BIOLOGÍA MOLECULAR

Polimorfismos de nucleótido simple en moléculas de adhesión y parámetros clínicos en artritis reumatoide

Single nucleotid polymorphisms of adhesion molecules and clinical parameters in rheumatoid arthritis

Rosa Elena Navarro-Hernández¹, Mónica Vázquez-Del Mercado¹, Edith Oregón-Romero¹, José Francisco Muñoz-Valle²

^1. Doctora en Ciencias.
^2. Doctor en Ciencias.

Instituto de Investigación en Reumatología y del Sistema Músculo-Esquelético, Universidad de Guadalajara, Centro Universitario de Ciencias de la Salud, Edificio P, planta baja. Sierra Mojada No. 950, Colonia Independencia. Guadalajara, Jalisco, México. C.P. 44340.

Premio Wiener Lab Colabiocli 2006

Resumen

Se investigó la relación entre los polimorfismos de E-selectina, la molécula de adhesión vascular-1 (VCAM1) y la molécula de adhesión intercelular-1 (ICAM1) con el perfil de lípidos y marcadores clínicos de inflamación en artritis reumatoide (AR). Se incluyeron 60 pacientes con AR clasificados de acuerdo a los criterios del American College of Rheumatology (ACR, 1987) y 60 controles clínicamente sanos (CCS), no relacionados entre sí, definidos como población de mestizos mexicanos. Los genotipos se caracterizaron por la técnica de PCR-RFLP. La velocidad de sedimentación globular (VSG), factor reumatoideo (FR), concentración de fibrinógeno (FB), proteína C reactiva (PCR) y perfil de lípidos, se realizaron por métodos convencionales. El análisis estadístico se efectuó con SPSS v10.0. La VSG correlacionó con PCR, FR, FB y cHDL, (r=0,507; 0,296; 0,475 y -0,308, respectivamente); PCR con FB (r=0,613), p<0,05. El alelo 1238G se asoció con FR y Apo-B; y el alelo 721A, con cHDL y cLDL (p<0,05). Los datos muestran que los niveles de FB, cHDL, y los alelos 721A de ICAM1 y 1238G de VCAM1 se asocian con los marcadores clínicos de inflamación. Existen diferencias entre la distribución de los polimorfismos en este estudio y las reportadas para población oriental, caucásica y turca.

Palabras clave: Moléculas de adhesión; Polimorfismos de nucleótido simple; Artritis reumatoide; Colesterol de lipoproteínas de alta densidad; Colesterol de lipoproteínas de baja densidad; Fibrinógeno; Proteína C reactiva; Factor reumatoide

Summary

The genotypes were characterized using the polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphisms (PCR-RFLP) technique. The ESR (erythrocyte sedimentation rate), RF (rheumatoid factor), fibrinogen (FB), C-reactive protein (CRP) and lipid profile were measured by routine methods. Statistical analysis was performed using SPSS v10.0. The significant Pearson´s correlations were: ESR with CRP, RF, FB and HDLc, (r=0.507, 0.296, 0.475, and -0.308, respectively); CRP with FB (r=0.613), p<0.05. The results showed an association with A allele of ICAM1 polymorphism and serum levels of HDLc and LDLc; and Apo-B and FR showed an association with C allele of VCAM1 polymorphism (p<0.05). Data shows that FB and HDLc levels, and ICAM1 polymorphism allele 721A and VCAM1 polymorphism allele 1238G are associated with clinical inflammation markers in RA. Our Mexican-mestizo population showed differences with many reports (from English, American, Turkish, Japanese, Chinese, Italian, and Korean populations).

Key words: Adhesion molecules; Single nucleotide polymorphisms; Rheumatoid arthritis; Hight density lipoprotein cholesterol; Low density lipoprotein cholesterol; Fibrinogen; C reactive protein; Rheumatoid factor

