BIOQUÍMICA CLÍNICA

Respuesta del receptor de lipoproteína de muy baja densidad a estresores inflamatorios

Very low density lipoprotein receptor response to inflammatory stressors

Diego Oscar Forcato^1*, María Cecilia Sampedro^2*, Rodolfo Artola^1***, Rolando Pascual Pécora^3**, Silvia Clara Kivatinitz^3*

1. Bioquímico.
2. Doctora en Química.
3. Doctor en Ciencias Biológicas. Profesor.
4. Doctora en Química Biológica. Profesora.

* Departamento de Química Biológica, Centro de Investigaciones en Química Biológica (CIQUIBIC, UNC-CONICET), Facultad de Ciencias Químicas, Universidad Nacional de Córdoba, Argentina.
** Cátedra de Bromatología y Toxicología, Depto. de Química Industrial y Aplicada, Facultad de Ciencias Exactas, Físicas y Naturales, Universidad Nacional de Córdoba, Argentina.
*** Grupo Biotar Banco de Tejidos Humanos, Rosario, Santa Fe, Argentina.

Resumen

Se estudió la regulación del receptor de lipoproteína de muy baja densidad (VLDLR) en dos tipos de células que intervienen en la respuesta inflamatoria: hepatocitos (HepG2) y células linfocitarias de bazo de ratón (CMB) por agentes implicados en la inflamación: VLDL o Gemfibrozil, lipopolisacárido bacteriano (LPS) para HepG2 o Concanavalina A (ConA) para CMB. Se determinaron por citometría de flujo las subpoblaciones de CMB y de HepG2 en distintas fases del ciclo celular (G1 y G2/M) con ioduro de propidio y las VLDLR+ con VLDL fluorescente. Entre 10 a 60 por ciento de células expresaron VLDLR dependiendo de las condiciones experimentales. El enfrentamiento con LPS o ConA produjo un aumento de células VLDLR+. El tratamiento con Gemfibrozil disminuyó el número de hepatocitos en reposo VLDLR+ pero incrementó significativamente (más de dos veces) los hepatocitos VLDLR+ en fase G2/M. En los cultivos de CMB Gemfibrozil aumentó por igual el porcentaje de células VLDLR+ quiescentes y en G2/M. El comportamiento de estos tipos celulares con VLDL fue distinto: CMB no mostró cambios en las subpoblaciones VLDLR+, los hepatocitos mostraron disminución de VLDLR+ tanto en fase G1 como en fase G2/M. Se concluyó que el estudio de la regulación de VLDLR en distintas células facilitará el diseño de fármacos específicos para el tratamiento de enfermedades de etiología inflamatoria.

Palabras clave: Inflamación; Lipoproteínas; Receptor de lipoproteína de muy baja densidad; Gemfibrozil

Summary

The regulation of the VLDL receptor (VLDLR) by molecules involved in the inflammation process (lipopolysaccharide, LPS; Concanavalin A, ConA, VLDL or Gemfibrozil) in two cellular types implied in the inflammatory response, hepatocytes (HepG2) and lymphocitary cells from mice spleen (CMB), was studied. Different subpopulations of CMB and HepG2 in different cell cycle phases (G1 and G2/M) were analyzed using flow citometry techniques with propidium iodide, and the VLDLR+ with fluorescent VLDL. In cultures of both cell types, it was observed that 10 to 60% of the cells expressed the VLDLR (VLDLR+ cells) indistinctly of the culture conditions. VLDLR+ cells belonged equally to cells in the quiescent and in the synthesis or mitosis phase of the cell cycle. Challenging them with LPS or ConA an increase in the percentage of VLDLR+ cells was produced. Gemfibrozil treatment decreased the number of resting hepatocytes VLDLR+ but increased significantly (more than twice) the number of hepatocytes VLDLR+ in phase G2/M. In hepatocytes there was almost the same proportion of VLDLR+ cells that were in the G1 or in the G2/M phase of the cell cycle. It is concluded that the study of VLDLR regulation will facilitate the design of new drugs to treat inflammatory diseases.

