RECONOCIMIENTO A LA TRAYECTORIA DEL PROF. EMÉRITO DR. RODOLFO R. BRENNER

Parece que fue ayer...
Albores de las investigaciones de lípidos en la Argentina

Dr. Rodolfo Roberto Brenner

Traducción del material publicado por la revista Inform Vol. 9/ Nº 7 (1998) de la AOCS

 "En 1944 cuando yo estudiaba química en la Facultad de Ciencias Exactas, Físicas y Naturales de la Universidad de Buenos Aires, asistí a las conferencias del Dr. Pedro Cattáneo de la Cátedra de Bromatología y Análisis Industrial. Me entusiasmé en una de las clases cuando el Dr. Cattáneo describió sus investigaciones sobre la composición de ácidos grasos de aceites de semillas vegetales, demostrando que se podían usar ecuaciones matemáticas para determinar dicha composición a partir de los índices de saponificación (IS) e índice de yodo (IY) de las fracciones obtenidas por destilación al vacío de los metilésteres de ácidos grasos.
Quedé tan impresionado que dos años después, cuando decidí hacer mi trabajo doctoral, le pedí que me dirigiera. De esta manera, me involucré en la investigación de los lípidos, tarea que nunca abandoné.
El tema de mi tesis fue "Composición química de los aceites de oliva argentinos". La composición de ácidos grasos del aceite de oliva era bastante simple y se podían separar, aproximadamente, todos los ácidos grasos -mediante la técnica de Twitchell- en ácidos grasos saturados e insaturados en base a la solubilidad de sus jabones de plomo en etanol. Luego, los metilésteres de estos grupos de ácidos grasos se volvían a separar en fracciones diferentes por destilación al vacío adiabático en una columna de Longenecker de 12 platos teóricos y se calculaba la composición en base a ecuaciones matemáticas considerando el IS e IY de las mismas. Fue un trabajo tedioso porque no contábamos con computadoras como en la actualidad. Este método había sido descripto por el Profesor T.P. Hilditch de Liverpool, pionero en los estudios sobre la constitución química de las grasas naturales, y a quien visité años después. El estudio se había desarrollado hábilmente usando dispositivos de la época, pero exigía el uso de cientos de gramos de cada muestra y casi un mes para obtener los resultados; no obstante podía determinar las cantidades de, tan solo, los ácidos grasos principales.
Si el análisis era complicado cuando se lo aplicaba al aceite de oleaginosas, se tornó más complicado aún cuando decidí estudiar la composición de los ácidos grasos de peces de agua dulce del Río de la Plata.
La importancia de determinar la presencia de ácidos grasos poliinsaturados de 20 y 22 carbonos en estos lípidos de pescados presentaban un desafío, ya que en general no eran muy conocidos. Yo había leído los interesantes trabajos de algunos investigadores japoneses -Tsujimoto y Toyama y Tsuchiga (1935)- sobre los ácidos grasos en sardinas. Tsujimoto en 1906, había estudiado y publicado la existencia de ácidos grasos de cinco y seis dobles enlaces en estos aceites. Los denominó ácidos "clupanodónicos" (derivado de Clupea), pez donde posteriormente se reconoció que tenían 20 carbonos. Uno de ellos era el ahora conocido ácido graso docosahexaenoico (22:6n-3), tan importante en la nutrición humana.
La presencia de ácidos grasos altamente poliinsaturados en los lípidos de peces de agua dulce me remitió a Tsujimoto, quien en 1920 había descripto un método para separar ácidos grasos poliinsaturados de los monoinsaturados, usando la solubilidad de jabones de litio en acetona.
Recogí varios especímenes de la especie Prochilodus lineatus (sábalo) y separé diferentes lípidos de depósito. Después de la liberación de los ácidos grasos y su conversión en jabones de litio, se resolvió la fracción soluble en acetona. La fracción insoluble se convirtió en jabones de plomo, que se separaron en base a su solubilidad en etanol. Todas las fracciones, una vez metiladas, se separaron por destilación fraccionaria al vacío y se determinaron los valores IS e IY.