INTRODUCCIÓN

Las enfermedades autoinmunes comprenden un grupo, etiológicamente heterogéneo, de patologías que presentan un amplio espectro de manifestaciones clínicas. Entre ellas la artritis reumatoide (AR) es el prototipo de enfermedad inflamatoria. Se desarrolla entre la 4ª y 7ª décadas de la vida. Presenta una prevalencia a nivel mundial del 1% (1-3). En el amplio espectro de las enfermedades articulares que cursan con inflamación, la AR requiere especial atención, porque evoluciona presentando destrucción de las articulaciones diartroideas (3). En el curso clínico de la enfermedad se presenta dolor y alteraciones articulares, y resulta en deformación y discapacidad articular. El síndrome es inequívocamente sistémico por naturaleza, pero la manifestación visible es la sinovitis. Los factores de riesgo significativos son: sexo femenino, edad avanzada y una historia familiar positiva para AR (1-3).
Un evento temprano en el mecanismo de daño articular en AR es la extravasación de leucocitos al espacio intra-articular; esta respuesta inflamatoria se favorece por la expresión de novo (en las células del endotelio vascular sinovial), de las moléculas de adhesión: E-selectina, molécula de adhesión vascular-1 (VCAM-1) y molécula de adhesión intercelular-1 (ICAM-1), que están involucradas en el desarrollo y progresión de la enfermedad (4).
La respuesta inflamatoria es el eje central en la inmunopatogenia de la AR (5); a priori la extravasación de leucocitos tiene como consecuencia redundancia en la producción de citocinas pro-inflamatorias y exacerba el proceso que origina inflamación crónica; a posteriori favorece la formación del pannus, característica que define el desarrollo de AR como un proceso patológico instalado (6).
E-selectina y VCAM-1 se expresan en el endotelio vascular activado, mientras que ICAM-1 se expresa constitutivamente e incrementa su expresión en respuesta a estímulos pro-inflamatorios; estas moléculas participan activamente en la inmunopatogenia de la enfermedad; se ha sugerido que sus formas solubles tienen una función biológica importante en el mecanismo de inflamación (7).
La AR se caracteriza como una enfermedad poligénica, en la que la interacción de múltiples genes y el ambiente pueden ser factores que contribuyan al desarrollo de la misma (5)(8).
En los genes de E-selectina, VCAM1 e ICAM1 están descritas las transversiones 561A>C y 1238G>C, y la transición 721G>A, polimorfismos de nucleótido simple (SNPs), que codifican cambio de aminoácido: 128S>R, 412G>A y 241G>R, respectivamente (9-11).
La función de E-selectina, VCAM-1 e ICAM-1, expresadas en el endotelio vascular, consiste en unirse a través de sus dominios, factor de crecimiento epidérmico (EGF), inmunoglobulina-4 (Ig₄) e Ig₃ (en los que se encuentran presentes los SNPs), a los receptores Lewis^X sialilado (sLe_x), antígeno de activación muy tardía-4 (VLA-4) y antígeno de los macrófagos-1, (Mac-1) respectivamente, expresados en la membrana de los leucocitos (12)(13); sin embargo, el efecto funcional de esos polimorfismos no se ha definido. En este contexto, se proponen como genes candidatos en la susceptibilidad para el desarrollo de AR.

MATERIALES Y MÉTODOS

Consideraciones éticas
La población de estudio se seleccionó prospectivamente del Servicio de Reumatología del Antiguo Hospital Civil de Guadalajara "Fray Antonio Alcalde", O.P.D. en Guadalajara, Jalisco, México, previa aprobación por el comité de ética [Ley General de Salud, México 1986] y se solicitó el consentimiento informado de cada uno de los individuos incluidos en el estudio de acuerdo a los lineamientos de la Asamblea Médica Mundial No. 18.

Diseño del estudio
Este fue un estudio de casos y controles, en el que se incluyeron 60 pacientes con AR clasificados de acuerdo a los criterios del American College of Rheumatology (ACR) de 1987 (14). El grupo control (CCS) lo constituyeron 60 individuos clínicamente sanos seleccionados al azar. Los pacientes con AR y CCS no relacionados entre sí, se caracterizaron como mestizos mexicanos, que de acuerdo a la definición del Instituto Nacional de Antropología son aquellos individuos con apellidos de origen castellano, nacidos en México así como tres generaciones de sus antecesores (15).