Key words: Inflammation; Lipoproteins; Very low density lipoprotein receptor; Gemfibrozil

INTRODUCCIÓN

Hay evidencias acerca de que la lipoproteína de muy baja densidad (VLDL) es una molécula proinflamatoria por sí misma o debido a las moléculas que transporta, por ejemplo la proteína C-reactiva, un marcador de fase aguda (1). También es conocido que los fármacos que disminuyen los niveles de VLDL circulante poseen propiedades anti-inflamatorias (2) y que las drogas hipolipemiantes y estresores inflamatorios alteran los niveles del receptor de (VLDLR) (3)(4). Recientemente, estudios sobre genes involucrados en enfermedades de etiología inflamatoria, como la diabetes y la obesidad, han demostrado que el gen de VLDLR es un candidato para el manejo de estas enfermedades (5). El nivel de triglicéridos en plasma, principal constituyente de VLDL, aumenta durante la infección/inflamación como respuesta a varias citoquinas como TNF, IL-1, IL-2, IL-6, y disminuye por IL-4, una citoquina anti-inflamatoria (6)(7). Recíprocamente, cuando se cultivan linfocitos T con VLDL estos disminuyen la producción de IL-4 y aumentan la de IL-2 (8). Otro antecedente que une los niveles de lipoproteínas en sangre y de citoquinas es que un inhibidor de hidroximetil glutaril coenzima A reductasa, la simvastatina, reduce el nivel de citoquinas proinflamatorias y aumenta el nivel de IL-4 en un modelo de inflamación en ratón (9), y que otro tipo de hipolipemiantes, como los fibratos, limitan la expresión de citoquinas inflamatorias en los linfocitos T (10).
El hígado es otro actor importante en la inflamación ya que la mayoría de las proteínas de fase aguda son sintetizadas principalmente en este órgano y estimuladas por citoquinas, principalmente IL-6 (11). En los hepatocitos existe una interrelación entre el metabolismo lipídico y de las lipoproteínas con el estrés inflamatorio y fármacos hipolipemiantes (12)(13). Se han encontrado, además, vínculos entre los niveles de interleuquinas inflamatorias y la dieta. El consumo de alimentos con alto contenido graso produce un aumento en los niveles de IL-6 plasmática y una disminución en los del factor de necrosis tumoral (TNF-a) en humanos (14). El receptor de VLDL es regulado positivamente en el hígado por dietas ricas en ácido linoleico conjugado (15) e hipolipemiantes (3).
Por lo tanto, hay múltiples evidencias que vinculan los niveles de VLDL y otras moléculas biosintetizadas por el hígado y marcadores de inflamación sintetizados en parte por los linfocitos, pero no hay al momento en la literatura datos que vinculen el VLDLR de hepatocitos con inflamación. El objetivo del presente trabajo fue relacionar la expresión del receptor de VLDL con la acción directa sobre las células hepatocitarias o linfocitarias de moléculas involucradas en la respuesta inflamatoria y el metabolismo lipídico, utilizando modelos in vitro. Para ello se cocultivaron células hepatocitarias humanas (HepG2) o linfocitos de bazo de ratón, con mitógenos inespecíficos (lipopolisacáridos de dos bacterias gram-negativas y Concanavalina A (ConA), respectivamente). HepG2 es una línea celular ampliamente usada para estudiar el metabolismo de las lipoproteínas (16)(17), receptores de lipoproteínas (18)(19) y de proteínas de fase aguda como respuesta a la inflamación inducida por LPS (20) o el efecto de fibratos (21)(22). El cultivo de linfocitos con mitógenos inespecíficos ha sido utilizado como un modelo de inflamación in vitro (23) e inclusive como método diagnóstico de hipercolesterolemia familiar (24).

