SciELO - Scientific Electronic Library Online

 
vol.43 número4Modificaciones de las lipoproteínas de baja densidad en pacientes diabéticosEstudio de análogos de la sulfonanilida que actúan como supresores de la expresión de la aromatasa índice de autoresíndice de materiabúsqueda de artículos
Home Pagelista alfabética de revistas  

Servicios Personalizados

Articulo

Indicadores

  • No hay articulos citadosCitado por SciELO

Links relacionados

  • En proceso de indezaciónCitado por Google
  • No hay articulos similaresSimilares en SciELO
  • En proceso de indezaciónSimilares en Google

Bookmark


Acta bioquímica clínica latinoamericana

versión impresa ISSN 0325-2957

Acta bioquím. clín. latinoam. v.43 n.4 La Plata oct./dic. 2009

 

MICROBIOLOGÍA - COMUNICACIÓN BREVE

Nuevo patrón genético de Escherichia coli O157:H7 biotipo "B" en Argentina

New genetic pattern of Escherichia coli O157:H7 biotype "B" in Argentina

Claudio Marcelo Zotta1*, Carolina Carbonari2**, Diana Gómez3*, Natalia Deza2**, Silvina Lavayén4*, Elizabeth Miliwebsky2**, Victoria Monzani5***, Eduardo Manfredi2**, Laura Morvay5***, Marta Rivas2**

1. Técnico Químico. Servicio Bacteriología, INE "Dr. Juan H. Jara" - ANLIS "Dr. Carlos G. Malbrán"
2. Bioquímico. Servicio Fisiopatogenia, INEI-ANLIS "Dr. Carlos G. Malbrán"
3. Médica Veterinaria, Bacterióloga Clínica e Industrial. Servicio Bacteriología, INE "Dr. Juan H. Jara" - ANLIS "Dr. Carlos G. Malbrán"
4. Licenciada en Química. Servicio Bacteriología, INE "Dr. Juan H. Jara" - ANLIS "Dr. Carlos G. Malbrán"
5. Bioquímica. Hospital Interzonal Materno Infantil "Sr. Victorio Tetamanti"

* Instituto Nacional de Epidemiología "Dr. Juan H. Jara" (INE). Departamento de Diagnóstico y Referencia. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud "Dr. Carlos G. Malbrán" (ANLIS), Ituzaingó 3520, 7600 Mar del Plata, Argentina.
** Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas (INEI). Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud "Dr. Carlos G. Malbrán" (ANLIS), Av. Vélez Sarsfield 563, 1281 Buenos Aires, Argentina.
*** Hospital Interzonal Especializado Materno Infantil "Sr. Victorio Tetamanti", Castelli 2450, 7600 Mar del Plata, Argentina.

Resumen

Argentina tiene el índice más alto de casos de síndrome urémico hemolítico (SUH) en el mundo. Brotes y casos esporádicos de SUH se han asociado a Escherichía coli O157:H7 productor de toxina Shiga (STEC). El objetivo del estudio fue comparar la diversidad genética y la relación clonal de Escherichía coli O157:H7 biotipo B. Cuatro cepas biotipo B fueron aisladas de dos pacientes con SUH y de dos contactos asintomáticos convivientes, en la ciudad de Mar del Plata. Se realizó PCR para detectar los genes stxh stx2, rfbO157, eae, ehxA y fl/Ch7yelectroforesis en gel en campos pulsados (Xbal-PFGE) para establecer la diversidad genética y la relación clonal. Todas las cepas presentaron los genes stx2, stx2c(vh-a), eae, ehxAy fliCh7, y pertenecieron al fagotipo 2. Por XbaI-PFGE fueron identificados tres patrones que demostraron alta relación clonal y fueron considerados relacionados al mismo acontecimiento, sin nexo epidemiológico establecido entre los casos de SUH. Estos patrones de Xbal-PFGE eran nuevos, porque no estaban incluidos en la base de datos de Ecoli O157 en Argentina. Usando herramientas estandarizadas de detección y tipificación para el diagnóstico, los laboratorios de referencia podrán detectar la aparición de nuevos clones asociados con enfermedades humanas.

