ACTUALIZACIÓN

Estado actual del trasplante de células hepáticas en Pediatría

Hepatic cell transplantation in childhood. State of the art

 

Dr. Anselmo A. Bologna^a, Lic. Mariana R. Barbich^a, Dr. Daniel D'Agostino^b y Dr. Pablo F. Argibay^a,b

^aInstituto de Ciencias Básicas y Medicina Experimental (ICBME) del Hospital Italiano de Buenos Aires.
^bHospital Italiano de Buenos Aires.

Correspondencia: Dr. Pablo F. Argibay: pablo.argibay@hospitalitaliano.org.ar

Conflicto de intereses: Ninguno que declarar.

Recibido: 22-12-10
Aceptado: 23-02-11

 

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RESUMEN

En la actualidad, los niños que padecen insuficiencia hepática podrían beneficiarse de un método no convencional de reemplazo funcional, alternativo al trasplante hepático. El deterioro y muerte de los pacientes en lista de espera, impulsan la búsqueda de alternativas en el ámbito del trasplante. El trasplante de células hepáticas se ha constituido en un potencial recurso cuya validación como alternativa o puente al trasplante hepático seguramente resultaría en una sustancial mejoría tanto en la calidad de vida como en la supervivencia de los pacientes. En la presente revisión nos proponemos describir el estado del arte en trasplante de hepatocitos en pediatría.

Palabras clave: Hepatocitos; Trasplante; Enfermedades metabólicas; Hígado.

ABSTRACT

To date, children who suffer from a certain type of illness such as hepatic failure, could benefit with a non conventional functional replacement as an alternative to liver transplantation. Deterioration and death of patients on waiting list encourage the search for alternatives methods within transplantation. Liver cell transplantation has become a potential alternative treatment whose validation as an alternative or as a bridge until the donor appears, will probably contribute to improve the quality of life and survival of the patients. The aim of this review is to describe the state of the art of hepatocyte transplantation in pediatric patients.

Key words: Hepatocyte; Transplantation; Metabolical diseases; Liver.

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INTRODUCCIÓN
El trasplante hepático constituye actualmente un tratamiento de valor comprobado para las enfermedades hepáticas terminales agudas y crónicas y para todas aquellas refractarias a otros tratamientos. ¹
Existen al menos tres situaciones en las cuales los pacientes que sufren de insuficiencia hepática se beneficiarían de un método no convencional de reemplazo funcional, alternativo al trasplante hepático: la falla hepática aguda (FHA),² la falla hepática aguda sobre enfermedad crónica (FHAsC)³ y ciertas enfermedades metabólicas.
La escasa oferta de donantes de órganos constituye un factor limitante importante en esta modalidad terapéutica.
Con el empleo de las diferentes técnicas de implantes con hígado completo, hígado reducido, hiper-reducido y el "split liver" (hígado para dos) se ha intentado paliar la escasez de órganos. Sin embargo la situación continúa y la falta de donantes apropiados provoca un largo período de espera con empeoramiento del cuadro clínico e inclusive la muerte en lista de trasplante.⁴
En los últimos años el trasplante de células hepáticas ha surgido como un potencial procedimiento complementario o alternativo al trasplante hepático,^5-11 por lo menos en ciertas circunstancias. La aplicación de esta modalidad terapéutica se fundamenta en el concepto que el trasplante celular permitiría suplir la función del órgano afectado, ya fuera en forma transitoria, a la espera de la recuperación del órgano propio o la oportunidad de un trasplante, o permanente, evitando la necesidad de dicho procedimiento.

ASPECTOS GENERALES
El desarrollo de este recurso terapéutico significa una nueva oportunidad para los niños con enfermedad hepática y principalmente para aquellos que sufren de una enfermedad metabólica (Tabla 1) con ciertas ventajas en comparación con el trasplante hepático. Podemos destacar el hecho de ser un procedimiento menos invasivo y riesgoso, y que presenta un menor costo. Existe asimismo una mayor disponibilidad del material a trasplantar ya que se podrían utilizar como fuente de células, órganos considerados "marginales",¹² material resultante de reducciones, ^13,14 de hepatectomías parciales y órganos de donantes cadavéricos en paro cardíaco.¹⁵ Por otro lado, permitiría la posibilidad de utilizar un donante para varios receptores. Pese a las ventajas de disponibilidad señaladas, el contar con las células en el momento apropiado, sigue siendo un problema que quedaría definitivamente resuelto de lograrse el cultivo^14,16 y la preservación de hepatocitos a gran escala^17,18 y la diferenciación y proliferación de células hepáticas a partir de distintos precursores. Una modalidad importante a considerar, sería la posibilidad del autotrasplante que, a futuro, abriría las puertas a la aplicación de terapia génica, de particular importancia en el caso de aplicarse al tratamiento de los trastornos metabólicos hepáticos.