MATERIALES Y MÉTODOS

Materiales

El anticuerpo policlonal anti-receptor de VLDL fue un generoso regalo de Keith McCrae (Case Western Reserve University School of Medicine, EE.UU.). El anticuerpo policlonal de conejo contra Apo AI fue producido en este laboratorio a partir de Apo AI humana purificada mediante SDS-PAGE. El fragmento F(ab)2 de anticuerpo de cabra contra conejo conjugado con FITC (isotiocianato de fluoresceína), el ioduro de propidio y la droga Gemfibrozil fueron comprados a Sigma-Aldrich. El conjunto de reactivos para marcar proteínas covalentemente con Alexa 488 fue comprado a Invitrogen (EE.UU.) y los reactivos para la medición de colesterol a Wiener Lab (Argentina). Todos los reactivos químicos usados fueron de grado analítico y se emplearon sin ulterior purificación.

Cultivos celulares

Las células HepG2 (derivadas de hepatoblastoma humano) fueron cultivadas en cápsulas de Petri de 100 mm con medio Dulbecco MEM (DMEM, GIBCO, Grand Island, NY, EE.UU.). En estas condiciones (cultivo sin lipoproteínas provenientes del suero fetal bovino) cuando las células llegan a confluencia expresan el receptor de LDL y producen las apolipoproteínas y lipoproteínas que se acumulan en el medio, razón por la cual esta línea celular es ampliamente usada para estudiar el metabolismo de las lipoproteínas (16). Para los estudios de unión de VLDL las células se cultivaron en cápsulas de Petri de 30 mm, se lavaron dos veces con tampón fosfato salino (PBS) y se incubaron en DMEM suplementado con suero deficiente en lipoproteína (LPDS) por 24-48 h antes de los experimentos.

Preparación de LPDS

El LPDS fue preparado mediante ultracentrifugación (300.000 x g por 2 h a 15 °C) ajustando la densidad del suero fetal bovino a 1.250 g/mL por adición de KBr. El LPDS resultante fue dializado contra PBS/EDTA·Na₂ 5 mM, pH 7,4, a 4 °C durante 1 hora y esterilizado mediante filtración con filtro de poro de 0,2 µm. El contenido proteico del LPDS fue de 40 g/L.

Aislamiento y marcación de VLDL humana

VLDL humana (que contenía IDL), se obtuvo de suero de individuos normolipémicos en ayunas (8). El fraccionamiento fue realizado sembrando el suero (d<1,006 g/mL) sobre una solución de KBr (d=1,019 g/mL) y centrifugado a 300.000 x g en un rotor TLA-100.2 en una ultracentrífuga de mesa Optima-TLX (Beckman Coulter, Palo Alto, EE.UU.) durante 2 h (Beckman Ins.). Las lipoproteínas de distintos individuos fueron mezcladas y dializadas contra PBS/ EDTA·Na₂ 5 mM, pH 7,4, a 4 °C durante 1 hora y esterilizadas mediante filtración con filtro de poro de 0,2 µm (Millipore, Molsheim, France). Esta preparación fue ajustada a 0,145 mg de proteína/mL. La pureza y estado oxidativo de las lipoproteínas fueron examinados mediante electroforesis en geles de poliacrilamida. La VLDL obtenida fue marcada covalentemente con Alexa 488 (Molecular Probes, Inc. Eugene, OR, EE.UU.), sonda que fluoresce en las longitudes de onda del verde, según las instrucciones del fabricante. La VLDL marcada con Alexa (VLDL-Alexa) fue separada del fluorescente sin reaccionar mediante ultracentrifugación en iguales condiciones a las de su obtención.

