BIOQUÍMICA CLÍNICA

Intervalos de referencia para la b₂ microglobulina sérica empleando dos enzimoinmunoensayos

Reference intervals of serum b₂ microglobulin using two different immunoassays

Andrea Elena Larregina^{1 a}, Juan Tentoni^{2 b}, Paula Mariela Bermúdez^{2 b}, Alejandra Larregina^{1 a, b} y Nélida Nora Polini^{2 b, c}

1. Bioquímica
2. Doctor en Bioquímica
3. Médica Especialista en Hematología

a) IACA Laboratorios, San Martín 68, (8000) Bahía Blanca
b) Unidad de Hematología y Hemoterapia del Hospital Municipal de Agudos "Dr. Leónidas Lucero", Estomba 964, (8000) Bahía Blanca
c) Departamento de Biología, Bioquímica y Farmacia de la Universidad Nacional del Sur, San Juan 670, (8000) Bahía Blanca

Resumen

La obtención de un intervalo de referencia es importante para la correcta interpretación de los resultados, toma de decisiones y seguimiento clínico de los pacientes que integran la población del lugar. Los objetivos de este trabajo fueron obtener y validar los intervalos de referencia de la b₂ microglobulina sérica en la ciudad de Bahía Blanca. Se emplearon simultáneamente dos ensayos inmunoenzimáticos. Como población de referencia se tomaron individuos que concurrieron a donar sangre a la Unidad de Hematología y Hemoterapia del Hospital Municipal de Agudos "Dr. Leónidas Lucero" y estudiantes de Bioquímica de la Universidad Nacional del Sur, previo interrogatorio para descartar posibles alteraciones preanalíticas. A la muestra de referencia seleccionada se le extrajo sangre venosa. Los intervalos de referencia obtenidos fueron de 0,78 a 1,47 mg/L para el primer método y de 1,18 a 2,36 mg/L para el segundo. En el primer caso el rango obtenido no coincidió con el reportado por el fabricante. Los dos métodos no resultaron comparables ni en exactitud ni en precisión. De este estudio se desprende que cada sistema de medición debería informarse con su correspondiente intervalo de referencia.

Palabras clave: b₂ microglobulina; Intervalos de referencia

Summary

The creation of a reference interval is important for the accurate diagnosis and prognosis on the local population. The aims of this study were to determine and verify the reference interval of serum b₂ microglobulin in Bahia Blanca. Two different immunoenzymatic assays were used simultaneously. The reference population was taken among volunteer blood donors who donated at the Hematology and Hemotheraphy Unit of the Hospital Municipal de Agudos "Dr. Leónidas Lucero", and Biochemistry students from the Universidad Nacional del Sur. Preanalytical alterations were ruled out using a questionnaire, and afterwards, venous blood samples were obtained. The calculated reference intervals were 0.78 to 1.47 mg/L and 1.18 to 2.36 mg/L for each method respectively. In the first case, it disagreed with that reported by the manufacturer. None of the assays was comparable, neither in accuracy nor in precision. This study shows that each measurement system should be informed with its corresponding reference interval.

Key words: b₂ microglobulin; Reference intervals

Introducción

La b₂ microglobulina (b₂m) fue descubierta en 1968 e identificada como la cadena liviana de los antígenos de histocompatibilidad de clase I (1). Está codificada en el cromosoma 16 y pertenece a la superfamilia de las inmunoglobulinas. Estos antígenos están en la membrana celular de todas las células nucleadas. No se conoce totalmente su función pero se cree que participan en la síntesis de las proteínas transmembrana (2-4).
El 95% de la proteína es eliminada por filtración glomerular, pero el túbulo proximal reabsorbe el 99% por endocitosis, por lo que un aumento superior a 370 μg en orina de 24 horas es evidencia de disfunción tubular (5)(6).
Se ha observado un aumento de la tasa de síntesis o liberación hacia el pool sérico, así como de la velocidad de su aclaración en diversas patologías como enfermedad de Wilson; anemia de Fanconi; galactosemia congénita; nefrocalcinosis; artritis reumatoidea; nefritis intersticial; nefrotoxicidad por: metales pesados, ciclosporina, aminoglucosidos, cisplatino y también en los transplantados de riñón (7)(8).
En cambio, su aumento en pacientes con función renal normal, sugeriría un incremento de producción y/o liberación como en las enfermedades linfoproliferativas (mieloma múltiple, linfomas Hogdkin y no Hogdkin y leucemia linfocítica crónica), lupus eritematoso, artritis reumatoidea, síndrome de Sjögern, infección por citomegalovirus, hepatitis viral, Epstein Barr, transplantados renales y pacientes dializados (9-11).
La obtención de un intervalo de referencia es importante para la correcta interpretación de los resultados, toma de decisiones y seguimiento clínico de los pacientes que integran la población del lugar donde se ejerce la profesión (12)(13).
El objetivo de este trabajo fue obtener un intervalo de referencia para la b₂m en esta población y realizar el análisis comparativo de dos métodos para interpretar correctamente los resultados.

Materiales y Métodos

DISEÑO DEL ESTUDIO

Se trata de un estudio prospectivo tipo cohorte.