Evaluación clínica y laboratorial
Todos los pacientes y CCS se evaluaron por dos reumatólogos en forma independiente; las variables clínicas y demográficas evaluadas incluyeron actividad clínica, número de articulaciones inflamadas y dolorosas (14), edad, sexo, historia de la enfermedad y tratamiento. Se obtuvieron muestras sanguíneas para medir la citometría hemática (Cell-dyn 3700 Abbott Diagnostics'. Abbott Park, Illinois, U.S.A) que incluyó recuento total de leucocitos y plaquetas (WBC y PLT respectivamente), proteína C reactiva (PCR), factor reumatoide (FR), apolipoproteína-A1 (Apo-A1), apolipoproteína-B (Apo-B), (IMMAGE® Immunochemistry Systems. © Beckman Coulter, Inc. Fullerton, CA); velocidad de sedimentación globular (VSG), por el método de Wintrobe; y el perfil de lípidos: triglicéridos (TG), colesterol total (CT), colesterol de alta densidad (cHDL) (Synchron CX-7 Beckman-Coulter Inc., Fullerton, CA), colesterol de lipoproteínas de baja densidad (cLDL) y colesterol de lipoproteínas de muy baja densidad (cVLDL), por la fórmula de Friedewald (17)(18).

Análisis molecular de los polimorfismos por PCR-RFLP (Polymerase Chain Reaction- Restriction Fragment Length Polymorphism)
El ADN genómico se extrajo de muestras sanguíneas con EDTA, obtenidas de los pacientes y CCS, de acuerdo al método de Miller (19). Se obtuvo la secuencia completa de los genes de E-selectina, VCAM1 e ICAM1 en el banco de genes [www.ncbi.nlm.nih.gov/]. Se eligieron los iniciadores (Tabla I) que alinean con fragmentos que incluyen la región polimórfica y las enzimas de restricción que reconocen los sitios polimórficos (Tabla II).
Las reacciones de PCR se llevaron a cabo a un volumen final de 15 µL, en las condiciones de amplificación reportadas por El-Magadmi (9); Taylor (10) y Amoli (20) respectivamente para los polimorfismos 561A>C de E-selectina, 1238G>C de VCAM1, 721G>A de ICAM1. A la mezcla final de reacción se le adicionó betaine (Sigma-Aldhrich Co. ST Louis Missouri, USA ) 1 mM.

Tabla I. Secuencias de los iniciadores utilizados para amplificar las regiones polimórficas de los genes estudiados.

Tabla II. Fragmentos de restricción obtenidos.

Patrones de restricción electroforéticos
La transversión 561A>C de E-selectina no genera un sitio de restricción para la enzima Pst I. La transversión 1238G>C de VCAM1 genera el sitio de restricción para Cac 81, de igual forma que la transición 721G>A de ICAM1 para Bsr G1 (Fig. 1), por lo que los fragmentos obtenidos fueron como se muestra en la Tabla II. Para confirmar los resultados de los genotipos se realizaron por duplicado y los genotipos A/A y A/C de E-selectina, G/G y G/C de VCAM1 y G/G, G/A y A/A de ICAM1 se secuenciaron usando el ABIPRISM 310 Sequencer (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA).

Figura I. Identificación de los genotipos de E-selectina (561A>C), VCAM1 (1238G>C) e ICAM1 (721G>A).
A) Fragmento amplificado de 249 pb del exón 3 EGF en el gen de E-selectina y digeridos con Pst I:
219 pb (genotipo A/A); 249, 219 pb (genotipo A/C); 249 pb (genotipo C/C, no identificado).
B) Fragmento amplificado de 251 pb en el exón 6 del gen de VCAM1 y digerido con Cac8I de:
241 pb (genotipo G/G); 241 y 194 pb (genotipo G/C); 194 pb (genotipo C/C, no identificado).
C) Fragmento amplificado de 110 pb en del exón 4 del gen de ICAM1, y digerido con BsrGI de:
110 pb (genotipo (G/G); 110 y 90 pb (genotipo G/A); 90 pb (genotipo A/A).
Geles de agarosa al 2% teñidos con Bromuro de etidio (EtBr) (representativos de 120 muestras);
carril 1 MPM de 50 pb, carriles 2-7 muestras, carril 8 blanco de reactivos. Fotografías con 100% de contraste.

Análisis estadístico

Se realizó en PC con los paquetes estadísticos SSPS v10.0 (SPSS Inc. Chicago, Illinois, USA). Los datos se presentan en medias y desviación estándar. La comparación entre los grupos de AR y CCS para las variables clínicas se realizó con las pruebas t_Student y U_Mann-Whitney. Con la correlación de Pearson se estimó el grado de asociación entre los niveles de variables bioquímicas y de inflamación. Los genotipos se determinaron directamente por genotipificación y las frecuencias alélicas se obtuvieron por el método de conteo de los genotipos. La c² se utilizó para investigar equilibrio de Hardy-Weinberg (21).
En todas las pruebas una p<0,05 se consideró estadísticamente significativa.