Purificación de células mononucleares de bazo de ratón (CMB)

Se extrajeron bazos provenientes de ratones Balb-c (CNEA, Argentina) de entre 6 y 8 semanas de los cuales se obtuvieron suspensiones de células mediante homogeinización. Los eritrocitos fueron lisados mediante una breve incubación en NH₄Cl 8,3 g/L en tampón 0,01 M de Tris-HCl, pH 7,5 (tampón de lisis de glóbulos rojos, Sigma Chemical Co., Argentina). Las células remanentes fueron lavadas 3 veces con RPMI-1640 (el medio Roswell Park Memorial Institute 1640 fue desarrollado en ese instituto por Moore).

Citometría de flujo y ensayos de unión

Las células HepG2 fueron despegadas de la cápsula de Petri con PBS/EDTA·Na₂ 2 mM estéril, lavadas y resuspendidas en PBS. Para los ensayos de unión al receptor de VLDL, aproximadamente 300.000 células en un volumen de 50 µL fueron incubadas a 4 °C durante 3 horas junto con el agregado de 15 µL de VLDL-Alexa (0,145 mg/mL de proteína), o con 15 µL de VLDL-Alexa y anticuerpo anti-VLDLR en exceso para inhibir la unión de VLDL-Alexa a su receptor específico. Luego de la incubación, las células fueron lavadas con PBS y analizadas en un citómetro de flujo FACScan (Becton Dickinson, Los Angeles, California, EE.UU.) equipado con un láser de argón de 15-mW. Las células positivas para VLDLR fueron seleccionadas analizando los datos obtenidos con el software libre WinMDI 1.8. La expresión del VLDLR se definió por un marcador en el histograma de fluorescencia del canal verde, green MFCh, que abarcó las intensidades suprimidas por la coincubación de VLDL-Alexa con el anticuerpo anti-VLDLR.
En los ensayos con CMB de ratón, 1 x 10⁶ células/mL fueron incubadas en RPMI (24 pocillos/placa) a 37 °C durante 48 horas en presencia o ausencia de ConA (3 µg/mL) en un volumen total de 2 mL. Las células fueron entonces lavadas con Solución Salina Balanceada de Hanks que contenía 1% de albúmina sérica bovina y preincubadas con anticuerpos anti-CD32/CD16 de ratón por 1 hora a 4 °C para bloquear la unión inespecífica de inmunoglobulinas. Para los ensayos de unión al VLDLR y el análisis de las subpoblaciones VLDLR+ se procedió de igual manera que con las células HepG2. Para identificar las subpoblaciones de linfocitos CD4+ y/o CD25+ se utilizaron anticuerpos monoclonales anti-CD4 o anti-CD25 marcados con Ficoeritrina (fluorescente rojo) (1 µg/10⁶ células, Pharmingen, San Diego, CA, EE.UU.) los cuales fueron incubados simultáneamente con VLDL-Alexa o con VLDL-Alexa más anti-VLDLR durante 1 h a 4 °C. Las células fueron finalmente lavadas 3 veces con solución salina de Hanks y analizadas por citometría de flujo.

RESULTADOS

Respuesta de los modelos celulares al estrés inflamatorio

Primero se ensayó la respuesta de los modelos celulares simulando situaciones de estrés inflamatorio para comparar la respuesta en cultivo con aquella descripta in vivo.

Expresión de IL-2R y CD4 en células de bazo de ratón en respuesta a un mitógeno inespecífico, a un hipolipemiante y a VLDL

IL-2R (CD25) es un antígeno de activación de CMB y CD4 es un marcador de linfocitos T cooperadores. En la Figura 1 se observa que en condiciones controles, es decir células de bazo de ratón cultivadas sin ningún agregado, la mayoría de las células no expresaron CD25 y aproximadamente un tercio fueron células positivas para CD4. Cuando se las cultivó con el mitógeno inespecífico, simulando condiciones de inflamación, hubo un gran aumento en el número de células CD25 positivas (del orden de 10 veces, p≤0,001) y un leve incremento en las CD4. Gemfibrozil no modificó el porcentaje de células CD25 pero disminuyó drásticamente el número de linfocitos cooperadores (más de tres veces, p≤0,001).

