SciELO - Scientific Electronic Library Online

 
vol.46 issue1Erythrocyte aggregation quantification technique using digital image analysisNasal carriage of Staphylococcus aureus in community individuals: epidemiological factors author indexsubject indexarticles search
Home Pagealphabetic serial listing  

Services on Demand

Article

Indicators

  • Have no cited articlesCited by SciELO

Related links

  • On index processCited by Google
  • Have no similar articlesSimilars in SciELO
  • On index processSimilars in Google

Bookmark


Acta bioquímica clínica latinoamericana

Print version ISSN 0325-2957

Acta bioquím. clín. latinoam. vol.46 no.1 La Plata Jan./Mar. 2012

 

BIOQUÍMICA CLÍNICA-COMUNICACIÓN BREVE

Variabilidad biológica de aldolasa sérica: su utilidad en la interpretación de los resultados

Biological variation of serum aldolase: its use for interpretation of the results

Variabilidade biológica de aldolase sérica: sua utilidade na interpretagáo dos resultados

 

Beatriz Caracciolo1a, Sandra Muzietti2a, Marcela Pandolfo2a, Gustavo Negri3a, Daniel Mazziotta2b, Daniel Bustos4a

1 Bioquímica especialista en Bacteriología Clínica
2 Bioquímico
3 Dr. en Bioquímica Clínica
4 Dr. de la Universidad de Buenos Aires

a Instituto de Fisiología y Bioquímica Clínica-INFIBIOC y Departamento de Bioquímica Clínica, Hospital de Clínicas "José de San Martín". Universidad de Buenos Aires
b Fundación Bioquímica Argentina

 


Resumen

El objetivo de este trabajo fue determinar la variabilidad biológica (VB) de Aldolasa (ALD) en individuos sanos, el índice de individualidad (II) del analito y evaluar la utilidad del intervalo de referencia poblacional (IRP) considerando al IRP de los analitos útil cuando el II es > 1,4 y de poca utilidad si es <0,6. También se evaluó el valor de referencia para el cambio (VRC) en la interpretación de dos determinaciones seriadas del mismo individuo, especialmente en el seguimiento de enfermedades músculo-esqueléticas en las que los niveles de creatinquinasa (CK) permanecen dentro del intervalo de referencia, mientras que los de ALD están elevados. Se obtuvieron 8 muestras de sangre de 10 individuos aparentemente sanos en días diferentes según protocolo preestablecido. Se determinó la actividad de ALD por método enzimático UV y se calcularon los parámetros de VB, II y VRC. Se obtuvo una VB intraindividual: 31%; VB interindividual: 21%, II 1.47 y VRC 90%. De acuerdo a los coeficientes de VB y el II obtenidos, los IRP son útiles para la interpretación de los resultados de ALD. Un resultado seriado será estadísticamente diferente del dato previo cuando el mismo tenga una diferencia mayor al 90% en relación al valor previo. El VRC entre dos determinaciones seriadas debe ser calculado en cada laboratorio con su propia variabilidad analítica para una correcta interpretación de los resultados.

Palabras clave: Aldolasa; Variabilidad biológica; Valores de referencia poblacionales; Índice de individualidad; Valor de referencia para el cambio; Miopatías

Summary

The aim of this study was to determine the Biological Variation (BV) of Aldolase (ALD) in healthy patients, the individuality index (II) of the analyte and to assess how useful the population reference interval (PRI) is for the interpretation of the results, considering PRI useful when the II is >1.40 and useless when it is <0.6. Reference change values (RCV) were also assessed in the interpretation of two serial measurements of the same individual, specially in the monitoring of patients in which the serum level of Creatine Kinase (CK) remain within the reference range while ALD values are increased. Eight bloodsam-ples were obtained from ten apparently healthy subjects in different days according to a predetermined protocol. ALD activity was measured by an enzymatic UV method and BV, II and RCV were calculated. Intraindividual BV was 31 %, interindividual BV 21 %, II 1.47 and RCV 90%. Based on the results obtained for BV and II, PRIs are useful for the interpretation of ADL results. A serial result will be statistically different from the previous one when the variability between both results is higher than 90%. RCV must be determined in each laboratory using their own analytical variability in order to obtain a correct interpretation of the results.

