H⁺ exchanger

Evidencias previas indican que ciertos efectos cardiovasculares de la angiotensina II (Ang II) observados tanto in vitro como in vivo, son debidos en realidad a la acción de la endotelina (ET) endógena liberada y/o formada en respuesta a la Ang II^1-11.
Ito y coautores describieron en miocitos cardíacos neonatales de rata la inhibición de la hipertrofia inducida por la Ang II usando inhibidores del receptor ET_A (BQ 123) o oligonucleótidos antisense contra ARNm de preproendotelina¹. Adicionalmente, Liang y Gardner², trabajando también con miocitos neonatales de ratas demostraron que el incremento de la actividad del promotor del gen del péptido natriurético cerebral inducido por Ang II es prevenido bloqueando los receptores ET_A. Por otra parte, el aumento de la presión arterial en rata inducido por la infusión de Ang II fue revertido por un bloqueante de los receptores ET_A, PD155080³, o por un bloqueante de los receptores ET_A y ET_B, Bosentan⁴. En conjunto, esta información sugiere que la Ang II induce la liberación y/o formación de ET que actuando en forma autocrina o paracrina media distintas señales intracelulares.
El objetivo del presente estudio fue evaluar el nexo existente entre la Ang II y la ET-1 en miocitos cardíacos aislados, sus consecuencias en la contractilidad cardíaca, y el papel que cumplen las especies reactivas del oxígeno (EROs) en dicho nexo.

Materiales y métodos

Aislamiento de los miocitos

Los experimentos se realizaron en miocitos de gato enzimáticamente aislados mediante una técnica descripta anteriormente¹² que involucra la reperfusión de los corazones con colagenasa por el método de Langendorff.

Medida de la longitud de los sarcómeros

Para medir la longitud de sarcómero (LS), las células fueron colocadas en una cámara de perfusión sobre la platina de un microscopio invertido (Nikon). Se las perfundió continuamente a una velocidad de 1 ml/min con una solución que contenía: (en mM): 5 KCl, 118 NaCl, 1.2 MgSO^₄, 0.8 Cl^₂Mg, 1.35 Cl₂Ca, 10 glucosa, 20 NaHCO_3, el pH es ajustado en 7.4 burbujeando permanentemente con una mezcla gaseosa de CO₂ 5% y O2 95%. Los miocitos se estimularon por campo con dos electrodos de platino colocados a cada lado de la cámara de perfusión a una frecuencia de 0.5 Hz. La LS fue registrada utilizando un software específico (Ion Wizard). Mediante una cámara acoplada al microscopio se observan las células y se selecciona una zona en la región media del miocito. El programa determina la LS más frecuente observada en la zona elegida. Esta imagen digitalizada del miocito es analizada on-line con una transformada de Fourier (Ion Optix). Antes de cada intervención se esperó a que las células estén estabili-zadas. Aproximadamente a los 15 minutos tenían la LS en un valor estable. La LS fue medida a 30°C utilizando un sistema que controla la temperatura (TC2, Cell micro controls).

Medida de ARNm por RT-PCR

Para la determinación de preproET-1 por real time RT-PCR, de acuerdo a lo descripto previamente¹³, se utilizó el ARN total aislado (RNeasy Mini Kit, Qiagen) de los miocitos y se realizó una transcripción reversa (Omniscript RT Kit, Qiagen). El ADNc se sometió a cuantificación relativa mediante PCR en tiempo real (Bio-Rad, iCycler iQ Real-Time PCR Detection System) mediante la técnica de SYBR Green con Taq DNA Polymerase (Invitrogen) y GAPDH como estándar interno. La determinación de la especificidad de los productos y la cuantificación se realizaron a partir del software del equipo (iCycler IQ OSS, version 3.0a, Bio-Rad).

Estadística

Los datos se presentan como media ± error estándar (ES). Las comparaciones fueron hechas por test de t de Student para muestras apareadas o por ANOVA de una vía para muestras apareadas seguido de un test de Student-Newman-Keuls, según corresponda. Un valor de p<0.05 se consideró como significativo estadísticamente.