Cuando hicimos las pruebas de la aplicación de las ecuaciones matemáticas, descubrimos que funcionaban en los ácidos grasos saturados y monoenoicos, pero no en los ácidos grasos poliinsaturados. Resolvimos este problema aplicando un factor de corrección: calculamos la cantidad total de ácidos grasos insaturados de cada longitud de cadena, teniendo en cuenta su insaturación promedio en lugar de la cantidad de ácido graso insaturado individual. Es decir, por ejemplo, encontramos un grupo de ácidos grasos insaturados de 22 carbonos que tenían una insaturación promedio de -9,7H. Esto significaba que contábamos con una combinación de ácidos grasos insaturados de menos de 5 enlaces dobles y más de 5. El método no era capaz de brindar otra información que ésa y, entonces, decidimos usar el nuevo método espectrofotométrico desarrollado por Kraybill, Mitchell y Zscheild (1943) y publicado en los Métodos Oficiales y Tentativos de la Sociedad Estadounidense de Químicos Aceiteros (AOCS). Dicha técnica consistía, principalmente, en la isomerización de los enlaces dobles no conjugados, calentando a 180 °C en una solución de KOH en glicol, bajo atmósfera de N2. Luego, se medía a diferentes longitudes de onda la absorción ultravioleta (UV) de estos ácidos disueltos en etanol, cada una característica para un número diferente de enlaces dobles.
De esta manera, pudimos confirmar la existencia del ácido graso docosahexaenoico y otros ácidos grasos poliinsaturados en las grasas de depósito de peces de agua dulce, no sólo en el P. lineatus sino también, en otros peces comestibles. Debo agregar que la identificación de algunos ácidos grasos insaturados fue realizada por bromación, cristalización y estimación de bromo. Todos estos trabajos fueron realizados mientras yo era profesor asistente del Departamento de Bromatología y Análisis Industrial , bajo la dirección del Dr. Cattáneo, en la Universidad de Buenos Aires y con la colaboración de algunos estudiantes que se encontraban realizando sus tesis doctorales conmigo. La investigación fue publicada en Anales de la Asociación Química Argentina, una publicación científica local. Algunos años después, en 1949, me incorporé a la AOCS y recibía información compilada en el Journal of the American Oil Chemists' Society.
En aquellos años, alrededor de 1953, la situación política de la Argentina se había tornado caótica y estaba afectando a la universidad. Nos encontrábamos en la dictadura seudodemocrática de Juan Perón y para ser empleado del Estado era necesario afiliarse a su partido político. Por consiguiente fui despedido de la Facultad, como también le había sucedido al Dr. Bernardo Housssay, Premio Nobel de Argentina en Fisiología. Pero, no hay mal que por bien no venga: obtuve una beca del British Council y me trasladé a Escocia para trabajar con el Dr. John Lovern en la Torry Research Station en Aberdeen. Este científico era especialista en lípidos de peces y pertenecía a la escuela de Hilditch. Por lo tanto, aprendí mucho, en especial las técnicas de cromatografía líquida y sobre papel. Cuando regresé a la Argentina, Perón había sido destituído y volví a ocupar mi cargo en la Universidad de Buenos Aires. Sin embargo, sólo permanecí en ese lugar muy poco tiempo, ya que en 1956 fui nombrado profesor de Bioquímica con dedicación exclusiva en la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de La Plata. Usé mi experiencia para aplicar las nuevas técnicas de cromatografía en sílica gel, cromatografía de alúmina según Brockman, destilación al vacío microamplificada y cromatografía de partición en fase invertida, para fraccionar y estudiar hidrocarburos, ácidos grasos, alcoholes alifáticos y dioles de la cera vegetal de Bulnesia retama, de la Argentina.
En 1957 contraje matrimonio con Marta Grosso y durante nuestra luna de miel viajamos a Europa, donde visité el National Institute of Medical Research, en Londres. Allí, estuve con el Dr. A. T. James. En 1952, durante el Congreso de Química Analítica en Oxford, Martin y James, habían presentado un trabajo sobre el desarrollo y aplicación de cromatografía gas-líquido (CGL) en la microestimación y resolución de mezclas de ácidos grasos. Era una técnica extraordinaria, como ahora todos saben, porque trabaja con micro muestras, produciendo una eficiente separación de los componentes debido a su capacidad de alta resolución y permitiendo la identificación y cuantificación de estos componentes. Todos estos puntos fueron desarrollados en años siguientes y recuerdo -en especial- el trabajo de James en Inglaterra y el descubrimiento de nuevos soportes sólidos y fases estacionarias, elaborado por el grupo de Nicholas Pelick en Supelco Inc., y con el aporte de nuestras humildes contribuciones.