Key words: Aldolase; Biological variation; Population reference intervals; Individuality index; Reference change value; Myopathies

Resumo

O objetivo deste trabalho foi determinar a variabilidade biológica (VB) de Aldolase (ALD) em individuos saudáveis, o índice de individualidade (II) do analito e avaliar a utilidade do intervalo de referencia populacional (IRP) considerando o IRP dos analitos útil quando o II é > 1,4 e de pouca utilidade se é <0,6. Também foi avaliado o valor de referencia da variagáo (VRV) na interpretagáo de duas determinagóes seriadas do mesmo individuo, especialmente no seguimento de doengas músculo-esqueléticas nas quais os níveis de creatinoquinase (CK) permanecem dentro do intervalo de referencia, enquanto que os de ALD estáo elevados. Foram obtidas 8 amostras de sangue de 10 individuos aparentemente saudáveis em dias diferentes conforme protocolo preestabelecido. Determinou-se a atividade de ALD por método enzimático UV e se calcularam os parámetros de VB, II e VRC. Foi obtida uma VB intra-individual: 31 %; VB interindividual: 21 %, II 1.47 e VRV 90%. De acordo com os coeficientes de VB e o II obtidos, os IRP sáo úteis para a interpretagáo dos resultados de ALD. Um resultado seriado será estatisticamente diferente do dado prévio quando o mesmo tenha uma diferenga maior a 90% em relagáo ao valor prévio. O VRV entre duas determinagóes seriadas deve ser calculado em cada laboratório com sua própria variabilidade analítica para uma correta interpretagáo dos resultados.

Palavras chave: Aldolase; Variabilidade biológica; Valores de referencia populacionais; Índice de individualidade; Valor de referencia da variagáo; Miopatias


 

Introducción

La Aldonasa (ALD) (E.C. 4.1.2.13; D-fructosa-1.6-bidifosfato D-Gliceraldehido-3-fosfatoliasa) es una enzima que cataliza la ruptura de fructosa 1-6 difosfato en fosfato de dihidroxiacetona y gliceraldehído3-fosfato, CAICYTción clave en el metabolismo de la glucosa. Tiene un peso molecular de 160 kDa y tiene tres isoenzimas denominadas ALD A, B y C. Esta enzima se encuentra ampliamente distribuida en los distintos tejidos, pero especialmente en hígado, músculo esquelético y cerebro. Los niveles séricos se encuentran elevados en enfermedades musculares, tales como distrofia muscular progresiva y polimiositis, y están disminuídos en enfermedades miodegenerativas crónicas con baja masa muscular. Esta enzima se libera durante el infarto agudo de miocardio, alcanza un valor máximo entre las 24-48 h y vuelve a los valores dentro del intervalo de referencia en el transcurso de cinco días. En la enfermedad muscular y en presencia de tumores malignos se encuentra aumentada la isoenzima A. La actividad de ALD, especialmente la isoenzima B, se eleva en suero en hepatitis aguda, cirrosis, hepatitis crónica e ictericias obstructivas. Los eritrocitos son ricos en ALD y la enzima se libera en anemias hemolíticas (1).

La mayor utilidad clínica de la aldolasa es en el diagnóstico y seguimiento de enfermedades músculo-esqueléticas, pero también en este caso se encuentra elevada otra enzima más específica, la CK. La determinación de la actividad de ALD se utiliza en aquellos casos de polimiositis o dermatomiositis en que los niveles de CK permanecen dentro del intervalo de referencia poblacional (5-10% de los casos), mientras que los de ALD se encuentran elevados (2)(3).

Los datos de VB de ALD han sido publicados recientemente (4), sin embargo no se ha evaluado la utilidad de los IRP en la interpretación de los resultados de esta enzima.

La VB es la fluctuación fisiológica de los constituyentes de los fluidos orgánicos alrededor de su punto homeostático. Tiene dos componentes: la variación intra e interindividual, que en términos matemáticos se expresan como coeficientes de variación: CVi y CVg, respectivamente.

El método para estimar los componentes de la VB ha sido descripto exhaustivamente por Fraser y Harris (5) y Fraser (6) y se basa en el análisis de muestras seriadas procedentes de varios individuos, obtenidas según un protocolo establecido.

Los componentes de la VB se han utilizado, entre otros fines, para varios propósitos, por ejemplo, evaluar la utilidad del IRP (7) y para valorar el significado del VRC (8-10) y de este modo controlar la evolución clínica del paciente con el fin de discriminar si la diferencia entre los resultados obtenidos en dos análisis consecutivos realizados en un tiempo determinado se debe a cambios en el estado de salud del paciente o a la variabilidad analítica y/o biológica.

Los objetivos de este trabajo fueron determinar la VB de ALD sérica en individuos sanos y evaluar la utilidad de los valores de referencia poblacionales en la interpretación de dos determinaciones sucesivas del mismo individuo.

Materiales y Métodos

Para determinar la VB de ALD se tomaron muestras de sangre de 10 individuos aparentemente sanos, provenientes de un grupo de médicos y del personal del laboratorio (7 mujeres y 3 hombres, rango de edad entre 27 y 48 años, media 37,5) una vez por semana durante 8 semanas. De acuerdo a la declaración de Helsinki II, el diseño y realización del estudio fue explicado a los voluntarios y se obtuvo el consentimiento escrito de los mismos. Ninguna de las personas participantes informaron historia de enfermedad muscular ni hepática, no tuvieron diferencias en sus hábitos dietarios ni de ejercicio y no tomaron ninguna medicación durante la duración del estudio.