Resultados

En el panel A de la Fig. 1 se observa el curso en el tiempo de los cambios de la longitud de los sarcómeros de un miocito antes y después de agregar 1 nM de Ang II al medio extracelular. En el panel B se muestra el acortamiento individual de los puntos indicados en el panel A. La Ang II incrementa el acortamiento de los sarcómeros alcanzando el estado estacionario aproximadamente a los 10 minutos. En el panel C se muestra el acortamiento promedio (n=16), expresado como % de la longitud inicial, antes (control) y luego de 15 minutos de agregar Ang II, 1 nM, al medio extracelular. La Ang II produjo un efecto inotrópico positivo (EIP) (respecto a la longitud basal) de 31.8±3.8 % (p<0.05).

Fig. 1.- Panel A: Registro continuo representativo de la longitud de los sarcómeros de un miocito antes y después de agregar Ang II (1 nM) a la solución extracelular. Panel B: Acortamiento individual de los puntos indicados en el panel A, a: control y b: después de 15 minutos con Ang II (1 nM). Panel C: Promedio del acortamiento de los sarcómeros (AS) expresado como porcentaje de la longitud inicial (%Li), en condiciones control y luego de 15 minutos de Ang II (1 nM). La Ang II produjo un EIP de 31.8 ± 3.8% (p<0.05, n=16). * indica diferencia significativa respecto al control por test de t para muestras apareadas.

Dosis mayores de Ang II incrementaron el EIP hasta alcanzar el efecto máximo con 100 nM de Ang II. Por este motivo, en el presente trabajo nos propusimos evaluar y comparar los efectos de 1 y 100 nM de Ang II. En el panel A de la Fig. 2 se muestra el curso en el tiempo del acortamiento de los sarcómeros antes y después de agregar Ang II, 100 nM, al medio extracelular. En el panel B se muestran los trazos individuales de los puntos indicados en el panel A. La Ang II, 100 nM, incrementó el acortamiento un 70.5±7.6 % (p<0.05).

Fig. 2.- Panel A: Registro continuo representativo de la longitud de los sarcómeros de un miocito antes y después de agregar Ang II (100 nM) a la solución extracelular. Panel B: Acortamiento individual de los puntos indicados en el panel A, a: control y b: luego de 15 minutos con Ang II (100 nM). Panel C: Promedio del AS expresado como %Li en condiciones control y luego de 15 minutos de Ang II (100 nM). La Ang II produjo un EIP de 70.5±7.7 % (p<0.05, n=6). * indica diferencia significativa respecto al control por test de t para muestras apareadas.

Con el fin de conocer que tipo de receptor de Ang II estaba involucrado en el EIP, se evaluó el acortamiento de los sarcómeros con ambas dosis de Ang II pero en presencia del antagonista de los receptores tipo 1 (AT1), losartan. En el panel A de la Fig. 3 se observa el acortamiento promedio (n=4) en condiciones control y luego de adicionar sucesivamente losartan 1 µM, y Ang II, 1 nM, (panel A) o 100 nM (panel B) al medio extracelular. El losartan no modificó el acortamiento basal de los sarcómeros pero sí previno el EIP inducido por ambas dosis de Ang II, indicando que el receptor involucrado en el EIP inducido por Ang II es el AT1.

Fig. 3.- Panel A: Promedio del AS (n=4) expresado como %Li en condiciones control y luego de agregar a la solución extracelular sucesivamente losartan 1 µM y Ang II 1 nM + losartan. Panel B: Promedio del AS (n=4) expresado como %Li en condiciones control y luego de agregar a la solución extracelular sucesivamente losartan 1 µM y Ang II 100 nM + losartan (Los).

Para conocer el rol que cumple la ET en el EIP inducido por ambas dosis de Ang II, se midió el efecto de la Ang II sobre el acortamiento de los sarcómeros en células pre-tratadas con un bloqueante de los receptores de ET (bloqueante ET_A y ET_B), TAK044, 1 µM. En el panel A de la Fig. 4 se observa el promedio del acortamiento en condiciones control y luego de adicionar sucesivamente al medio extracelular TAK044 y Ang II, 1 nM. El TAK044 no modificó el acortamiento basal. El bloqueo por TAK044 previno totalmente el EIP inducido por 1 nM de Ang II, indicando que todo el EIP inducido por esta concentración de Ang II es mediado por la acción de ET endógena liberada por la Ang II. Por otro lado, como puede observarse en el panel B de la Fig. 4, en presencia de TAK044 la Ang II, 100 nM, produce un EIP pero de menor magnitud  (aproximadamente 40%) al observado en su ausencia (Fig. 2). Estos resultados indican que en el EIP inducido por Ang II, 100 nM, interviene además una vía independiente de ET.