Tabla 1. Condiciones metabólicas potencialmente tratables

Las enfermedades metabólicas hepáticas pueden ser divididas en aquellas que llevan daño estructural con o sin lesión de otros tejidos (déficit de alfa 1 antitripsina, fibrosis quística del páncreas, enfermedad de Wilson, etc.) y aquellas en las que el defecto metabólico se expresa solamente o predominantemente en el hígado sin alteración de su estructura pero que pueden provocar lesión a otros órganos o sistemas (hiperoxaluria, trastornos del ciclo de la urea, hipercolesterolemia familiar, Crigler-Najjar, etc.).
El tratamiento conservador de estas enfermedades se basa fundamentalmente en la utilización de costosas dietas y numerosas medicaciones para lograr un equilibrio pero con potenciales recaídas y agravamientos, que alteran la calidad de vida y ponen en riesgo de muerte o de daño neurológico a los pacientes.¹⁹
Aunque individualmente raras, cuando son consideradas en conjunto representan la tercera causa de trasplante en la infancia y en ciertas instituciones se ubica en el segundo lugar luego de la atresia de vías biliares.²⁰
Un aspecto interesante a destacar, es la ventaja sustancial respecto del trasplante hepático dada por el hecho de que frente a la eventualidad de una falla funcional o pérdida del injerto, la permanencia del órgano propio permitiría a este actuar como respaldo, evitando poner en riesgo la vida del paciente.
Si bien la insuficiencia hepática aguda y crónica no se descartan como condiciones potencialmente tratables,^21-26 el escaso número de casos comunicados impide sacar conclusiones definitivas respecto de los resultados, así como avanzar en el conocimiento de la fisiología del trasplante en dichas condiciones o evaluar aspectos técnicos que permitan optimizar el procedimiento en tales situaciones.²² En el caso de la insuficiencia hepática aguda esta modalidad terapéutica conllevaría el beneficio de permitir, a través del restablecimiento temporal de la función hepática, la eventual recuperación del órgano propio, evitando la necesidad de un trasplante hepático y, en consecuencia, de inmunosupresión de por vida.

Antecedentes
Antecedentes preclínicos
El primer informe de trasplante de células hepáticas en el ámbito de la experimentación con animales, con el fin de modificar la capacidad funcional del hígado, data del año 1976.²⁷
A fin de reducir la brecha entre la experimentación preclínica y clínica, los investigadores han utilizado modelos animales con alteraciones hepáticas funcionales similares a las observadas en los seres humanos. Dichos modelos han incluido animales con alteraciones del ciclo de la urea,²⁸ trastornos del metabolismo del cobre, ²⁹ ratas de Gunn, que emulan al síndrome de Crigler-Najjar tipo I,²⁷ ratones deficientes en fumarilacetoacetato como modelo de tirosinemia,³⁰ perros afectados de hiperuricemia,³¹ ratones con histidinemia,³² conejos de Watanabe que presentan hipercolesterolemia³³ y ratas analbuminémicas.³⁴ De la misma forma, se han desarrollado modelos de falla hepática aguda^35-38 y crónica.^{26, 39-41}
Estos modelos han puesto de manifiesto la posibilidad cierta de modificar el estatus metabólico de base de los animales tratados evidenciando, además, la capacidad de supervivencia del material trasplantado a mediano y largo plazo y permitiendo el ensayo de diferentes estrategias y la aplicación de diferentes variables a fin de perfeccionar la técnica, mejorar el implante inicial de las células, su supervivencia y posterior proliferación.^42-44

Antecedentes clínicos
En el curso del desarrollo de la experimentación clínica, se han llevado a cabo aproximadamente 80 trasplantes en distintos centros⁴⁵ incluyendo pacientes con trastornos metabólicos así como casos de insuficiencia hepática aguda y crónica, en fase terminal. Desafortunadamente, debido a lo diverso de los protocolos aplicados, así como a lo heterogéneo de la población tratada, resulta sumamente dificultoso extraer conclusiones definitivas a través de una valoración conjunta de los resultados. Luego del primer informe de trasplante en humanos, publicado por Mito y Kusano en 1992,⁴⁶ son de destacar algunas publicaciones. Habibullah,²³ en 1994, publica los casos de 5 pacientes afectados por una FHA, concluyendo que el trasplante de células fetales humanas intraperitoneales habría sido responsable de la mejoría observada en la supervivencia de los pacientes. Grossman,⁴⁷ en 1995, comunica un estudio de terapia génica ex-vivo tratando pacientes, afectados de hipercolesterolemia familiar, a través del autotrasplante de células hepáticas previamente manipuladas genéticamente, logrando una modesta reducción de los niveles de colesterol, pero sin embargo demostrando la factibilidad del autotrasplante. Ira Fox y col.⁴⁸ publica, en 1998, el tratamiento de una niña de 10 años portadora del síndrome de Crigler-Najjar Tipo I. En este caso, se infundieron 7,5 x 109 células, por vía portal, a través de la colocación de un catéter transparieto-hepático. El seguimiento, a través del laboratorio en los meses siguientes, evidenció una marcada reducción de las concentraciones séricas de bilirrubina, y en consecuencia una disminución de los requerimientos de horas de fototerapia diaria. Más recientemente, en 2009, Meyburg y col.⁴⁹ informaron cuatro casos de niños afectados por desórdenes en el ciclo de la urea trasplantados con células hepáticas aisladas de un mismo donante. No se observaron complicaciones del método y en todos los casos se logró la estabilización de la condición metabólica de los pacientes durante el período de control que osciló entre 4 y 13 meses.
En la Tabla 2 se muestran las experiencias de trasplante más relevantes tanto pediátricas como en adultos en los últimos 5 años.