Durante mi visita a A. T. James en 1957, me mostró y explicó todas las ventajas de su nueva técnica de CGL para separar metilésteres de ácidos grasos. Generosamente, también me ofreció sus propios diseños originales que me permitirían construir un aparato para CGL en Argentina. Me sentí muy agradecido por esta información y ya había comenzado los trabajos de fabricación de este aparato, cuando la empresa Pye Company de Inglaterra fabricó y, por primera vez, puso en el mercado un aparato para CGL basado en el diseño de James, que contaba con argón como gas carrier y un detector de estroncio 90. Tuvimos mucha suerte al conseguir una subvención del Consejo Nacional de Investigaciones de Argentina, con la cual compramos el primer aparato CGL Pye para utilizar en nuestro país. El estroncio 90 era un buen detector cuantitativo que registraba el aumento en la corriente causado por la colisión entre moléculas de argón excitado y cualquier vapor orgánico que salía de la columna cromatográfica. En algunos aspectos, este detector era aún mejor que el detector de ionización de llama, porque no quemaba la muestra y por lo tanto se podía recoger y analizar.
En esa época, mi cátedra de Bioquímica formaba parte del Instituto de Fisiología de la Universidad Nacional de La Plata. Por lo tanto, mi grupo se encontraba en contacto permanente con fisiólogos, hecho que nos llevó a interesarnos en la relación entre la química de los lípidos y los problemas médicos. De esa manera, comenzamos a usar nuestra experiencia y pericia para estudiar cambios en la composición de los lípidos en tejidos de ratas que habían sido sometidas a diversas dietas. La CGL era la técnica más apropiada para el análisis de los ácidos grasos en microescala. Inmediatamente nos lanzamos de lleno al estudio del metabolismo de los ácidos grasos esenciales (AGE). Uno de nuestros intereses se centró en el efecto de la deficiencia de los ácidos linoleico y araquidónico sobre la concentración del ácido eicosa 5,8,ll-trienoico en tejidos animales. Este ácido había sido descubierto por mi querido amigo, el fallecido James Mead, quien demostró que se producía a partir del ácido oleico en ratas con deficiencia de ácidos grasos esenciales. Nosotros deseábamos saber si el ácido de Mead reemplazaba el ácido araquidónico en la posición beta de los fosfolípidos. Entonces, criamos ratas con deficiencia de ácidos grasos esenciales y separamos la fosfatidilcolina (FC) y la fosfatidiletanolamina (FE) de los tejidos, usando la técnica recién desarrollada de cromatografía en capa delgada (TLC). Decidimos usar fosfolipasa A2 (del veneno de serpiente) para estudiar la distribución de los ácidos grasos en estas moléculas. Esta idea se nos ocurrió después de leer que N. H. Tattrie había demostrado rotundamente en 1959, luego de muchas controversias, que esta enzima hidrolizaba específicamente todo tipo de ácido graso enlazado en la posición beta de los fosfolípidos. Nosotros hidrolizamos los fosfolípidos y separamos los ácidos grasos liberados y los lisofosfolípidos por TLC. Los ácidos grasos recuperados, luego fueron convertidos en metilésteres y analizados por CGL. Nuestros resultados mostraron que el ácido graso eicosatrienoico reemplazaba el ácido ariquidónico en el carbono beta de la FC y FE de ratas con deficiencia de ácidos grasos esenciales. Estas tres técnicas nuevas -CGL, TLC e hidrólisis por la fosfolipasa A2- nos habían permitido solucionar un problema interesante. Además, habíamos desarrollado una herramienta nueva y simple usando fosfolipasa A2 para identificar la posición de los ácidos grasos en las moléculas de fosfolípidos.