RESULTADOS

En el grupo de estudio integrado por 60 pacientes clasificados con AR y 60 controles clínicamente sanos, no se encontró diferencia significativa al comparar edad y sexo entre los dos grupos.

Parámetros clínicos y perfil de lípidos
Los reactantes de fase aguda (VSG, PCR y fibrinógeno), el FR y los niveles de los parámetros hematológicos determinados (WBC, PLQ) se encontraron elevados en el grupo de AR, con respecto a los promedios del grupo control, p<0,05 (Fig. 2)(Fig. 3). Se encontraron niveles séricos incrementados de TG, CT, cLDL y cVLDL en el grupo de CCS con respecto al grupo de pacientes con AR, p<0,05 (Fig. 3).
Correlación de los parámetros clínicos y bioquímicos
Los niveles séricos de PCR, FR, FB y cHDL correlacionaron con VSG, similarmente, los niveles de PCR correlacionaron con los niveles de FB p<0,05 (Tabla III).

Figura 2. Parámetros clínicos en los pacientes con AR y CCS.
AR: artritis reumatoide n=60; CCS: controles clínicamente sanos n=60. Los datos se muestran en media±DE. t_Student, significativa a un a=0.05. WBC: Recuento de leucocitos totales (K/mL); PLT: recuento de plaquetas (K/mL); VSG: velocidad de sedimentación globular (mm/h); PCR: proteína C reactiva (mg/L); FR: factor reumatoide (UI/mL).

Figura 3. Fibrinógeno y perfil de lípidos en los pacientes con AR y CCS.
AR: artritis reumatoide n=60; CCS: controles clínicamente sanos n=60.
Los datos se muestran en media±DE. t_Student, significativa a un a=0,05; FB: Fibrinógeno; Apo-A1: Apolipoproteína-A1;
Apo B: apolipoproteina-B; TG: triglicéridos; CT: Colesterol total; cHDL: colesterol de las lipoproteínas de alta densidad
[determinación directa]; cLDL: colesterol de las lipoproteínas de baja densidad;
cVLDL: colesterol de las lipoproteínas de muy baja densidad [fórmula de Friedewald (17)]. *p<0,05.

Tabla III. Correlación de los niveles de marcadores inflamatorios, bioquímicos y FR en los pacientes con AR.

Polimorfismos VCAM1 e ICAM1
La población de CCS se encontró en equilibrio de Hardy-Weinberg (c²;NS), indicando que los alelos se encuentran distribuidos aleatoriamente en la población estudiada. En el polimorfismo 1238G>C de VCAM1, los portadores del genotipo G/G mostraron niveles incrementados de FR y disminuidos de Apo-B, p<0,05, en comparación con los portadores del genotipo G/C. Por otra parte, en el polimorfismo de 721G>A ICAM1, la concentración sérica de cLDL se encontró incrementada en los portadores del genotipo G/G, en contraste con los portadores de los genotipos G/A y A/A; por el contrario, la concentración de cHDL se encontró incrementada en los portadores del genotipo heterocigoto G/A, p<0,05 (Tabla IV).

Tabla IV. Marcadores bioquímicos en portadores de diferentes genotipos de los polimorfismos 1238G>C de VCAM1 y 721G>A de ICAM1.

Distribución de los polimorfismos en sujetos sanos de diferentes poblaciones comparados con población de mestizos mexicanos
Se compararon las frecuencias genotípica y alélica del polimorfismo 561A>C de E-selectina en la población de CCS con las reportadas para otras poblaciones de controles sanos, y se encontró una diferencia significativa (p<0,05) con turcos, japoneses, chinos, caucásicos e ingleses de origen sudasiático (Tabla V). El polimorfismo 1238G>C de VCAM1 sólo se ha estudiado en población de Jamaica, y su distribución fue diferente a la encontrada en población del occidente de México (Tabla VI). En el polimorfismo 721G>A de ICAM1, se encontró diferencia en las distribuciones genotípica y alélica de la población del occidente de México respecto a italianos, coreanos, japoneses y estadounidenses y con la distribución alélica de españoles (área de Lugo) e ingleses del noroeste de Inglaterra, p<0,05 (Tabla VII).