Fig. 4.- Panel A: AS promedio (n=6) expresado como %Li en condiciones control y luego de agregar a la solución extracelular sucesivamente TAK044, 1 µM, y Ang II, 1 nM + TAK044. TAK044 previno totalmente el EIP inducido por la Ang II, 1 nM. Panel B: Promedio del AS (n=6) expresado como %Li en condiciones control y luego de adicionar a la solución extracelular sucesivamente TAK044, 1 µM, y Ang II, 100 nM, + TAK044. En presencia de TAK044 la Ang II indujo un EIP de 43.0±8.8% (p<0.05, n=6). * indica diferencia significativa respecto al control por ANOVA para muestras apareadas.

Con el fin de evidenciar si la Ang II induce la formación de ET-1 se midió la expresión del ARNm de la preproET-1 en cardiomiocitos aislados luego de incubarlos 15 minutos con Ang II, 1 nM. En la Fig. 5 se observa cómo el nivel de ARNm de preproET-1 se vio incrementado desde 100±4% en control (n=7) hasta 267±45% (n=7) luego de Ang II. Este incremento fue anulado por losartan (76±21%, n=3).

Fig. 5.- Incremento de la expresión del ARNm de la preproET-1 inducido por el tratamiento con Ang II, 1 nM. La expresión del ARNm de la preproET-1 fue incrementada significativamente desde 100± 4.8 en control hasta 267.2±45.6% (p<0.05) luego de incubar las células 15 minutos con Ang II, 1 nM. Este incremento fue anulado cuando las células fueron pretratadas con losartan (Los).

Hemos demostrado previamente en músculos papilares de gato que el EIP producido por Ang II, 1 nM, es totalmente prevenido por la inhibición del intercambiador Na_⁺/H⁺ (NHE) con el bloqueante selectivo de este transportador, HOE642, y por el bloqueante selectivo del modo inverso del intercambiador Na⁺/Ca²⁺ (NCX), KB-R7943¹⁴. Para evaluar si la estimulación del NHE-1 y del modo inverso del NCX cumplen algún rol en el EIP producido por la Ang II en miocitos aislados, estudiamos el efecto de ambas dosis de Ang II en presencia de 10 mM HOE642 o de 1 µM KB-R7943. En el panel A de la Fig. 6 se observa que en presencia de HOE642 la Ang II, 1 nM, es incapaz de producir un incremento en el acortamiento celular. Por otro lado, como se observa en el panel B de esta figura, en presencia de HOE642 la Ang II, 100 nM, produce un EIP de menor magnitud al observado sin el bloqueante, ya que cuando está inhibido el NHE la Ang II incrementa el acortamiento porcentual en aproximadamente un 35%. Por lo tanto, podemos asumir que la activación del NHE está involucrada enteramente en el EIP de la dosis de Ang II más baja utilizada y al menos en parte en el EIP inducido por 100 nM de Ang II.

Fig. 6.- Panel A: Promedio del AS (n=5) expresado como %Li en condiciones control y luego de agregar a la solución extracelular sucesivamente HOE642 10 µM y Ang II 1 nM + HOE642. El bloqueo del NHE previno totalmente el EIP inducido por la Ang II 1 nM. Panel B: Promedio del AS (n=6) expresado como %Li en condiciones control y luego de agregar a la solución extracelular sucesivamente HOE642 10 µM y Ang II 100 nM + HOE642. El bloqueo del NHE previno parcialmente el EIP inducido por la Ang II 100 nM. El efecto promedio se muestra a la derecha de la barra correspondiente a la Ang II 100 nM. Panel C: Promedio del AS (n=6) expresado como %Li en condiciones control y luego de agregar a la solución extracelular sucesivamente KB-R7943 1 µM y Ang II 1 nM + KB-R7943. El bloqueo del modo inverso del NCX anuló totalmente el EIP inducido por la Ang II 1 nM. Panel D: Promedio del AS (n=7) expresado como %Li en condiciones control y luego de agregar a la solución extracelular sucesivamente KB-R7943 1 mM y Ang II 100 nM + KB-R7943. En presencia de KB-R7943 la Ang II 100 nM indujo un EIP de 35±10 % (p<0.05, n=7). * y ** indican diferencia significativa respecto al control y al KB-R7943, respectivamente, por ANOVA para muestras apareadas.