Figura 1. Expresión de receptor de IL-2 y CD4 en células de bazo de ratón cultivadas en presencia de un mitógeno inespecífico (ConA), de un hipolipemiante (Gemfibrozil) y de VLDL.
Las barras representan el número de células (de un total de 10.000) positivas para receptor de IL-2 (blancas) o para CD4 (negras). Los resultados se expresan como promedio de tres experimentos realizados por triplicado y las desviaciones estándares correspondientes. Control: Células mononucleares de bazo de ratón (CMB), ConA: CMB cocultivadas con Concanavalina A (mitógeno de células T), GEM: CMB cocultivadas con Gemfibrozil 400 µM, VLDL: CMB cocultivadas en presencia de VLDL (2 µg proteína/mL).

Acumulación de apolipoproteína AI (Apo AI) en cultivos de células hepatocitarias humanas en respuesta a un mitógeno inespecífico, a un hipolipemiante y a VLDL

Se determinó apolipoproteína AI (Apo AI) en los sobrenadantes de cultivos de células HepG2 y se observó que LPS disminuyó a valores no detectables la acumulación de esta apolipoproteína (Fig. 2).
Gemfibrozil aumentó más de cinco veces la acumulación de Apo AI en el medio (p≤0,001) como ha sido ya descripto por otros grupos (25)(26). El cocultivo de células HepG2 con VLDL no afectó los niveles de Apo AI en el medio pero sí se observó un aumento al doble los de Apo B (datos no mostrados) y resultados obtenidos por otros laboratorios (27).
Estos resultados muestran que tanto las células CMB como las HepG2 responden en forma similar a sus análogos in vivo. Así, las células cocultivadas con ConA o LPS (estímulo inflamatorio) regulan la expresión o producción de los antígenos o apolipoproteínas en forma similar a lo hallado en modelos animales o en humanos. Esto mismo se observa cuando en lugar del estímulo inflamatorio se las cultiva con Gemfibrozil o con VLDL.

Figura 2. Acumulación de apolipoproteína AI en cultivos de hepatocitos humanos en presencia de un mitógeno inespecífico (LPS), de hipolipemiante (Gemfibrozil) y de VLDL.
Las barras representan el número de unidades arbitrarias de Apolipoproteína AI determinadas por enzimoinmunoensayo en los sobrenadantes de cultivos de células HepG2. Los resultados se expresan como promedio de tres experimentos realizados por triplicado y las desviaciones estándares correspondientes. Control: Células HepG2, LPS EC: HepG2 cocultivadas con lipopolisacárido extraído de Escherichia Coli, LPS EC: HepG2 cocultivadas con lipopolisacárido extraído de Pseudomonas aeruginosa, GEM: HepG2 cocultivadas con 400 µM Gemfibrozil, VLDL: HepG2 cocultivadas en presencia de VLDL (2 µg proteína/mL).

