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InVet

On-line version ISSN 1668-3498

InVet vol.15 no.2 Ciudad Autónoma de Buenos Aires Dec. 2013

 

ARTÍCULO DE INVESTIGACIÓN

Resistencia de Streptococcus bovis aislados de mastitis bovina frente a penicilina y macrólidos-lincosamidas

Denamiel, G.1; Puigdevall, T.1; Testorelli, F.1; Albarellos, G.2; Gentilini, E.1

Cátedras de
1Microbiología y
2Farmacología. Facultad de Ciencias Veterinarias. Universidad de Buenos Aires. Chorroarín 280 (1426). CABA.

Correspondencia e-mail: Graciela Denamiel gdenam@fvet.uba.ar

Recibido: 07/01/2013
Aceptado: 20/11/2013


Resumen

El objetivo de este trabajo fue determinar los perfiles de resistencia en Streptococcus bovis aislados de mastitis bovina frente a penicilina y macrólidos-lincosamidas, antibióticos de relevancia en la práctica clínica diaria. Se determinó el porcentaje de resistencia y las concentraciones inhibitorias mínimas (CIM50, CIM90), en 39 aislamientos identificados por métodos fenotípicos. La resistencia para penicilina fue del 67,6%, la CIM50 0,5 μg/ml, CIM90 16 μg/ml y el rango 0,007 y 32 μg/ml. Para eritromicina, fue 41,2%, CIM50 0,125 μg/ml, CIM90 8 μg/ml y el rango 0,015 y 256 μg/ml. Para lincomicina, 64,8% y ambas CIMs 4 μg/ml, con un rango entre 0,062 - 32 μg/ml. La identificación de cada especie y el estudio de su susceptibilidad son necesarios para decidir las prácticas de manejo apropiadas para controlar la enfermedad. Hasta el momento es escasa la información sobre resistencia a antibióticos de Streptococcus bovis aislados de mastitis bovina.

Palabras clave: Sreptococcus bovis; Mastitis bovina; Resistencia; Antibióticos.

Resistance of Sreptococcus bovis isolated from bovine mastitis to penicillin and macrolides-lincosamides

Summary

The aim of this study was to determine the resistance profile of relevant therapeutic antibiotics penicillin, erythromycin and lincosamides of bovine mastitis isolated Streptococcus bovis. The resistance percentage and minimum inhibitory concentrations (MIC50, MIC90) of 39 phenotypically identified strains were determined. For penicillin, the resistance percentage was 67.6%, the CIM50 0.5μg/mL, CIM90 16 μg/mL and the range 0.007 to 32 μg/mL. In the case of erythromycin resistance obtained was 41.2% MIC50 0.125 μg/mL and MIC90 8 μg/mL and a range of 0.015-256 μg/mL. For lincomicyn, resistance obtained was 64.8%, MIC50 and MIC90 4 μg/mL and a range of 0.0625- 32 μg/mL. The identification and antibiotic susceptibility profile of streptococci species provide relevant data for the correct management and control of this mammary disease. Up to now there is few information regarding antibiotic resistance of Streptococcus bovis isolated to bovine mastitis.

Key words: Sreptococcus bovis; Bovine mastitis; Resistance; Antibiotics.


Introducción

Las bacterias relacionadas con las infecciones intramamarias (IIM) de bovinos lecheros varían en su prevalencia de acuerdo a las prácticas de manejo utilizadas en el establecimiento productivo. Es por ello que desde hace unos años los patógenos ambientales, microorganismos que cohabitan con el animal en el tambo, cobraron protagonismo como agentes productores de mastitis6, 7, 14. Entre ellos, encontramos a varios integrantes del género Streptococcus que tiene más de 65 especies validadas y que taxonómicamente están distribuidas dentro del Grupo piogénico y el Grupo viridans. A su vez, dentro de este último se encuentra el Grupo S. bovis / S. equinus, cuyas especies antiguamente se conocían como Streptococcus bovis2, 18, 19. Estos cocos no hemolíticos pertenecen a la microbiota intestinal de los animales y el hombre y su taxonomía se encuentra sujeta a permanentes modificaciones8, 11, 18. Entre sus características se encuentra la habilidad para actuar como parásitos intracelulares facultativos y multiplicarse en el interior de los macrófagos. Es conocido que los estreptococos no hemolíticos pueden ser reservorios de genes de resistencia (R) a antimicrobianos (ATM) y tener la capacidad de transferirlos a través de algún mecanismo de intercambio genético, a otras especies bacterianas1, 10. Esta habilidad, en parte podría explicar su potencial patogenicidad en la mastitis y también la posible dificultad para elegir el ATM apropiado para el tratamiento. En veterinaria hasta el presente estos aislamientos no se consideran relevantes como patógenos de los animales y es por ello que la información es escasa2. Sin embargo, en el hombre es reconocida su importancia médica porque tiene una estrecha relación con la endocarditis infecciosa y el carcinoma de colon17, 19.
El objetivo de este trabajo fue determinar la resistencia de Streptococcus bovis frente a penicilina y macrólidos-lincosamidas (ML), antibióticos de uso convencional en el tratamiento de las mastitis.

Materiales y métodos

Bacterias:

Se utilizaron 39 aislamientos de Streptococcus bovis pertenecientes al cepario de la Cátedra de Microbiología de la Facultad de Ciencias Veterinarias de la Universidad de Buenos Aires, obtenidos entre los años 2009 y 2012 de muestras de leche provenientes de bovinos con mastitis clínica y/o subclínica de establecimientos de la provincia de Buenos Aires. La identificación como especie se realizó mediante las pruebas de: catalasa, bilis-esculina, Vogues Proskauer, pirrolidonil arilamidasa y/o desarrollo en caldo cerebro corazón con el agregado de 6,5% de cloruro de sodio (Britania S.A. Argentina) y con API® 20 Strep (bio Merieux. Marcy-l´Étoile. Francia).