En el panel C de la Fig. 6, se observa que en presencia del bloqueante del modo inverso del NCX la Ang II, 1 nM, no produce EIP, indicando que la totalidad del EIP inducido por esta concentración de Ang II es mediado por la estimulación del modo inverso del NCX. Por otro lado, en presencia de KB-R7943 (Fig. 6 D) la Ang II, 100 nM, produce un EIP de menor magnitud (aproximadamente 35%) que el observado en ausencia del bloqueante. Por lo tanto, de manera similar al NHE, podemos asumir que el modo inverso del NCX está involucrado en el EIP de la vía autocrina Ang II/ET.
Existe evidencia previa que muestra que la dosis de KB-R7943 utilizada en el presente trabajo bloquea el modo inverso del NCX en miocitos cardíacos^15-17. Como puede observarse en la Fig. 6 el KB-R7943 disminuye significativamente el acortamiento basal de los sarcómeros. Este resultado podría deberse a la contribución del modo inverso del NCX a la contracción basal de los miocitos cardíacos de gato o a efectos inespecíficos del KB-R7943. Han sido descriptos diferentes efectos inespecíficos de esta droga, pero a dosis mayores a las utilizadas en este trabajo^{17, 18}. Sin embargo no podemos descartar completamente que este compuesto actúe a través de un mecanismo diferente del bloqueo del modo inverso del NCX.
Debido a que la producción de EROs por Ang II y/o ET es una acción bien aceptada de estos péptidos^{19, 20-22}, estudiamos los efectos del secuestrador de EROs, MPG (1 mM) sobre el EIP inducido por ambas dosis de Ang II. En el panel A de la Fig. 7 se observa el efecto de la Ang II (1 nM) sobre el acortamiento de los sarcómeros en presencia de MPG. Como puede observarse, el EIP producido por la Ang II (1 nM) fue totalmente cancelado por el pre-tratamiento de los miocitos con este secuestrador de EROs. En el panel B de la Fig. 7 se observa que en presencia de MPG la Ang II (100 nM) produce un EIP pero de menor magnitud que el observado sin este secuestrador, ya que cuando está presente el MPG la Ang II incrementa el acortamiento de los sarcómeros un 30.1±7.1%. Estos resultados indican que las EROs participan de la señalización intracelular de la vía autocrina Ang II/ET, pero no del incremento contráctil inducido por los otros mecanismos presentes a dosis altas de Ang II.

Fig. 7.- Panel A: Promedio del AS (n=6) expresado como %Li en condiciones control y luego de agregar a la solución extracelular sucesivamente MPG 1 µM y Ang II 1 nM + MPG. El MPG canceló totalmente el EIP inducido por la Ang II 1 nM. Panel B: Promedio del AS (n=6) expresado como %Li en condiciones control y luego de agregar a la solución extracelular sucesivamente MPG 1 mM y Ang II 100 nM + MPG. En presencia del secuestrador de EROs la Ang II 100 nM produjo un EIP de 30.14±7.14 % (p<0.05, n=6). *indica diferencia significativa respecto al control por ANOVA para muestras apareadas.

Discusión

En conjunto, nuestros datos muestran que en el cardio-miocito aislado la Ang II, 1 nM, actuando sobre los receptores AT1, produce un EIP a través de la acción autocrina de la ET-1 endógena liberada y/o formada por la Ang II. La estimulación del NHE por la ET-1 es un hecho previamente descripto²³. Esta activación del NHE, al aumentar el sodio intracelular (Na⁺_i), induce el influjo de Ca²⁺ a la célula a través del NCX actuando en el modo inverso. En la Fig. 8 se esquematiza el mencionado mecanismo. En esta cadena de eventos estarían involucrados también las EROs. Por otro lado, cuando trabajamos con una dosis más alta de Ang II (Ang II 100 nM) encontramos que existe un efecto adicional. El hecho de que el bloqueo de los receptores de ET, del NHE o del modo inverso del NCX diminuyen de manera similar el EIP de la Ang II (100 nM) sugiere que el componente de este EIP disparado por la ET endógena es enteramente debido a la activación del NHE y del modo inverso del NCX. En el presente trabajo no se pretendió evaluar el mecanismo responsable de la fracción del EIP inducido por Ang II (100 nM) no mediada por la activación de la vía Ang II/ET/NHE/modo inverso del NCX. Sin embargo, evidencias previas, sugieren que la activación de la corriente de calcio tipo L^{12, 24} por Ang II podría ser el mecanismo responsable de la fracción del EIP independiente de ET. Es importante remarcar que las concentraciones de Ang II utilizadas se encuentran dentro del rango utilizado por distintos autores para obtener la respuesta presora lenta de la Ang II^25-28 y similar al nivel encontrado en el intersticio renal²⁸ .