Expresión del receptor de VLDL en células CMB y hepatocitos humanos

Habiéndose comprobado cómo los estresores inflamatorios ensayados regularon la expresión de los marcadores de inflamación en cultivo, se procedió a analizar la regulación de VLDLR en ambos modelos celulares. La utilización y metabolismo de los ácidos grasos cambia con el ciclo celular y afecta la expresión de receptores de lipoproteína, por lo tanto se decidió analizar la expresión de VLDLR en las células según el estadío del ciclo celular.
Se analizó la población de células en los distintos estadíos del ciclo celular utilizando la técnica del ioduro de propidio y se las relacionó con el tamaño celular (forward scatter). En ambos tipos de células se observó que las células grandes corresponden, en más de un 90%, a células en fase G2/M. Se analizó la cantidad de células de bazo de ratón y HepG2 que expresaban VLDLR en distintas condiciones, encontrándose que los valores no fueron inferiores al 10% ni superiores al 60% de células. Estos experimentos fueron agrupados, según el número de células VLDLR+, en dos grupos: se designó Bajo al que agrupó aquellos con menos del 30% y Alto al que reunió aquellos con más del 30%. En las células CMB siempre el mayor número de células que expresan VLDLR corresponden a células en fase G1 (forward scatter pequeño). En los cultivos de hepatocitos en el grupo Bajo la cantidad de éstas que están en fase G1 o G2/M es igual, mientras que en el grupo Alto las células en fase G2/M superan significativamente a aquellas en fase G1. Por lo tanto, no se evidencia relación directa entre la expresión de VLDLR y el ciclo celular.
En las células de bazo de ratón ConA aumentó seis veces la cantidad de células en G2/M que expresaban VLDLR (p≤0,001), siendo no significativa su acción en la población en G1 (Fig. 3). Gemfibrozil aumentó las células VLDLR+ en las dos poblaciones celulares (más de dos veces en las G1 y dos veces en las G2/M, p≤0,001), en cambio, el cocultivo con VLDL no produjo ningún efecto significativo sobre las poblaciones de células VLDLR+ (Fig. 3).
En la Figura 4 se observa que el cocultivo de células HepG2 con LPS produjo un aumento de células VLDLR+ (más del doble) que fue más evidente en la población de células que han progresado en el ciclo celular (casi tres veces, p≤0,001) que en aquellas quiescentes. Gemfibrozil aumentó las células VLDLR+ a la concentración más alta ensayada (2,4 veces, p≤0,001) y no produjo efecto a concentraciones menores (datos no mostrados). A la dosis más alta Gemfibrozil aumentó significativamente la proporción de células en G2/M VLDLR+. VLDL disminuyó la cantidad de hepatocitos VLDLR+ (30%); la disminución fue más notoria en la población de células en fase G2/M del ciclo celular.

Figura 3. Expresión de VLDLR en células de bazo de ratón quiescentes y en células proliferantes en presencia de ConA, Gemfibrozil y VLDL.
Las barras representan el número de aumento con respecto al experimento CONTROL del número de células positivas para receptor de VLDL en fase G1 (blancas) o G2/M (negras). Los resultados se expresan como promedio de tres experimentos realizados por triplicado y las desviaciones estándares correspondientes. Control: Células mononucleares de bazo de ratón (CMB), ConA: CMB cocultivadas con Concanavalina A (mitógeno de células T), GEM: CMB cocultivadas con Gemfibrozil 400 µM, VLDL: CMB cocultivadas en presencia de VLDL (2 µg proteína/mL).

Figura 4. Expresión de VLDLR en hepatocitos humanos quiescentes y proliferantes en presencia de LPS, Gemfibrozil y VLDL.
Las barras representan el número de aumento con respecto al experimento CONTROL del número de células positivas para receptor de VLDL en fase G1 (blancas) o G2/M (negras). Los resultados se expresan como promedio de tres experimentos realizados por triplicado y las desviaciones estándares correspondientes. Control: Células HepG2, LPS EC: HepG2 cocultivadas con lipopolisacárido de Escherichia Coli, LPS EC: HepG2 cocultivadas con lipopolisacárido de Pseudomonas aeruginosa, GEM: HepG2 cocultivadas con Gemfibrozil 400 µM, VLDL: HepG2 cocultivadas en presencia de VLDL (2 µg proteína/mL).