Tabla 2. Trasplante de células hepáticas en humanos

OTC: Ornitin transcarbamilasa, ASL: Arginin succinil liasa, CPS 1: Carbamoil fosfato sintetasa, TX: Trasplante hepático.
Desc: Descompensación. HSV: Virus Herpes simplex HBV: Virus de Hepatitis B, bilirrub: bilirrubina.

la problemática del trasplante celular
Los resultados obtenidos en ensayos experimentales, si bien alentadores, no han sido del todo satisfactorios. En el caso de los ensayos clínicos, aunque se lograron mejorías parciales y transitorias en los estados de base de los pacientes, en última instancia no evitaron la necesidad de un posterior trasplante como tratamiento definitivo.
Estos resultados obedecerían a la incapacidad para lograr el implante y supervivencia de suficiente cantidad de células y su posterior proliferación, impidiendo alcanzar un "volumen de masa celular crítica" capaz de determinar un cambio suficiente y sostenido del estado funcional del órgano. Ello resultaría fundamentalmente de la pérdida inicial de una importante fracción de las células trasplantadas, estimándose que solo el 30% de las mismas logra implantarse, y de la acción de factores que determinarían su posterior pérdida a través de fenómenos de necrosis, apoptosis o anoikis. Esta última consiste en una forma de muerte celular programada desencadenada por la falta de contacto de la célula con la matriz extracelular.
Dos conceptos claves, a los fines de lograr la repoblación exitosa del hígado, son los de "estímulo mitótico" y "ventaja de proliferación".
Aunque la mayoría de los procedimientos ensayados en animales probablemente no sean aplicables en el ámbito de la práctica clínica, dos de ellos, la irradiación hepática⁵⁰ y la embolización parcial del órgano,⁵¹ podrían considerarse como potencialmente factibles, otorgando a las células trasplantadas ventaja de proliferación y un estímulo mitótico apropiado.
El sitio en el que se implantarán las células, el número, la vía y las condiciones del microambiente al que serán expuestas las células durante el procedimiento resultarían determinantes a los fines de lograr un trasplante exitoso.

Sitio de implante
Podría suponerse que el sitio más apropiado para trasplantar células hepáticas sería el hígado; sin embargo, en determinadas condiciones, en las que se evidenciaran profundos cambios en la arquitectura del órgano o en el microambiente hepático, podría no ser así. En dichas circunstancias seguramente la célula trasplantada encontraría un ambiente muy poco favorable tanto para el implante como para la proliferación.
Existen a la fecha comunicaciones de trasplantes en sitios distintos del hígado, tales como tejido celular subcutáneo,^52,53 renal subcapsular,⁵⁴ páncreas, ⁵⁵ peritoneo^56-59 y bazo^60-62 sin resultados que evidencien ventajas de uno respecto a otro y tampoco respecto del hígado.

Número de células y administración
El número de células que deberán trasplantarse con el fin de recuperar la función perdida, variará de acuerdo con la patología considerada ya que probablemente para tratar un trastorno metabólico será mucho menor que para revertir la situación en el caso de un cuadro de insuficiencia hepática fulminante. En el primer caso, se calcula que debería trasplantarse un número de células equivalente a un 5-10% de la masa hepática del receptor.
Por otro lado, en la medida que fuera necesario, a fin de mantener la recuperación funcional del órgano, si no se lograra la repoblación celular permanente, el procedimiento de trasplante podría repetirse en forma periódica.

Vías
La vía de trasplante dependerá fundamentalmente de la elección del sitio de implante. En el caso del hígado, una de las utilizadas con mayor frecuencia es la infusión celular a través de la vena porta.
La utilización de esta vía se fundamenta en el hecho comprobado de que, una vez en la circulación portal, los hepatocitos trasplantados serían conducidos hasta los sinusoides portales desde donde migrarían para integrarse al lobulillo.