Las muestras de sangre se recolectaron en tubos de polimetilmetaacrilato (PMMA) con gránulos que permiten acelerar el proceso de coagulación luego de un ayuno de 8 h. el mismo día de la semana, entre las 11 y 12 h. Una vez centrifugadas, el suero fue congelado a -20 °C hasta el momento de su análisis y todas las muestras fueron procesadas por duplicado en la misma serie.

La actividad de ALD fue determinada por el método enzimático UV basado en la oxidación de NADH a NAD (11) en un autoanalizador Hitachi 917 (Roche Diagnostic, Indianapolis, EE.UU.) a 37 °C. Se utilizaron calibradores y sueros controles de niveles normales y patológicos. Todos los CAICYTtivos fueron provistos por Randox y la imprecisión día a día fue estimada durante 20 días usando los sueros controles mencionados anteriormente.

Para el análisis estadístico se utilizó el test ANOVA anidado, de acuerdo al modelo de Fraser y Harris (5). Se valoraron los posibles datos extremos aplicando el test de Cochran y no se rechazó ningún dato. La variabilidad analítica se calculó a partir de los resultados del análisis por duplicado de las 80 muestras y a partir de las varianzas intraindividual e interindividual se calcularon los correspondientes coeficientes de variación (CV). El II y el VRC se calcularon según las siguientes fórmulas:

II = CVi / CVg

VRC = 2 ½ * Z*(CVa² + CVi²)½

Z= 1,96 para una probabilidad de cambio del 90% (p<0,05)

Resultados

La Figura 1 muestra los valores medios y rangos absolutos de ALD sérica en 8 muestras de 10 individuos


Figura 1. Valores medios y rangos absolutos de ALD sérica aparentemente sanos. Se puede observar que algunos sujetos como el número 1 tiene una gran variabilidad y otros como el 6 ó el 9 varían mucho menos durante el período observado.

Los resultados de las varianzas y sus correspondientes CV de ALD se muestran en la Tabla I.

Tabla I. Resultados obtenidos

El CV analítico (CVa) obtenido en el control de calidad interno de las corridas analíticas diarias fue de 9,8% y se utilizó para realizar el cálculo del VRC.

Discusión y Conclusiones

El laboratorio clínico debe satisfacer las necesidades médicas (12), que incluyen el control, tamizaje, diagnóstico y la identificación del caso individual. Los datos de VB han sido utilizados para establecer los requerimientos de calidad analítica. Fraser ha sugerido (5) que la variabilidad analítica (VA) de las pruebas de laboratorio debe ser inferior a la VB del analito que se está midiendo, idealmente la VA debe ser la mitad de la VB intraindividual. Esta misma especificación se tiene que cumplir para el tamizaje, diagnóstico e identificación del caso individual cuando se utiliza un valor discriminante para definir una condición patológica o de salud (13). El CVa obtenido del control de calidad interno es aceptable ya que es inferior a la mitad del CVi, que se asume como objetivo analítico. Los datos de VB obtenidos en este trabajo son coincidentes con los obtenidos por Wu et al. (4) que han informado CVi para ALD del 27,2%.

Los IRP son la referencia más habitual para la interpretación, con fines diagnósticos, de la información producida por el laboratorio. Si bien los IRP son útiles para la interpretación de un resultado aislado, los mismos pueden no serlo cuando se quiere comparar un resultado con el dato previo del mismo paciente, ya que pudo haber un cambio significativo en el valor de la magnitud medida y el resultado obtenido puede estar aún dentro de los IRP.

El II introducido por Harris (14) se ha utilizado para valorar la utilidad de los IRP de los analitos, considerándose realmente útiles sí el II es > 1,4 y de poca utilidad <0.6. Cuando el II es bajo se recomienda la estratificación de los valores de referencia poblacionales por grupos o subgrupos de población más homogéneos según sexo o edad. El II obtenido en este trabajo es 1,47 y por lo tanto, los valores de referencia poblacionales son útiles para el diagnóstico.

Los datos de VB también han sido utilizados para establecer cuándo el resultado de un analito es significativamente diferente en relación al dato previo, independientemente si éste se encuentra dentro o fuera del IRP. Para establecer el porcentaje de diferencia significativo se ha descripto el VRC. De acuerdo al VRC obtenido para la ALD en este trabajo un resultado seriado de un paciente será significativamente diferente cuando es mayor del 90% con respecto al dato previo, aún cuando ambos resultados estén dentro del valor de referencia, con una probabilidad del 90%. Otros autores han informado un valor de VRC de 80,6% (4). Esta diferencia se debe a que utilizaron una metodología manual para determinar la actividad sérica de ALD, obteniendo un CVa de 14.5%. Para el cálculo del VRC utilizaron un Z=1,85 que corresponde a una probabilidad menor del 95%.