En aquellos años (principios de la década de los sesenta), mis colaboradores (O. Mercuri, M. E. De Tomas y R. Peluffo) y yo, nos interesamos en la biosíntesis de ácidos grasos poliinsaturados animales. El ácido linoleico es "esencial" debido a la incapacidad de los seres humanos y las ratas de producir un enlace doble en el carbono seis (contando desde el extremo metilo del ácido). Nos preguntábamos si un ácido graso de cadena corta, tal como el ácido cis-2-octenoico que ya tenía este doble enlace, introducido en la alimentación animal, podría ser elongado y desaturado en el carbono 9 para dar ácido linoleico. Sintetizamos químicamente ácido cis-2 octenoico, pero al suministrarlo a ratas jóvenes vimos que no se convertía en ácido linoleico. Estábamos convencidos de nuestros resultados, pero surgieron debates cuando los presentamos en el VII Congreso Internacional de Bioquímica de Lípidos en Birmingham. En esa oportunidad, Raymond Reiser de Texas A&M University, nos interrumpió diciendo que había tenido la misma idea y había realizado experimentos similares que mostraban que el ácido cis-2 octenoico se podía convertir en acido linoleico en las gallinas ponedoras. Inmediatamente, surgieron debates amistosos y fructíferos que fueron resueltos por H. J. Thomasson de Vlaardingen, Holanda, quien propuso que la diferencia era resultado de las características de las diferentes especies. Resulta interesante observar que, años más tarde, se publicó un trabajo donde se demostraba que tanto las conclusiones de los dos rivales como la de Thomasson, eran correctas. El resultado positivo de esa reunión fue una larga amistad entre Raymond Reiser y este autor.
No deseo dejar de enfatizar que en nuestro laboratorio -y en otros de esa época- se usaba otra técnica, especialmente en el de Klenk (Alemania). Era la ozonólisis, que permitía la determinación de la posición de los enlaces dobles en los ácidos grasos insaturados. Para analizar la fracción obtenida por ozonólisis, aplicábamos CGL.
Durante 1963, mi laboratorio recibió dos importantes contribuciones: a) una importante subvención del National Institute of Health de Estados Unidos, la cual me permitió comprar una ultracentrífuga refrigerada Spinco. Con este aporte, pudimos separar fracciones subcelulares y estudiar in vitro la biosíntesis de los ácidos grasos; b) nuestro Consejo Nacional de Investigaciones compró un detector de radiactividad que se acoplaba al aparato de CGL, que nos permitía medir la radiactividad de los ácidos grasos cromatografiados. Con estos dos aparatos, inmediatamente comenzamos a estudiar la actividad de desaturación en posición delta 6 de los microsomas celulares sobre los ácidos alfa-linolénico, linoleico y oleico marcados con C14 en posición 1, y los efectos que éstos y otros ácidos grasos saturados e insaturados tenían sobre los sistemas desaturantes.
La desaturación microsomal en posición delta 6 del ácido linoleico para convertirse en ácido gamma linolénico había sido demostrada por D. H. Nugteren (1962) de Holanda y la desaturación en delta 6 del ácido oleico marcado para convertirse en ácido octadeca-6,9- dienoico por P. W. Holloway, R. O. Peluffo y S. J. Wakil (1963), en los Estados Unidos, mientras nosotros probábamos por primera vez la misma conversión enzimática del ácido alfa-linolénico en ácido octadeca-6,9,12,15-tetraenoico. La reacción requería ATP, CoA, NADH o NADPH, Mg2+ y oxígeno. Al mismo tiempo, confirmamos los resultados de Nugteren y los de Holloway y colaboraadores, y demostramos que los tres ácidos insaturados C18, competían entre sí por la enzima. El Km aproximado era más bajo para el ácido alfa-linolénico, era intermedio para el ácido linoleico y el más alto para el ácido oleico. Estos hallazgos explicaban de manera molecular los resultados obtenidos in vivo, los cuales evidenciaban que la administración de ácido alfa-linolénico o linoleico en la dieta de animales con deficientes en AGE eliminaba la conversión del ácido oleico a ácido eicosa-5,8,1l-trienoico.
En esta misma época, urgidos por las sugerencias de Klenk (Colonia, Alemania) y nuestros propios pensamientos, tuvimos el convencimiento de que los ácidos grasos insaturados se agrupaban en cuatro familias principales, desde un punto de vista biosintético. La desaturación y elongación con malonil-CoA de diversos precursores, producía la familia del ácido palmitoleico (o n-7), la familia del ácido oleico (o n-9), la familia del ácido linoleico (o n-6) y la familia del ácido alfa-linolénico (o n-3).