Palabras clave: Escherichía coli O157:H7 biotipo B; Diversidad genética; Relación clonal; Electroforesis en gel en campos pulsados

Summary

Argentina has the highest rate oteases of hemolytic uremic syndrome (HUS) in the world. Outbreaks and sporadic cases of HUS have been associated with 0157:H7 Shiga toxin-producer Escherichia coli (STEC). The aim ofthisstudy was to compare the genetic diversity and clonal relatedness of Escherichia coli 0157-.H7 biotype B. Four biotype B strains were isolated from two patients with HUS and two asymptomatic household contaets in the city of Mar del Plata. PCR was performed to detect stx1, stx2, rfbO157, eae, ehxA and fliCh7 genes, and pulsed-field gel electrophoresis (Xbal-PFGE) to establish the genetic diversity and the clonai relatedness. All strains harbored the stx2 stx2c(vh-a), eae, ehxA and fliCh7 genes and belongea to phage type 2. By means of Xbal-PFG , , three patterns were identified, showing high clonai relatedness and related to the same event, but there was no established epidemiológica! link between cases of HUS. These patterns of Xbal-PFGE were new, because they were not included in the datábase of E.coli 0157 in Argentina. Using tools of detection and classification for diagnosis, reference laboratories will be able to detect the emergence of new clones associated with human diseases.

Key words: Escherichia coli 0157-.H7 biotype B; Genetic diversity; Clonal relatedness; Pulsed-field gel electrophoresis

Introducción

Escherichia coli O157:H7 productor de toxina Shiga (STEC) es el serotipo más frecuentemente identificado como causante de enfermedad humana (1) y es reconocido como patógeno emergente transmitido por alimentos, asociado a casos esporádicos y brotes de diarrea con o sin sangre, colitis hemorrágica y síndrome urémico hemolítico (SUH).
El objetivo del presente trabajo fue comparar la diversidad genética y establecer la relación clonal de cepas de Escherichia coli O157:H7 del biotipo B (fermentador de dulcitol y rafinosa, no fermentador de ramnosa), aisladas de pacientes con SUH y contactos asintomáticos en la ciudad de Mar del Plata.

Materiales y Métodos

Durante febrero y marzo de 2007 se aislaron 4 cepas de E. coli O157:H7 biotipo B del total de la vigilancia de laboratorio, provenientes de dos pacientes con SUH y de dos contactos asintomáticos.
Caso de SUH#1: niña de 3 años y 8 meses de edad que comenzó el día 8 de febrero de 2007 con diarrea acuosa evolucionando a diarrea sanguinolenta, fiebre y disminución de la diuresis. Al momento de la internación estos síntomas persistían presentando, además, anemia hemolítica, insuficiencia renal y plaquetopenia. Durante los 12 días que duró la internación se le realizó diálisis peritoneal y tranfusión sanguínea, evolucionando favorablemente hasta alcanzar el alta médica. Residía junto a su familia en Mar del Plata.
Caso SUH#2: niña de 2 años y 9 meses de edad que presentó el día 26 de febrero de 2007 un comienzo brusco de diarrea sanguinolenta, dolor abdominal y oliguria, persistiendo estos síntomas al momento de la internación y presentando también equimosis y petequias, compromiso microangiopático del sistema nervioso central y convulsiones. Durante los días de internación se le realizó a la paciente una diálisis peritoneal. El día 1 de marzo de 2007 falleció por paro cardio-respiratorio.
Contactos asintomáticos convivientes del caso SUH#2: CA#2-A hermano de 5 años y CA#2-B abuela de 55 años. Esta familia era oriunda de la ciudad de Mar de Ajó, Provincia de Buenos Aires.
Se realizó el estudio de persistencia de excreción de este microorganismo entre los afectados.
Las cepas fueron caracterizadas por PCR para amplificar los genes stx1, stx2, rpO157, eae, ehxA fliCh7 (2-4) y subtipificadas por fagotipificación (5) y por la técnica de macrorrestricción con la enzima XbaI y separación por electroforesis de campos pulsados (AM-PFGE), según el protocolo estandarizado por el Center for Diseases Control, Atlanta, GA, EE.UU., con algunas modificaciones (6).

Resultados

Las 4 cepas de E. coli O157 biotipo B aisladas portadoras de los genes stx2, stx2c(vh_a) eae, ehxA y fliCh7, fueron sensibles a todos los antimicrobianos ensayados y pertenecían al fagotipo 2.
Por subtipificación se obtuvieron 3 patrones XbaI-PFGE bien definidos: AREXHX01.0447 (CA#2-B), AREXHX01.0448 (SUH#2), AREXHX01.0449 (SUH#1, CA#2-A). Los patrones AREXHX01.0447 y AREXHX01. 0448 presentaron 95,2% de similitud según criterio de Tenover, et al. (7), y los patrones AREXHX01.0448 y AREXHX01.0449 presentaron 97,6% de homología con sólo una banda de diferencia (Fig. 1).