Fig. 8.- Esquema del mecanismo propuesto. La Ang II induce la producción de ET-1 endógena, que actuando de manera autocrina estimula la actividad del NHE, aumentando el Na+i y favoreciendo el modo inverso del NCX con el consecuente aumento de la concentración intracelular de Ca²⁺ y de la contractilidad. Las EROs intervienen en esta cadena de eventos.

Los experimentos realizados mediante la técnica de RT-PCR en tiempo real muestran que cuando los miocitos son pre-tratados con 1 nM de Ang II se produce un incremento en el nivel del ARNm de la preproET-1. Estos resultados sugieren que la Ang II aumenta la expresión de ET-1 con el posible fin de restaurar el pool intracelular de este péptido que estaría siendo liberado desde el miocito por acción de la Ang II.
La generación de EROs por Ang II y/o ET ha sido involucrada tanto en señales fisiológicas^{19, 29, 30} como patológicas^{4, 27}. Nuestros resultados nos permiten proponer que las EROs están involucrados en el EIP inducido por la ET-1 endógena liberada por la Ang II, ya que cuando usamos el MPG bloqueamos totalmente el EIP inducido por la Ang II 1 nM y parcialmente el EIP inducido por 100 nM de Ang II hasta un nivel similar a la inhibición producida por TAK044. De acuerdo a nuestras observaciones, no podemos discriminar dónde se ubica la producción de EROs dentro de la cadena de eventos que proponemos. Es decir, no sabemos si las EROs están antes o después de la activación de los receptores de ET. Un estudio reciente realizado por Hong y col.³⁰ en miocitos de músculo liso vascular, sugirió que la Ang II induce la formación de ET-1 a través de la producción de EROs y de la fosforilación de la quinasa regulada por señales extracelulares (ERK). Por otro lado, Sand y col.¹⁹ demostraron en aurícula de rata que el efecto inotrópico positivo (EIP) de la ET-1 es en parte mediado por EROs. Adicionalmente ha sido descripta la activación del NHE-1 por el peróxido de hidrógeno^{31, 32}. Experimentos adicionales son necesarios para evaluar en qué parte de la cadena de eventos se ubican las EROs.
En músculos papilares de gato ha sido demostrado que la Ang II produce aumento de Na⁺_i y alcalinización secundarias a la activación del NHE, sólo si se trabaja con el buffer HEPES (en ausencia de bicarbonato (HCO₃^-))⁵. Por el contrario, cuando se trabaja en presencia del buffer fisiológico HCO₃^-, sólo se observa el incremento de Na+i, pues el mecanismo acidificante dependiente de HCO₃^- (intercambiador Cl^-/HCO₃^-) también se activa por Ang II y evita el cambio de pHi^{6, 33}. Debido a que los experimentos fueron realizados en presencia del buffer fisiológico, proponemos que la activación del NHE produce un aumento del Na⁺_i en ausencia de cambios en el pH_i , que consecuentemente favorece el modo inverso del NCX, el influjo de Ca²⁺ y el aumento de la contractilidad.
Los resultados del presente estudio están sustentados por evidencias previas. Se ha descripto, en miocitos cardíacos de conejo, que la estimulación del modo inverso del NCX por Ang II³⁴ produce un EIP. Por otro lado ha sido demostrado que el EIP inducido por Ang II (1 nM) en músculos papilares de gato es totalmente cancelado por inhibición de los receptores de ET o del NCX¹⁴.
En resumen, hemos demostrado que una parte significativa del EIP de la Ang II es mediado a través de la liberación de ET-1 del miocito, la cual actuando en forma autocrina estimula el NHE-1 y al modo inverso del NCX, induciendo el EIP. Las EROs por mecanismos aún no aclarados intervienen en esta cadena de eventos, dado que su neutralización cancela este efecto.