POBLACIÓN

La muestra de referencia fue seleccionada de la población general que concurrió a donar sangre a la Unidad de Hematología y Hemoterapia del Hospital Municipal de Agudos "Dr. Leónidas Lucero" así como de estudiantes de la carrera de Bioquímica de la Universidad Nacional del Sur, clínicamente sanos. Se incluyeron 126 individuos (61 hombres y 65 mujeres), con consentimiento informado.
Los criterios de exclusión fueron: edad menor de 18 y mayor de 65 años, antecedentes patológicos, embarazo y lactancia, ingesta de medicamentos, exposición laboral a tóxicos e individuos fumadores.

MUESTRA

Se recolectaron 5 mL de sangre venosa por punción en la vena antecubital, entre las 8 y las 10 horas, con el paciente un reposo durante al menos 15 minutos y con un ayuno entre 8 a 12 horas. Se descartaron las muestras lipémicas o hemolizadas. Cada muestra se recolectó en tubos con acelerador DVS y se dejó a temperatura ambiente 30 min, centrifugándose luego por 15 min a 3.000 rpm, antes de la hora de extracción. El suero obtenido se fraccionó en tubos plásticos y se conservó a -20 ºC hasta su procesamiento. El período de conservación máximo fue de 15 días.

EQUIPOS DIAGNÓSTICOS EMPLEADOS

Equipo 1 = Enzimoinmunoensayo de micropartículas MEIA de Abbott utilizando un analizador automático AXSYM (Illinois-EE.UU.).
Equipo 2 = Enzimoinmunométrico por quimioluminiscencia en fase sólida utilizando el analizador automático IMMULITE / IMMULITE 1000 (Los Angeles, EE.UU.).
Se empleó igual lote de reactivos para cada marca y sendas calibraciones, analizándose durante un período de 18 días la misma muestra en replicados de a 2.
Se realizaron estudios de la precisión y exactitud de los dos sistemas comerciales.

ANÁLISIS ESTADÍSTICO

Se calcularon los intervalos de referencia mediante métodos no paramétricos siguiendo los lineamientos de la guía NCCLS C28-A2, mediante el uso de los percentiles 2,5% y 97,5% (14). Se excluyeron previamente los valores aberrantes por la observación de los histogramas (Figs. 1 y 2), regla del espacio intercuartílico y test de Dixon (15).

Figura 1. Histograma de frecuencia de la ß2m sérica utilizando el equipo comercial AXSYM (n:126).

Figura 2. Histograma de frecuencia de la b₂m sérica utilizando el equipo comercial IMMULITE (n:126).

Para la comparación de precisión y exactitud se utilizaron las pruebas F de Snedecor y t de Student respectivamente, previa comprobación de la homogeneidad de las muestras según el test de Kolmogorov-Smirnoff (16).
El laboratorio posee un Sistema de Gestión de Calidad que cumple con los requisitos de la norma ISO 9001:2000, se encuentra acreditado por la Fundación Bioquímica Argentina y participa activamente en programas externos de calidad.

Resultados

Los estudios de las precisiones de cada método arrojaron resultados aceptables para el analito medido (Tabla I). Los métodos no resultaron comparables en su exactitud (Prueba t de Student t: -15,5, p<0,001) ni en su precisión (Prueba F de Snedecor F: 2,96, p< 0,05). Los resultados obtenidos justificaron la obtención de intervalos de referencia para cada método. Finalmente se compararon los intervalos de referencia obtenidos con los provistos por ambas empresas comerciales (Tabla II).

Tabla I. Resultados del estudio de precisión analítica en ambos métodos.

Tabla II. Intervalos de referencia hallados para cada método.

Discusión y Conclusiones

Los intervalos de referencia obtenidos por cada equipo no resultaron intercambiables.
Si se emplea el método del equipo AXSYM, se debe utilizar el IR obtenido pues no se verifica el provisto por el fabricante. La información aportada por esta casa comercial es sobre una muestra no representativa de individuos (n=50) en donde no se especifica ni el sexo ni la edad de los mismos. Además, se utilizan medidas paramétricas de centralización y dispersión (media: 0,99 mg/L y desvio estándar: 0,16 mg/L). El nuevo IR hallado en este trabajo, con un rango de 0,69 mg/L, disminuye el número de falsos positivos, coincidiendo este hallazgo con una población clínicamente normal.
En cambio, si se emplea el método del equipo IMMULITE se puede utilizar el IR declarado por el fabricante. Esta concordancia se debería probablemente a que la población estudiada es estadísticamente representativa, se detalla la edad y el sexo (n=794: 424 varones y 370 mujeres entre 20 y 70 años) y brinda información en percentiles. El nuevo IR hallado en este trabajo, si bien su rango de 1,18 mg/L es menor, no tiene significación clínica puesto que el corrimiento es hacia valores inferiores normales.
La mayor imprecisión observada en el sistema IMMULITE podría deberse a la dilución manual previa de la muestra.
Los intervalos de referencia hallados para la b₂ microglobulina sérica permitirán la toma de decisiones clínicas correctas, evitando el uso de los proporcionados por los fabricantes, obtenidos con otras poblaciones.

CORRESPONDENCIA

PROF. DRA. NÉLIDA N POLINI
Rodríguez 1335
B8001FFE BAHÍA BLANCA, Provincia de Buenos Aires
E-mail: nnpolini@uns.edu.ar

Referencias bibliográficas

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Aceptado para su publicación el 13 de octubre de 2008