Preservación de las células
Lograr la preservación a largo plazo y a gran escala de las células conllevaría un importante avance en la estrategia de aplicación del trasplante celular, ya que permitiría disponer de las células necesarias en tiempo y forma. Si bien hasta ahora los mayores esfuerzos han tenido por objetivo mejorar las técnicas de criopreservación, los resultados obtenidos no han sido del todo satisfactorios. Las células sometidas a este procedimiento presentan una marcada disminución de su viabilidad y de su capacidad metabólica, afectando sin duda la capacidad de implante y supervivencia luego del trasplante. En la actualidad, se ensayan nuevas estrategias que, aunque basadas en la aplicación de bajas temperaturas, no utilizan el congelamiento como medio de preservación. ^63,64

Origen de los hepatocitos
Como fue señalado anteriormente, las células a trasplantar pueden tener diversos orígenes: provenir de órganos considerados "marginales", del material resultante de reducciones, de hepatectomías parciales e incluso de donantes cadavéricos en paro cardíaco. En la actualidad, se están considerando otras potenciales fuentes de hepatocitos que involucrarían la diferenciación a partir de precursores tales como células progenitoras hepáticas o células madre de origen hepático⁶⁵ o extrahepático.⁶⁶ Células hepáticas fetales,⁶⁷ células madre de origen embrionario⁶⁸ y placentario, ⁶⁹ junto con células mesenquimales de médula ósea,⁷⁰ cordón umbilical⁷¹ y tejido adiposo⁷² se cuentan entre las consideradas con mayor frecuencia como potenciales fuentes , y sobre las que existe alguna experiencia.
Si bien las células madre embrionarias constituyen uno de los recursos de mayor valor en la terapia celular y la ingeniería de tejidos, existe actualmente un fuerte debate ético y científico en torno de su utilización.

El procedimiento
Aislamiento celular
El aislamiento de las células hepáticas se lleva a cabo a través del método de Seglen⁷³ que consiste en la perfusión del órgano con una solución de lavado, seguida de la perfusión con una solución enzimática para digerir la matriz extracelular y liberar los hepatocitos.

Trasplante
Durante la infusión de los hepatocitos por vía portal se generan cambios vasculares,^74-78 tanto a nivel hemodinámico como a nivel de la microcirculación hepática resultante del enclavamiento de las células a nivel sinusoidal. Ello se traduce en un aumento de la presión venosa portal que, aunque transitorio, en algunos casos ha sido de marcada intensidad y asociado a modificaciones radiológicas en el lecho vascular portal caracterizado por la amputación de las ramas portales de 2do y 3er orden.⁷⁴
Sin embargo, los casos de complicaciones relacionadas a la infusión de las células por esta vía, tales como trombosis portal o hipertensión portal clínicamente significativas son sumamente raras.⁷⁹

Inmunosupresión
No existe consenso acerca de cuál sería el esquema inmunosupresor más apropiado y la mayoría de los centros utilizan el mismo que para el caso del trasplante hepático. La utilización de un anticalcineurínico (en la mayoría de los caso Tacrolimus) asociado o no a esteroides y a anticuerpos monoclonales contra receptores IL-2 han sido los esquemas más utilizados.
Están siendo estudiadas nuevas técnicas y estrategias que permitan el trasplante de las células sin la necesidad de inmunosupresión.

Valoración del implante
La falta de un método apropiado que permita determinar no solo qué fracción del total de las células trasplantadas se han implantado sino el lugar en el que lo han hecho (migración) y su funcionalidad, impide la apropiada valoración del procedimiento de trasplante.
El restablecimiento de la función perdida obraría como un indicador de la presencia y funcionalidad de las células trasplantadas, sin embargo, esta expresión funcional no se lograría hasta que se alcanzara el implante de una determinada masa de células que en la mayoría de los casos se obtiene solo luego de varios procedimientos de trasplante, no siendo posible determinar cuan exitoso ha sido cada uno de los procedimientos realizados.
Así, sería necesario, contar con un método de valoración global y dinámico que permitiera salvar los inconvenientes antes señalados.

CONCLUSIONES

El trasplante de hepatocitos constituye un avance en el tratamiento de las enfermedades hepáticas de la infancia. Esta alternativa puede significar una mejor calidad de vida y supervivencia para los niños que padecen ciertas enfermedades metabólicas. Las técnicas y principios han sido establecidos y son actualmente desarrollados en diferentes centros médicos en el mundo; sin embargo, la aplicación sigue siendo aún limitada. El desafío será desarrollar nuevas técnicas de preservación y encontrar fuentes alternativas de células aptas para ser trasplantadas. En la utilización de células madre podría encontrarse la respuesta.
El trasplante de hepatocitos o de células madres será en un futuro una alternativa válida de tratamiento o un puente para llegar a un trasplante definitivo.

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