Bibliografía

1. Ito H, Hirata Y, Adachi S, et al. Endothelin-1 is an autocrine/paracrine factor in the mechanism of angiotensin II-induced hypertrophy in cultured rat cardiomyocytes. J Clin Invest 1993; 92: 398-403.
2. Liang F, Gardner DG. Autocrine/paracrine determinants of strain-activated brain natriuretic peptide gene expression in cultured cardiac myocytes. J Biol Chem 1998; 273(23): 14612-9.
3. Rajagopalan S, Laursen JB, Borthayre A, et al. Role for endothelin-1 in Angiotensin II-mediated hypertension. Hypertension 1997; 30: 29-34.
4. Ortiz MC, Sanabria E, Manriquez MC, Romero JC, Juncos LA. Role of endothelin and isoprostanes in slow pressor responses to angiotensin II. Hypertension 2001; 37: 505-510.
5. Cingolani HE, Alvarez BV, Ennis IL, Camilión de Hurtado MC. Stretch-induced alkalinization of feline papillary muscle. An autocrine-paracrine system. Circ Res 1998; 83: 775-80.
6. Camilión de Hurtado MC, Alvarez BV, Ennis IL, Cingolani HE. Stimulation of myocardial Na⁺_-independent Cl^-/HCO₃^- exchanger by angiotensin II is mediated by endogenous endothelin. Circ Res 2000; 86: 622-62.
7. Chua BH, Chua CC, Diglio CA, Siu BB. Regulation of endothelin-1 mRNA by angiotensin II in rat heart endothelial cells. Biochim Biophys Acta. 1993; 1178: 201-6.
8. Pérez NG, Camilión de Hurtado MC, Cingolani HE. Reverse mode of the Na⁺/Ca²⁺ exchange after myocardial stretch. Underlying mechanism of the slow force response. Circ Res 2001; 88: 376-82.
9. Fujisaki H, Ito H, Hirata Y, et al. Natriuretic peptides inhibit angiotensin II-induced proliferation of rat cardiac fibroblasts by blocking endothelin-1 gene expression. J Clin Invest 1995; 96: 1059-65.
10. Muller DN, Mullally A, Dechend R, et al. Endothelin-converting enzyme inhibition ameliorates angiotensin II-induced cardiac damage. Hypertension 2002; 40: 840-6.
11. Seccia TM, Belloni AS, Kreutz R, et al. Cardiac fibrosis occurs early and involves endothelin and AT-1 receptors in hypertension due to endogenous angiotensin II. J Am Coll Cardiol 2003; 41: 666-73.
12. Aiello EA, Cingolani HE. Angiotensin II stimulates cardiac L-type Ca²⁺ current by a Ca²⁺- and protein kinase C-dependent mechanism. Am J Physiol 2001; 280: H1528-36.
13. Ennis IL, Garciarena CD, Perez NG, Dulce RA, Camilion de Hurtado MC, Cingolani HE. Endothelin isoforms and the response to myocardial stretch. Am J Physiol Heart Circ Physiol 2005; 288: H2925-30.
14. Pérez NG, Villa-Abrille MC, Aiello EA, Dulce RA, Cingolani HE, Camilión de Hurtado MC. A low dose of angiotensin II increases inotropism through activation of reverse Na⁺/Ca²⁺ exchange by endothelin release. Cardiovasc Res 2003; 60: 589-97.
15. Vila Petroff MG, Palomeque J, Mattiazzi AR. Na(+)-Ca2+ exchange function underlying contraction frequency inotropy in the cat myocardium. J Physiol 2003; 550     (Pt 3): 801-17.
16. Satoh H, Ginsburg KS, Qing K, Terada H, Hayashi H, Bers DM. KB-R7943 block of Ca²⁺ influx via Na⁺/Ca²⁺ exchange does not alter twitches or glycoside inotropy but prevents Ca²⁺ overload in rat ventricular myocytes. Circulation 2000; 101: 1441-6.
17. Hobai IA, O'Rourke B. The potential of Na+/Ca2+ exchange blockers in the treatment of cardiac disease. Expert Opin Investig Drugs. 2004; 13: 653-64.
18. Watano T, Kimura J, Morita T, Nakanishi H. A novel antagonist, No. 7943, of the Na+/Ca2+ exchange current in guinea-pig cardiac ventricular cells. Br J Pharmacol 1996; 119: 555-63.