Una de las preguntas más evidentes que nos formulábamos tenía que ver con la retroinhibición de la delta 6 desaturasa por parte de ácidos grasos insaturados superiores ya fueran de la misma familia o de otra. Consideramos que éste era el paso inicial de la reacción e involucraba una enzima reguladora que controlaba la biosíntesis y, por lo tanto, la cantidad de miembros insaturados superiores formados. Estábamos en lo cierto y descubrimos que el ácido gama-linolénico, el ácido araquidónico, el ácido docosahexaenoico y otros ácidos muy altamente insaturados, eran inhibidores de la delta-6 desaturación del ácido linoleico. Los ácidos grasos saturados no se comportaban como inhibidores. Estos resultados se presentaron en el Simposio sobre Acidos Grasos Esenciales, durante la reunión de AOCS en 1966, en Los Angeles y fueron recibidos con mucho interés. La consecuencia fue, que recibí muchas invitaciones de varios institutos de Estados Unidos para dar conferencias e hice muchos amigos.
En 1965, en una pequeña y humilde habitación del Instituto del Dr. Leloir, los doctores L. F. Leloir, A. Stoppani, F. Cumar y yo, nos reunimos y decidimos crear la Sociedad Argentina de Investigaciones Bioquímicas. Esto fue alentado por el interés científico creciente en nuestro país por los problemas científicos bioquímicos. Hasta ese entonces, la investigación bioquímica se presentaba junto con la de fisiología en las reuniones de esa Sociedad. El Dr. F.. Leloir fue el primer presidente y yo el secretario. Desde este origen humilde, la Sociedad ha aumentado el número de miembros y actualmente cuenta con más de 500 participantes. La técnica enzimática, desarrollada para medir la desaturación oxidativa microsomal de los ácidos grasos insaturados, resultó ser muy útil para estudiar los efectos posibles de las hormonas en la reacción. Creíamos que éste podía ser un tema de investigación muy interesante. Inmediatamente, se probaron tres desaturasas, la delta 6 y delta 9 en 1965, y la delta 5, algunos años más tarde . Pensábamos, y más tarde lo probamos, que las tres desaturasas eran enzimas independientes. En primer lugar probamos la acción de la hormona insulina sobre las actividades desaturantes delta 6 y delta 9. Para estos estudios usamos ratas diabéticas por aloxano. Sabíamos que Gelhorn y Benjamin en 1964, ya habían demostrado que disminuía la desaturación del ácido esteárico en ácido oleico en las ratas diabéticas. Si esto sucedía en la delta-9 desaturasa, pensamos que probablemente el mismo efecto se repetiría en la delta-6 desaturasa que es importante en la formación de familias de ácidos grasos esenciales en animales y, junto con la delta-5 desaturasa y una reacción de elongación, produce ácido araquidónico a partir del ácido linoleico.
Estábamos en lo cierto y la inyección de insulina corrigió la actividad reducida que encontramos en los animales diabéticos en la desaturación de ácidos: oleico, linoleico y alfa-linolénico. El mecanismo de reacción controlado por la insulina estaba aparentemente involucrado en la síntesis de las proteínas.
Esta nueva línea de control hormonal de las desaturasas por insulina resultó ser muy fructífera. En los años siguientes probamos y estudiamos el mecanismo de acción de: epinefrina, glucagón, glucocorticoides (hidrocortisona, dexametasona, triamcinolona) ll-deoxi corticosterona, 17-beta-estradiol, estriol, testosterona y ACTH. Todas estas hormonas fueron depresoras de la actividad de delta 6 y delta-5 desaturasas. La insulina fue el único activador.
Para solucionar estos problemas, hace muchos años comenzamos, y todavía continuamos, no sólo con experimentos in vivo que comprenden la inyección de hormonas en ratas sino también, estudios con cultivos celulares de diferentes tejidos. Estos experimentos se llevaron a cabo, principalmente, en colaboración con dos hermanas, las doctoras María J.T. de Alaniz y Nelva I.T. de Gómez Dumm, médicos de mi equipo y más tarde con el Dr. Carlos Marra.