Tabla V. Distribución de polimorfismo 561>C E selectina en sujetos sanos de diferentes poblaciones.

Tabla VI. Distribución del polimorfismo 1238G>C de VCAM1 en sujetos sanos de Jamaica.

Tabla VII. Distribución del polimorfismo 721G>A de ICAM-1 en sujetos sanos de diferentes poblaciones.

DISCUCIÓN Y CONCLUSIONES

En el grupo de pacientes se observó actividad clínica de la enfermedad, resultado de la presencia de articulaciones dolorosas e inflamadas con rigidez matutina, propias de AR. En la práctica clínica la opinión de la actividad y severidad de la enfermedad se forma a partir de la combinación de información, como las variables clínicas y laboratoriales, pruebas radiográficas y la impresión del paciente, pero para formalizar un status del nivel de actividad clínica la asociación entre los reactantes de fase aguda, FR y niveles de cHDL dan la oportunidad de establecerla con mayor fidelidad.
Por otro lado, debido a que la AR es una enfermedad que cursa con inflamación crónica que involucra al endotelio vascular, la misma puede causar alteraciones sistémicas y metabólicas. Reportes anteriores exponen la posibilidad de que el metabolismo de lipoproteínas se altere y se favorezca la formación de placas aterogénicas (22)(23); informes de muerte prematura por eventos cardiovasculares en pacientes con AR (24), con una disminución en la esperanza de vida de 10 años, evidencian esta hipótesis.
En este contexto, se investigó el perfil de lípidos en pacientes con AR, se evaluó su relación con la condición inflamatoria y se encontró correlación. Niveles incrementados de cLDL y disminuidos de cHDL se conocen como factores de riesgo para ateroesclerosis y son significativos en el desarrollo de enfermedad cardiovascular.
En el grupo de pacientes con AR se encontró un patrón característico en el perfil de lípidos, con una disminución en los niveles de cHDL (23). Pocos estudios sobre el patrón de lipoproteínas en la AR han sido reportados; además, hay inconsistencia entre ellos.
Uno de los eventos clave en el desarrollo de ateroesclerosis es la adhesión de monocitos a las células endoteliales, con la subsecuente migración dentro de la íntima vascular. Tanto los receptores en leucocitos como las CAMs, (selectinas, VCAM-1 e ICAM-1) participan en la adhesión de monocitos al endotelio vascular (25)(26).
Sin embargo, la expresión de E-selectina, VCAM-1 e ICAM-1 en el endotelio vascular normal es relativamente baja, y está regulada por varios estímulos que incluyen citocinas pro-inflamatorias. Estudios en modelos animales e inmunohistoquímica de tejidos humanos muestran que estas CAMs están expresadas en un nivel incrementado en las placas ateroescleróticas (22).
En el mismo contexto, un incremento en la expresión de CAMs paralelo a alteraciones en el metabolismo de triglicéridos tiene la potencialidad de iniciar aterogénesis. Pacientes con niveles incrementados de triglicéridos también presentan niveles disminuidos de cHDL (27). En los pacientes con AR se encontraron niveles normales de triglicéridos con bajos niveles de cHDL, lo que puede explicar que se encuentran en control del metabolismo de lípidos debido al efecto del tratamiento con drogas modificadoras de la enfermedad, como la cloroquina.
Por otro lado, en este estudio se identificó el FR en el 97% de los pacientes con AR; la presencia del FR puede ser de significancia pronóstica, ya que los pacientes con altos títulos de FR presentan una tendencia a mayor severidad y progresión de la enfermedad y manifestaciones extra-articulares (26). Estos datos muestran altos títulos de FR que correlacionan con la VSG y se asociaron a la presencia del alelo G en el polimorfismo de 1238G>C de VCAM1. Este dato no se reporta previamente por lo que se sugiere ampliar este conocimiento en estudios posteriores.
Las frecuencias reportadas para los polimorfismos de nucleótido simple: 561A>C en E-selectina, 1238G>C en VCAM1 y 721G>A en ICAM1 en varias enfermedades (9)(29)(30) son heterogéneas. Se estudiaron estos polimorfismos por primera vez en pacientes del occidente de México con AR.
En la comparación de las distribuciones alélicas de la población mestiza del occidente de México con otras poblaciones, se encontró una semejanza con la población española, no así con las poblaciones orientales, turca y caucásica europea y americana, principalmente, lo cual se explica debido a que las distribuciones alélicas entre poblaciones son resultado de sus relaciones antropológicas. Las diferencias encontradas en la distribución genotípica con otras poblaciones pueden deberse a que en el grupo de estudio los participantes se caracterizaron como mestizos mexicanos.
En conclusión, los datos muestran que los niveles de FB, cHDL, y el alelo 721A, del polimorfismo de ICAM1 y de VCAM1 el alelo 1238G se asocian con los marcadores clínicos de inflamación.
Existen diferencias en la distribución de los polimorfismos en este estudio y los reportados para ingleses, italianos, estadounidenses caucásicos, japoneses, chinos, coreanos y turcos. Un dato importante de este estudio es la distribución para los genotipos y alelos de E- selectina, VCAM1 e ICAM1 en la población sana mestiza del occidente de México, que marca un punto de referencia para esta población.