19. Sand C, Peters SL, Pfaffendorf M, van Zwieten PA. The influence of endogenously generated reactive oxygen species on the inotropic and chronotropic effects of adrenoceptor and ET-receptor stimulation. Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol 2003; 367: 635-9.
20. Kimura S, Zhang GX, Nishiyama A, et al. Mitochondriaderived reactive oxygen species and vascular MAP kinases: comparison of angiotensin II and diazoxide. Hypertension 2005; 45: 438-44.
21. Xu FP, Chen MS, Wang YZ, et al. Leptin induces hypertrophy via endothelin-1-reactive oxygen species pathway in cultured neonatal rat cardiomyocytes. Circulation 2004; 110:1269-75.
22. Chen SC, Cheng JJ, Hsieh MH, et al. Molecular mechanism of the inhibitory effect of trilinolein on endothelin-1-induced hypertrophy of cultured neonatal rat cardiomyocytes. Planta Med 2005; 71: 525-9.
23. Kramer BK, Smith TW, Kelly RA.Endothelin and in-creased contractility in adult rat ventricular myocytes. Role of intracellular alkalosis induced by activation of the protein kinase C-dependent Na(+)-H+ exchanger. Circ Res 1991; 68: 269-79.
24. Vila Petrof MG, Aiello EA, Palomeque J, Salas M, Mattiazzi A. Subcellular mechanisms of the positive inotropic effect of angiotensin II in cat myocardium. J Physiol 2000; 529.1: 189-203.
25. Romero JC, Reckelhoff JF. State-of-the-Art lecture. Role of angiotensin and oxidative stress in essential hypertension. Hypertension 1999; 34(4 Pt 2): 943-9.
26. Reckelhoff JF, Zhang H, Srivastava K, Roberts LJ 2nd, Morrow JD, Romero JC. Subpressor doses of angiotensin II increase plasma F(2)-isoprostanes in rats. Hypertension 2000; 35(1 Pt 2): 476-9.
27. Ortiz MC, Manriquez MC, Romero JC, Juncos LA. Antioxidants block angiotensin II-induced increases in blood pressure and endothelin. Hypertension 2001; 38 (3 Pt 2): 655-9.
28. Reckelhoff JF, Romero JC. Role of oxidative stress in angiotensin-induced hypertension. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol 2003; 284: R893-912.
29. de Groot AA, van Zwieten PA, Peters SL. Involvement of reactive oxygen species in angiotensin II-induced vaso-constriction. J Cardiovasc Pharmacol 2004; 43: 154-9.
30. Hong HJ, Chan P, Liu JC, et al . Angiotensin II induces endothelin-1 gene expression via extracellular signal-regulated kinase pathway in rat aortic smooth muscle cells. Cardiovasc Res 2004; 61: 159-68.
31. Snabaitis AK, Hearse DJ, Avkiran M. Regulation of sarcolemmal Na⁺/H⁺ exchange by hydrogen peroxide in adult rat ventricular myocytes. Cardiovasc Res 2002; 53: 470-80.
32. Wei S, Rothstein EC, Fliegel L, Dell'Italia LJ, Lucchesi PA. Differential MAP kinase activation and Na⁺/H⁺ exchanger phosphorylation by H₂O₂ in rat cardiac myocytes. Am J Physiol 2001; 281: C1542-50.
33. Alvarez BV, Pérez NG, Ennis IL, Camilión de Hurtado MC, Cingolani HE. Mechanisms underlying the increase in force and calcium transient that follows stretch of cardiac muscle: A possible explanation of the Anrep effect. Circ Res 1999; 85: 716-22.
34. Fujita S, Endoh M. Influence of a Na+-H+ exchange inhibitor ethylisopropylamiloride, a Na+-Ca2+ exchange inhibitor KB-R7943 and their combination on the increases in contractility and Ca2+ transient induced by angiotensin II in isolated adult rabbit ventricular myocytes. Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol 1999; 360: 575-84.

        [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]

Recibido: 8-11-2005
Aceptado: 11-04-2006