Determinación de la concentración inhibitoria mínima (CIM):

Se ensayaron drogas de patrones de potencia conocida: penicilina (PEN-1582 UI/mg, Richet), eritromicina (ERI- 898 µg/mg, ANMAT). De las lincosamidas se ensayó lincomicina (LIN 898 µg/mg, Frademicina. Janssen Cilag), determinando CIM por el método de macrodilución en tubo. El punto de corte de resistencia (R) para PEN fue ≥4mg/ml y para ERI ≥ 1 μg/ml, según Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) documento M31-A3 (2008)3. El punto de corte para clindamicina (CLI) fue ≥1mg/ml y se utilizó para testear la R de lincomicina, según CLSI, documento M100-S22. (2010)4.

Cepa control:

Streptococcus pneumoniae ATCC® 49619.

Resultados

Los valores de CIM50, CIM90, rango y porcentaje de R para cada antibiótico se observan en la Tabla 1.

Tabla 1. Concentración Inhibitoria Mínima y porcentaje de resistencia a penicilina, eritromicina y lincomicina de Streptococcus bovis.

CIM50 : concentración inhibitoria mínima del 50% de la población
CIM90 : concentración inhibitoria mínima del 90% de la población

 

Discusión

En este estudio Streptococcus bovis mostró altos niveles de R para los tres ATM ensayados. Las concentraciones incluidas en el rango indican la presencia de aislamientos sensibles, aunque el dato poblacional CIM90 fue superior al punto de corte de R para las tres drogas. Además, todos los aislamientos resistentes, fueron a su vez, multirresistentes. Esta información, no se pudo comparar con otros estudios similares, por la escasa información en veterinaria. Sin embargo, un trabajo realizado en Corea donde determinan la susceptibilidad antibiótica con el método de difusión en agar, se incluyen datos sobre Streptococcus bovis que arrojaron los siguientes porcentajes de R: 4,2% para PEN, 12,5% ERI, 33,3% LIN y observando que el 16,6% del total de aislamientos de S. bovis eran multirresistentes14. Si bien este estudio describe R en S. bovis, los porcentajes resultaron inferiores a los hallados en nuestro trabajo. Esta diferencia podría explicarse en parte a que, la metodología utilizada fue diferente y si bien el método de antibiograma por difusión es la técnica más difundida en el mundo, no siempre guarda buena correlación con el valor de CIM, método que se considera como la prueba de oro para testear a los ATM en el laboratorio3,4,12.
La bibliografía sobre R a ATM de estreptococos productores de IIM brinda datos de las especies más estudiadas en la mastitis, S. agalactiae, S. dysagalactiae y S. uberis y sus porcentajes de R varían según las regiones del mundo que hasta hace unos años, ninguna de ellas era resistente. Retrospectivamente, Gianneechini et al.9 informó el 100% de sensibilidad a PEN y ERI en estas tres especies. Denamiel et al.5 coincidió con que no había R a PEN aunque en S. agalactiae encuentra 27,6% de R a ERI, presentando una CIM90 de 8 μg/ ml. A su vez, Pitkälä et al.16 describe en S. uberis el mismo comportamiento para PEN y observa un 15,6% de R a ERI registrando una CIM90 de 2 μg/ml. Recientemente, Kalmus et al.12 detecta cambios respecto a la R a PEN, observando un 0,4 % de R en S. uberis, aunque S. agalactiae y S. dysagalactiae seguían siendo sensibles y respecto a ERI los porcentajes de R fueron 1,3% en S. agalactiae, 6,7% en S. dysgalactiae y 8,2% en S. uberis. En este mismo estudio para valorar las lincosamidas ensayaron CLI y encontraron 6,2% de R en S. agalactiae, 7,8% en S. dysgalactiae y 6,6% en S. uberis. Petrovski et al. 15 afirmó que S. uberis presenta una R <10 % para la mayoría de los ATM, salvo para LIN cuya R era del 18,3%. Minst et al.13 no encontró R antibiótica en S. agalactiae pero del total de las otras especies el 13% fueron multirresistentes, siendo S. uberis la que expresó mayor multirresistencia seguido por S. dysgalactiae. Del análisis de estos trabajos, se puede observar cierta variabilidad en los datos, tomados como porcentajes de R o valor de CIM y se puede apreciar un incremento progresivo de la R en los estreptococos ambientales además de la aparición de cepas resistentes a ERI para S. agalactiae, información que permite inferir R cruzada para las otras drogas incluidas entre los ML3. Es importante considerar frente a la información sobre R antibiótica si los datos se expresan como género microbiano o como especie de estreptococo y además, si las técnicas utilizadas para la determinación de susceptibilidad son las mismas, pues de lo contrario los resultados obtenidos pueden no ser comparables16.

Conclusión

Ante el progresivo aumento de la R antibiótica de los estreptococos ambientales, es necesario profundizar la identificación de los mismos para estudiar su comportamiento y evolución de la R ya que tienen la posibilidad de transmitir a otras especies e incluso a algunas con mayor patogenicidad esos genes de R a los ATM.

Agradecimiento: Trabajo realizado con subcidio UBACyT 20020100100766 Mastitis bovina.

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