Agradecimientos

Este trabajo se realizó con el apoyo otorgado al Dr. en C. José Francisco Muñoz Valle por el Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología (SEP-CONACyT, México-Universidad de Guadalajara), registro No. 45703-M JFMV.
Se agradece el apoyo de la Dra. en C. GE Martínez-Bonilla y Med. Esp. AG Bernard-Medina del Hospital Civil "Fray Antonio Alcalde" por la evaluación clínica de pacientes y controles. Resultados parciales fueron aceptados para su presentación en poster en "The Annual European Congress of Rheumatology", Barcelona, España, junio 2007.

Referencias bibliográficas

1. Weyand CM, Goronzy JJ. Pathogenesis of rheumatoid arthritis. Med Clin North Am 1997; 81:29-55.
2. Firestein GS. Evolving concepts of rheumatoid arthritis. Nature 2003; 423: 356-61.
3. Goronzy JJ, Weyand CM. Rheumatoid arthritis. Immunol Rev 2005; 204: 55-73
4. McMurray RW. Adhesion molecules in autoimmune disease. Semin Arthritis Rheum 1996; 25: 215-33.
5. Glocker MO, Guthke R, Kekow J, Thiesen HJ. Rheumatoid arthritis, a complex multifactorial disease: On the way toward individualized medicine. Med Res Rev 2006; 26: 63-87.
6. Lee DM, Weinblatt ME. Rheumatoid arthritis. Lancet 2001; 358: 903-11.
7. Szekanecz Z, Koch AE. Cell-cell interactions in synovitis. Endothelial cells and immune cell migration. Arthritis Res 2000; 2: 368-73.
8. Rioux JD, Abbas AK. Paths to understanding the genetic basis of autoimmune disease. Nature 2005; 435: 584-9.
9. El-Magadmi M, Alansari A, Teh LS, Ordi J, Gul A, Inanc M, et al. Association of the A561C E-selectin polymorphism with systemic lupus erythematosus in 2 independent populations. J Rheumatol 2001; 28: 2650-2.
10. Taylor JGt, Tang DC, Savage SA, Leitman SF, Heller SI, Serjeant GR, et al. Variants in the VCAM1 gene and risk for symptomatic stroke in sickle cell disease. Blood 2002; 100: 4303-9.
11. Amoli MM, Shelley E, Mattey DL, Garcia-Porrua C, Thomson W, Hajeer AH, et al. Lack of association between intercellular adhesion molecule-1 gene polymorphisms and giant cell arteritis. J Rheumatol 2001; 28: 1600-4.
12. Frenette PS, Wagner DD. Adhesion molecules-Part II: Blood vessels and blood cells. N Engl J Med 1996a; 335: 43-5.
13. Frenette PS, Wagner DD Adhesion molecules-Part 1. N Engl J Med 1996; 34: 1526-9.
14. Macchioni P, Boiardi L, Casali B, Nicoli D, Farnetti E, Salvarani C. Intercellular adhesion molecule 1 (ICAM-1) gene polymorphisms in Italian patients with rheumatoid arthritis. Clin Exp Rheumatol 2000; 18: 553-8.
15. Gorodezky C, Alaez C, Vazquez-Garcia MN, de la Rosa G, Infante E, Balladares S, et al. The genetic structure of Mexican Mestizos of different locations: tracking back their origins through MHC genes, blood group systems, and microsatellites. Hum Immunol 2001; 62: 979-91.
16. Revelle BM, Scott D, Beck PJ. Single amino acid residues in the E- and P-selectin epidermal growth factor domains can determine carbohydrate binding specificity. J Biol Chem 1996; 271: 16160-70.
17. Friedewald WT, Levy RI, Fredrickson DS. Estimation of the concentration of low-density lipoprotein cholesterol in plasma, without use of the preparative ultracentrifuge. Clin Chem 1972; 18: 499-502.