Figura 1. Relación clonal de cepas biotipo B por XbaI-PFGE

El estudio de persistencia de excreción sólo demostró excreción prolongada en el CA#2-B, con 20 días de duración a partir del primer coprocultivo.

Discusión y Conclusiones

Los patrones de XbaI-PFGE detectados son nuevos, pues no existían previamente en la Base de Datos de E. coli O157 de Argentina. Estos patrones presentaron una alta relación clonal por lo que se los considera relacionados al mismo evento.
El CA#2-B excretó el microorganismo durante 20 días. Si bien está dentro del rango de excreción que des
criben diversos trabajos (8), estas cepas mantuvieron su potencial infectante-patogénico sin observarse modificaciones en el patrón de macrorrestricción obtenido por XM-PFGE.
Fenotípicamente es importante el hallazgo de cepas de E. coli O157:H7 del biotipo B, porque las cepas circulantes en Argentina corresponden mayoritariamente al biotipo C (fermentador de dulcitol, rafinosa y ramnosa), y hasta el momento en Mar del Plata no se había detectado la circulación de biotipo B.
Las evidencias halladas entre los distintos casos y contactos asintomáticos fueron insuficientes para relacionarlos epidemiológicamente. Sin embargo, el estudio molecular de las cepas indicaría la probabilidad de la existencia de un nexo vinculante, ya que las cepas presentaron una alta homología clonal entre afectados de diferentes localidades y en un lapso de tiempo aproximado de un mes, haciendo presumir la posibilidad de ocurrencia de un brote difuso.
Es fundamental la aplicación de técnicas de epidemiología molecular en tiempo real para mejorar la vigilancia de E. coli O157, reforzando los resultados de laboratorio con los epidemiológicos para la implementación de medidas de prevención y control adecuadas.

CORRESPONDENCIA
CLAUDIO MARCELO ZOTTA
E-mail:
marcelozotta@hotmail.com

Referencias bibliográficas

1. Mead PS, Griffin PM. Eschehchia coli 0157:H7. Lancet 1998; 352: 1207-12.        [ Links ]

2. Pollard DR, Johnson WM, Lior H, Tyler SD, Pozze KR. Rapid and specific detection of verotoxin genes in Escherichia coli by the polymerase chain reaction. J Clin Microbiol 1990; 28:540-5.        [ Links ]

3. Gannon VP, Rashed M, Kin RK, Thomas EJ. Detection and characterization of the eae gene of Shiga like toxin-producing Esherichia coli using polymerase chain reaction. J Clin Microbiol 1993; 31: 1268-74.        [ Links ]

4. Schmidt H, Beutin L, Karch H. Molecular analysis of the plasmidencoded hemolysin of Escherichia coli 0157:H7 strain EDL933. Infect Immunol 1995; 63: 1055-61.        [ Links ]

5. Khakhria R, Duch D, Lior H. Extended phage-typyng scheme for Eschericha coli 0157:H7. Epidemiol Infect 1990; 105:511-20.        [ Links ]

6. Foodborne and Diarrheal Diseases Branch, División of Bacterial and Mycotic Diseases, National Centerfor Infectious Diseases, Centers for Disease Control and Prevention, Standarized Molecular Subtyping of Foodborne Bacterial Pathogens by Pulsed-Field Gel Electrophoresis. A Training manual, Atlanta, GA, U.S.A.; 1998.        [ Links ]

7. Tenover FC, Arbeit RD, Goering RV. Interpreting chromo-somal DNA restriction patterns produced by pulsed-field gel electrophoresis: criteria for bacterial strain typing. J Clin Microbiol 1995; 33: 2233-9.        [ Links ]

8. Gómez D, Miliwebsky E, Silva A, Deza N, Zotta CM, Cotella O, et al. Aislamiento de Escherichia coli productor de toxina Shiga durante un brote de gastroenteritis en un Jardín Maternal de la ciudad de Mar del Plata. Rev Argent Microbiol 2005; 37: 176-83.        [ Links ]

Aceptado para su publicación el 7 de agosto de 2009