DISCUSIÓN Y CONCLUSIONES

En este estudio se analizó cómo el nivel de VLDLR es afectado por dos estresores inflamatorios (ConA y LPS) que producen una respuesta inflamatoria in vitro en dos tipos celulares que intervienen en la respuesta inflamatoria y que son actores importantes en el metabolismo lipídico: células del sistema inmune y hepatocitos (21)(22). En ambos tipos celulares los agentes produjeron un aumento en la cantidad de células que exhibieron VLDLR, sobre todo en la población de células en fase G2/M. Este hallazgo podría estar relacionado con el cambio en el metabolismo de los lípidos que estas células experimentan al ser enfrentadas a un estímulo mitogénico.
Gemfibrozil aumentó la cantidad de células de bazo de ratón y hepatocitarias que expresaron VLDLR. Este hallazgo concuerda con el aumento de expresión de VLDLR que este fibrato produce en hígado de conejo (3) y en otros tipos de células (28). En linfocitos T la azatioprina, fármaco con acción inmunosupresora y antiinflamatoria, produce un aumento de VLDLR (29) pero estos resultados son los primeros en la literatura que relacionan fibratos y VLDLR en células linfocitarias. Se sabe que el receptor x de farnesoide (FXR) induce la expresión de VLDLR en HepG2 (30) y que el tratamiento con fibratos aumenta el ARN mensajero de FXR; estos datos están de acuerdo con el aumento de VLDLR por Gemfibrozil (Fig. 3)(Fig. 4).
La observación de que Gemfibrozil disminuye la proporción de células CD4 agrega un mecanismo más a través del cual este fármaco posee efectos antiinflamatorios y no sólo hipolipemiantes (31). Por otra parte, esta observación es análoga al efecto de los fenofibratos que disminuyeron el número de células T CD4+ infiltradas en un modelo de enfermedad autoinmune en ratones (32). VLDL no produjo cambios ni en la población de células activadas ni en las células CD4+. Por lo tanto, estos resultados apoyan la utilización de este modelo de inflamación in vitro, sustentando los resultados de Ianaro et al. (23) y Chan et al. (24).
Las proteínas negativas de fase aguda disminuyen sus niveles en sangre e hígado durante la respuesta inflamatoria aguda. Entre las proteínas de fase aguda negativas existen varias relacionadas con lipoproteínas, de las cuales la Apo AI es la menos estudiada. Se ha demostrado que los niveles de Apo AI disminuyen notablemente durante la respuesta inflamatoria aguda en ratones (33), cerdos (34) y humanos (35). Los resultados aquí mostrados van en la misma dirección y demuestran que el LPS produce este efecto directamente sobre la célula hepatocitaria.
Es interesante que el comportamiento de las células ensayadas, cuando fueron cocultivadas con VLDL, fue distinto, ya que las células de bazo de ratón no mostraron cambios ni en la cantidad de células CD4, CD25 o VLDLR, mientras que los hepatocitos mostraron respuesta tanto en los niveles de apolipoproteína B en el medio como en el aumento de células VLDLR+ en fase G2/M. Esta diferencia sin duda está relacionada a las distintas funciones metabólicas, sobre todo en lo atinente al metabolismo de lípidos, que cumplen las células del sistema inmune y las hepáticas.
Se concluye que el receptor de VLDL es una molécula donde convergen estímulos inflamatorios y del metabolismo de los lípidos. Estudiar su regulación es necesario para evaluar su utilización como marcador de inflamación relacionada con dislipemias como se ha sugerido para la Apo AI (36). Además, de estos estudios podrían desarrollarse nuevos fármacos más específicos que sirvan en el tratamiento de enfermedades como la aterosclerosis y la diabetes. Por último, los resultados están en línea con los intentos de utilizar la terapia génica con VLDLR para controlar la hiperlipemia y de enfermedades como la diabetes que cursan con inflamación en ratones deficientes en receptor de LDL (37).

Correspondencia

DRA. SILVIA CLARA KIVATINITZ
Departamento de Química Biológica
Facultad de Ciencias Químicas, Universidad Nacional de Córdoba
Ciudad Universitaria, 5000 Córdoba, Argentina
Tel: (54) (351) 433-4171 int. 228
Fax: (54) (351) 433-4074
E-mail: skivat@fcq.unc.edu.ar

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Aceptado para su publicación el 28 de septiembre de 2007