18. Gonzalez Estrada M, Rodriguez Ferrer CR, Astarloa IR, Lahera EM. Use of serum cholesterol/triglyceride ratio to discern for which individuals the Friedewald formula can be used confidently. Clin Chem 1990; 36: 1673-5.
19. Miller SA, Dykes DD, Polesky HF. A simple salting out procedure for extracting DNA from human nucleated cells. Nucleic Acids Res 1988; 16: 1215.
20. Amoli MM, Ollier WE, Lueiro M, Fernandez ML, Garcia-Porrua C, Gonzalez-Gay MA. Lack of association between ICAM-1 gene polymorphisms and biopsy-proven erythema nodosum. J Rheumatol 2004; 31: 403-5.
21. Hartl DL, Clark AG. Principles of Population Genetics. Third Ed. Sunderland MA: Sinauer Assoc, Inc. 1987; 80-87.
22. Calabresi L, Gomaraschi M, Villa B, Omoboni L, Dmitrieff C, Franceschini G. Elevated soluble cellular adhesion molecules in subjects with low HDL-cholesterol. Arterioscler Thromb Vasc Biol 2002; 22: 656-61.
23. Lupattelli G, Marchesi S, Lombardini R, Siepi D, Bagaglia F, Pirro M, et al. Mechanisms of high-density lipoprotein cholesterol effects on the endothelial function in hyperlipemia. Metabolism 2003; 52: 1191-5.
24. Park YB, Lee SK, Lee WK, Suh CH, Lee CW, Lee CH, et al. Lipid profiles in untreated patients with rheumatoid arthritis. J Rheumatol 1999; 26: 1701-4.
25. El-Miedany Y, Ashour S, Moustafa H, Ahmed I Altered levels of soluble adhesion molecules in patients with rheumatoid arthritis complicated by peripheral neuropathy. J Rheumatol 2002; 29: 57-61.
26. Bacon PA, Stevens RJ, Carruthers DM, Young SP, Kitas GD. Accelerated atherogenesis in autoimmune rheumatic diseases. Autoimmun Rev 2002; 1: 338-47.
27. Wallberg-Jonsson S, Cvetkovic JT, Sundqvist KG, Lefvert AK, Rantapaa-Dahlqvist S. Activation of the immune system and inflammatory activity in relation to markers of atherothrombotic disease and atherosclerosis in rheumatoid arthritis. J Rheumatol 2002; 29: 875-82.
28. Newkirk MM. Rheumatoid factors: host resistance or autoimmunity? Clin Immunol 2002; 104: 1-13.
29. Wenzel K, Ernst M, Rohde K, Baumann G, Speer A. DNA polymorphisms in adhesion molecule genes-a new risk factor for early atherosclerosis. Hum Genet 1996; 97: 15-20.
30. Ye SQ, Usher D, Virgil D, Zhang LQ, Yochim SE, Gupta R A. PstI polymorphism detects the mutation of serine128 to arginine in CD 62E gene - a risk factor for coronary artery disease. J Biomed Sci 1999; 6: 18-21.
31. Navarro-Hernandez RE, Oregon-Romero E, Rangel-Villalobos H, Vazquez-Del Mercado M, Ruiz-Quezada SL, Maldonado-Gonzalez M, et al. sE-Selectin expression and A561C polymorphism in relation to rheumatoid arthritis clinical activity. J Rheumatol 2006; 33: 1968-72.
32. Hiramitsu T, Yasuda T, Ito H, Shimizu M, Julovi SM, Kakinuma T, et al. Intercellular adhesion molecule-1 mediates the inhibitory effects of hyaluronan on interleukin-1beta-induced matrix metalloproteinase production in rheumatoid synovial fibroblasts via down-regulation of NF-kappaB and p38. Rheumatology (Oxford) 2006; 45: 824-32.
33. Li Y, Wei YS, Wang M, Zhang PA, Jiang XJ, Huang CX. Association between the Ser128Arg variant of the E-selectin and risk of coronary artery disease in the central China. Int J Cardiol 2005; 103: 33-6.
34. Endler G, Exner M, Raith M, Marculescu R, Mannhalter C, Endler L, et al. The E-selectin S128R polymorphism is not a risk factor for coronary artery disease in patients with diabetes mellitus type 2. Thromb Res 2003; 112: 47-50.