El VRC no es extrapolable a determinaciones de ALD realizadas en otros laboratorios con distinta variabilidad analítica.

Cuando se evalúan pacientes por polimiositis y dermatomiositis, existen entre un 5-10% de casos que cursan con niveles normales de CK, por lo tanto la determinación sérica de ALD puede ser de gran utilidad en el diagnóstico y seguimiento de estos pacientes (15).

Se concluye que, de acuerdo a los coeficientes de variabilidad biológica y al II obtenidos, los valores de referencia poblacionales son útiles para interpretar un resultado aislado de ALD. Debe tenerse en cuenta el VRC entre dos determinaciones seriadas, el cual debe ser calculado en cada laboratorio con su propia VA. Para el caso de este laboratorio un resultado seriado será estadísticamente diferente del resultado previo cuando la diferencia entre resultados sea mayor del 90%.

AGRADECIMIENTOS

Los fondos para la realización de este trabajo fueron otorgados por el subsidio B405, programación científica 2008-2010. Universidad de Buenos Aires.

Se agradece a María Apezteguía por la realización del estudio estadístico.

CORRESPONDENCIA

BIOQ. BEATRIZ CARACCIOLO

Udaondo 4524 esq. Del Gato Barrio Parque Leloir1713 - ITUZAINGÓ - Buenos Aires - Argentina E-mail: beatrizcaracciolo@yahoo.com.ar

Referencias bibliográficas

1. Taguchi K, Takagi Y. Aldolase. Rinsho Byori. 2001; Suppl 116: 117-24.         [ Links ]

2. Mercado U. Dermatomyositis with normal creatine kinase and elevated aldolase levels. J Rheumatol 2002; 29: 2242-3.         [ Links ]

3. Nozaki K, Pestronk A. High aldolase with normal creatine kinase in serum predicts a myopathy with perimysial pathology. J Neurol Neurosurg Psychiatry 2009; 80: 904-9.         [ Links ]

4. Wu Alan HB, Smith A, Wians F. Interpretation of creatine kinase and aldolase for statin-induced myopathy: Reliance on serial testing based on biological variation. Clin Chim Acta 2009; 399:109-11.         [ Links ]

5. Fraser CG, Harris EK. Generation and application of data on biological variation in clinical chemistry. Crit Rev Clin Lab Sci 1989; 27: 409-37.         [ Links ]

6. Fraser CG. Biological variation: from principles to practice. Washington Dc: AACC Press; 2001.

7. Fraser CG. Are"scientific statements" the scientific truth? Disponible en: htpp://www.westgard.com/guest23/htm. [Fecha de Acceso: 5 de noviembre de 2006].

8. Ricós C, Cavas F, Garcia-LarioJV, Hernandez A, Iglesias N, Jiménez CV et al.The reference change value: a proposal to interpret laboratory reports in serial testing base on biological variation. Scand J Clin Lab Invest 2004; 64: 175-84.         [ Links ]

9. Iglesias N, Hyltoff Petersen P, Jensen E, Ricos C, Joergensen P. Reference change values and power functions. Clin Chem Lab Med 2004; 42: 415-22.         [ Links ]

10. Biosca C, Ricos C, Lauzurica R, Galimany R. Reference change values concept combining two delta values to predict crises in renal posttransplantation. Clin Chem 2001; 47: 2146-8.

11. Pinto PVC, Van Dreal PA, Kaplan A. Aldolase:II-Spectro-photometric determination using an ultraviolet procedure. Clin Chem 1969; 15: 349.

12. Kenny D, Fraser GC, Hyltoff Petersen P, Kalinov A. Estrategies to set global analytical quality specifications in laboratory medicine. Consensus agreement. Scand J Clin Lab Invest 1999; 59: 585.         [ Links ]

13. Gowans EMS, Hyltoff Petersen P, Blaabjerg O et al. Analytical goals for acceptance of commmon reference intervals for laboratories throughout a geographical area. Scand J Clin Lab Invest 1988; 48: 757-64.

14. Harris EK. Effects of intra and interindividual variation on the appropiate use of normal range. Clin Chem 1974; 20: 1535-42.

15. Carter JD, Kanit KS, Vasey FB, Valeriano-Marcet J. Dermatomyositis with normal creatine kinase and elevaded aldolase levels. J Rheumatol 2001; 28: 2366-7.

Aceptado para su publicación el 27 de septiembre de 2011