RESÚMENES DE TESIS

Estudio de las alteraciones bioquímicas, histopatológicas y ultraestructurales producidas por la administración oral a largo plazo de cotinina en ratas.
Comparación con nicotina

Sassone, Adriana H.

Cátedra de Toxicología y Química Legal. Facultad de Farmacia y Bioquímica, UBA. Junín 956, 6º, CABA. C1113ADD.

El fumar tabaco tiene efectos en el ser humano sobre el comportamiento, el sistema nerviosos central y periférico, el aparato cardiovascular y el sistema endocrino y, además, está asociado con la patogenia de diversas enfermedades.
La fuente principal del tabaco son las especies Nicotiana tabacum y Nicotiana rustica.
La nicotina (NI), principal compuesto activo del tabaco, es una droga adictiva y se le atribuyen los principales efectos adversos del tabaquismo.
La NI se metaboliza principalmente en el hígado. En un 70-80% es convertida a cotinina (COT), que es el principal metabolito en los mamíferos, incluido el ser humano.
La acción de la COT en el ser humano es muy poco conocida a pesar de su larga vida media biológica comparada con la de la NI (10 - 30 horas vs 1 - 3 horas, respectivamente).

Hipótesis
Esta tesis postula que es posible que la COT también intervenga en alguno de los efectos que experimentalmente se le atribuyen a la NI en modelos de largo plazo.

Objetivos
Se usaron ratas Sprague Dawley adultas machos para: a) determinar los efectos de la NI y la COT sobre los niveles de glucosa y el perfil lipídico, b) estudiar el comportamiento en el "campo abierto" y c) estudiar la histopatología del sistema vascular en diferentes tejidos.

Objetivos específicos
a) Desarrollar un método analítico para identificar y cuantificar COT plasmática por cromatografía líquida de alta "performance" (HPLC); b) Estudiar la toxicocinética de la COT; c) Evaluar los efectos de NI y COT sobre el síndrome de retirada, peso corporal, niveles plasmáticos de glucosa, colesterol y triglicéridos, niveles urinarios de ácido vainillinmandélico (AVM), presión arterial, frecuencia cardiaca y alteraciones histopatológicas luego de 120 días de tratamiento.

Estudio toxicocinético
La COT fue administrada en agua de red mediante sonda gástrica vía oral en una dosis de 1,30 mg/kg de peso animal luego de un ayuno de 12 horas.

Estudios crónicos
La NI (5 y 10 mg/kg/día) y la COT (4, 8 y 12 mg/kg/día) fueron administradas en el agua de bebida durante 120 días. El grupo control (C) recibió solamente agua de red.

Resultados
La NI disminuyó el peso corporal respecto del grupo C alcanzando una significación estadística a partir del día 56. El grupo COT se comportó de manera similar al C. En el "campo abierto" se midieron 9 movimientos. La privación de NI (10 mg/kg/día) por 24 horas modificó de manera significativa 5 de los movimientos respecto de C y COT. La abstinencia de COT (12 mg/kg/día) por 24 horas alteró sólo 1 movimiento respecto de C.
El reemplazo de NI por COT 12 por 24 horas modificó 7 de los movimientos respecto al nivel basal sin privación de NI.
La NI (p<0,05) y la COT (p<0,001) aumentaron la glucemia respecto de C. Los valores medios de glucosa de los grupos COT 8 y 12 y NI 10 aumentaron respecto de los niveles basales en un 100%, 75% y 34%, respectivamente.
La COT no afectó los valores de triglicéridos plasmáticos, mientras que la NI los disminuyó significativamente con respecto a C. No hubo diferencias significativas en los niveles de colesterol entre los grupos.
En el grupo COT 12, el AVM urinario aumentó más del 100% (p<0,001) respecto del grupo C y del grupo NI 10.
No se registraron diferencias significativas entre los valores de la presión arterial ni de la frecuencia cardiaca entre los grupos.

Estudios histopatológicos
La COT a la dosis de 8 mg/kg/día produjo vasculitis con perivasculitis arteriolo-capilar e infiltrados inflamatorios de tipo crónico en pulmón y riñón. El efecto fue dependiente de la dosis. El grupo COT 12 mostró numerosas dilataciones capilares e infiltrado celular en pulmón. En las células miocárdicas, pulmonares y renales se observó daño celular permanente. Las células endoteliales del tejido se mostraron hiperplásicas con vacuolización citoplasmática y congestión.

Conclusiones parciales
El método de HPLC desarrollado para cuantificar COT plasmática fue preciso, específico, consistente y confiable.
La concentración máxima de COT plasmática en las ratas fue alcanzada a los 60 minutos, se mantuvo constante entre las 3 - 6 horas y el t½ fue de 5,9 hs.
La COT no estaría involucrada en el descenso del peso corporal de las ratas.
El modelo experimental utilizado resultó efectivo para estudiar el síndrome de retirada de la NI y de la COT, para lograr importantes niveles plasmáticos de COT y adecuado para estudiar las alteraciones de la vasculatura
La COT participaría en el síndrome de retirada nicotínica de modos diferentes: atenuando, empeorando o no alterando sus efectos. Podría ser la responsable del aumento de los niveles de glucosa plasmática observado en ratas y el mismo fue dependiente de la dosis

Conclusiones finales
La COT aumentaría la glucemia por estímulo sobre la médula suprarrenal con el consecuente aumento plasmático de catecolaminas detectado a través del AVM urinario.
La hiperglucemia sería la responsable de la injuria sobre las células endoteliales pues se demostró experimentalmente que los niveles de glucosa aumentados alteran la homeostasis de la pared vascular.
En respuesta a la hipótesis de trabajo y en base a los datos experimentales obtenidos en este modelo el comportamiento de la NI y la COT es diferente. La COT modularía alguno de los efectos de la NI en especial a altas dosis y podría estar involucrada o ser responsable de algunos de los efectos adversos atribuidos a la NI.
Este conocimiento implica un adelanto y plantea la necesidad de ampliar la investigación en el tema.

Tesis para optar al título de Doctora de la Universidad de Buenos Aires
Directora: Dra. Clara M. López
Co-Director: Dr. Juan C. Perazzo Rossini