35. Marculescu R, Mlekusch W, Exner M, Sabeti S, Michor S, Rumpold H, et al. Interleukin-1 cluster combined genotype and restenosis after balloon angioplasty. Thromb Haemost 2003; 90: 491-500.
36. Galimberti D, Fenoglio C, Clerici R, Comi C, De Riz M, Rottoli M, et al. E-selectin A561C and G98T polymorphisms influence susceptibility and course of multiple sclerosis. J Neuroimmunol 2005; 165 (1-2): 201-5.
37. Miller MA, Kerry SM, Dong Y, Sagnella GA, Cook DG, Cappuccio FP Circulating soluble E-selectin levels and the Ser128Arg polymorphism in individuals from different ethnic groups. Nutr Metab Cardiovasc Dis 2005; 15: 65-70.
38. Borozdenkova S, Smith J, Marshall S, Yacoub M, Rose M Identification of ICAM-1 polymorphism that is associated with protection from transplant associated vasculopathy after cardiac transplantation. Hum Immunol 2001; 62: 247-55.
39. Veale DJ, Maple C, Kirk G, McLaren M, Belch JJ. Soluble cell adhesion molecules-P-selectin and ICAM-1, and disease activity in patients receiving sulphasalazine for active rheumatoid arthritis. Scand J Rheumatol 1998; 27: 296-9.
40. Gbadegesin RA, Watson CJ, Cotton SA, Brenchley PE, Webb NJ. A PCR-RFLP typing method for adhesion molecule gene polymorphisms and allele frequencies in a normal UK population. Eur J Immunogenet 2002; 29: 109-11.
41. Wenzel K, Blackburn A, Ernst M, Affeldt M, Hanke R, Baumann G, et al. Relationship of polymorphisms in the renin-angiotensin system and in E-selectin of patients with early severe coronary heart disease. J Mol Med 1997; 75: 57-61.
42. Chen DY, Lan JL, Lin FJ, Hsieh TY. Association of intercellular adhesion molecule-1 with clinical manifestations and interleukin-18 in patients with active, untreated adult-onset Still's disease. Arthritis Rheum 2005; 53: 320-7.
43. Vigano P, Infantino M, Lattuada D, Lauletta R, Ponti E, Somigliana E, et al. Intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1) gene polymorphisms in endometriosis. Mol Hum Reprod 2003; 9: 47-52.
44. Lee EB, Kim JY, Kim EH, Nam JH, Park KS, Song YW. Intercellular adhesion molecule-1 polymorphisms in Korean patients with rheumatoid arthritis. Tissue Antigens 2004; 64: 473-7.
45. Quasney MW, Waterer GW, Dahmer MK, Turner D, Zhang Q, Cantor RM, et al. Intracellular adhesion molecule Gly241Arg polymorphism has no impact on ARDS or septic shock in community-acquired pneumonia. Chest 2002; 121: 85S-6S.
46. Amoli MM, Shelley E, Mattey DL, Garcia-Porrua C, Thomson W, Hajeer AH, et al. Intercellular adhesion molecule-1 gene polymorphisms in isolated polymyalgia rheumatica. J Rheumatol 2002; 29: 502-4.
47. Chen CY, Tsao CH, Ou LS, Yang MH, Kuo ML, Huang JLç Comparison of soluble adhesion molecules in juvenile idiopathic arthritis between the active and remission stages. Ann Rheum Dis 2002; 61: 167-70.
48. Kretowski A, Wawrusiewicz N, Mironczuk K, Mysliwiec J, Kretowska M, Kinalska I. Intercellular adhesion molecule 1 gene polymorphisms in Graves' disease. J Clin Endocrinol Metab 2003; 88: 4945-9.        [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]         [ Links ]

Aceptado para su publicación el 4 de mayo de 2007