Los estudios con cultivos celulares resultaron una excelente manera de probar los efectos puros de las hormonas y eliminar las acciones entre órganos. Cuando comenzamos a estudiar el metabolismo de los ácidos grasas por cultivo celular, nos encontramos con problemas prácticos, uno de los cuales resultó ser la escasa existencia de plasma de ternero. Por lo tanto, la Dra. de Alaniz recurrió a un matadero donde recogió la sangre. Todo parecía marchar bien hasta que un día se escapó un toro y todo el mundo se echó a correr, en medio de gran confusión, para ponerse a salvo. A partir de ese momento, buscamos una fuente menos peligrosa para obtener el plasma.
Durante el curso de nuestras investigaciones sobre el mecanismo de las reacciones de las desaturasas y la identidad de los sustratos, tuvimos que llevar a cabo la síntesis orgánica de una serie de ácidos grasos cis-insaturados 1- C14 que realizamos con el Dr. A. Catalá. A tal efecto, contamos con la colaboración del Dr. A. E. Mitta, de la Comisión de Energía Atómica Argentina y del Dr. W. Kunau de Bochum, Alemania. Enviamos al Dr. J.C. Castuma a trabajar con él en Alemania durante un tiempo y luego, en 1972, el Dr. Kunau vino a nuestro laboratorio para trabajar durante un par de meses.
Últimamente, nuestro interés se centró en nuevas líneas de estudios sobre lípidos que involucran una variedad de técnicas. Realizamos estudios de avanzada en el metabolismo de los ácidos grasos de invertebrados, en especial de moluscos bivalvos marinos y de agua dulce. Este trabajo, seguido por el del Dr. R. J. Pollero en otros invertebrados, mostró la existencia de varias lipoproteínas en la hemolinfa. También, encaramos estudios sobre la bioquímica de lípidos en los órganos del Triatoma infestans, un insecto hematófago vector de la enfermedad de Chagas. Se estudió específicamente el metabolismo del ácido araquidónico (precursor de prostaglandinas), lipoproteínas y lípidos cuticulares, para lo cual fue necesario el desarrollo de técnicas ultramicrométricas.
Asimismo estudiamos la interacción de las proteínas y los lípidos en membranas y en lipoproteínas humanas y el efecto del colesterol en las enzimas de las membranas, que involucraron la aplicación de técnicas biofisicoquímicas, tales como: fluorescencia polarizada, resonancia paramagnética nuclear y espectroscopía por resonancia magnética nuclear, etc. Estas técnicas nos permitieron estudiar la dinámica de las enzimas enlazadas con membranas, como por ejemplo, UDP-glucoronil transferasa y las desaturasas de ácidos grasas. Pero, estamos ingresando ahora en los tiempos modernos, en los que las nuevas herramientas incluyen la cromatografía líquida de alto rendimiento, las computadoras, la Internet, etc.
En 1982, creamos el Instituto de Investigaciones Bioquímicas de La Plata, a través de un acuerdo entre nuestro Consejo Nacional de Investigaciones y la Universidad Nacional de La Plata. Como resultado de esta mejor organización hemos podido llevar a cabo nuestras investigaciones sobre lípidos de manera más eficiente.
Sin embargo, recuerdo con mucho cariño los viejos tiempos cuando se llevaba a cabo una investigación más personal y con nuestras propias manos, sin necesidad de presionar tantos botones. Asimismo, teníamos un mayor conocimiento de nuestro equipo y podíamos repararlo nosotros mismos. No obstante, el nuevo equipamiento ha ampliado de manera gigantesca las posibilidades de las investigaciones. Además, los estudios a nivel génico y las técnicas de Biología Molecular nos han permitido entrar en una ciencia que es casi casi ciencia ficción.
No puedo dejar de mencionar al Dr. Pedro Cattáneo, miembro de AOCS de larga data y ex-profesor quien trabajó en su laboratorio de Buenos Aires en sus ácidos grasos de oleaginosas y temas similares hasta que se jubiló en 1997, a los 85 años de edad. Recuerdo los encuentros con él todos los meses en la Academia de Ciencias Exactas, Físicas y Naturales, donde a menudo, hablábamos sobre los viejos tiempos…"

Parece que fue ayer...

Entrega de los premios del Colegio Nacional de Buenos Aires.

Viejo Instituto del INIBIOLP.

Equipo de cromatografía gaseosa.

Su grupo de colaboradores de la década del sesenta.

Visita del profesor Konrad Bloch
(Premio Nobel de Fisiología o Medicina 1964) el 18 de julio de 1966.

6a Reunión de la Sociedad Argentina de Investigaciones Bioquímicas. La Plata, octubre de 1970. Participó el Dr. Luis Federico Leloir (Premio Nobel de Química en 1970).