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Acta toxicológica argentina

versión On-line ISSN 1851-3743

Acta toxicol. argent. vol.24 no.1 Ciudad Autónoma de Buenos Aires jul. 2016

 

ARTÍCULOS

Evaluación de estrés oxidativo en pacientes con Lupus Eritematoso Sistémico y su posible relación con la exposición ambiental a agroquímicos

Assessment of oxidative stress in patients with Systemic Lupus Erythematosus and its possible relationship with environmental exposure to agrochemicals

 

Martinez, Leonardo N.1; Mastandrea, Carlos1; Benavente, Emilio3; Roverano, Susana3; Paira Sergio3; Poletta, Gisela1,2 ;Simoniello, M. Fernanda1

1Cátedra de Toxicología, Farmacología y Bioquímica Legal, Facultad de Bioquímica y Cs. Biológicas, UNL. Ciudad Universitaria, Santa Fe, Argentina.
2Consejo Nacional de Investigaciones Científcas y Técnicas (CONICET). Av. Rivadavia 1917 (C1033AAJ). Ciudad Autónoma de Buenos Aires. Argentina.
3Servicio de Reumatología del Hospital Provincial José María Cullen. Santa Fe, Argentina *fersimoniello@yahoo.com.ar

Recibido: 18 de mayo de 2015
Aceptado: 10 de mayo de 2016

 


Resumen.

Los agroquímicos son un método efectivo para controlar especies perjudiciales a los intereses del hombre, pero aplicados indiscriminadamente provocan diversos impactos a nivel ambiental y en la salud. Uno de los mecanismos más importantes por el cual los agroquímicos se ponen en contacto directo con las poblaciones de zonas periurbanas es mediante la deriva. El Lupus Eritematoso Sistémico (LES) es una enfermedad autoinmune que posee un amplio rango de presentaciones clínicas y severidad. Si bien su etiología es desconocida, se la asocia con diversas causas ambientales dentro de las que podrían estar presentes los agroquímicos. El objetivo de este estudio fue evaluar, el posible daño oxidativo generado por exposición ambiental a mezclas de agroquímicos en pacientes con LES y personas sanas que residen en zonas rurales expuestas a mezclas de plaguicidas y contrastar los resultados con pacientes y personas sanas de zonas urbanas no expuestas. Se evaluaron 44 pacientes con diagnóstico de LES y 58 personas sanas (controles), se utilizaron como marcadores: catalasa (CAT), superóxido dismutasa (SOD), la relación glutation oxidado/reducido (GSH/GSSG) y lipoperoxidación (TBARS). Se encontraron diferencias estadísticamente signifcativas para TBARS y SOD al comparar los resultados del grupo LES urbano con su control y el grupo LES rural con el suyo (p<0,01 en ambos). Al realizar las comparaciones entre LES urbano y LES rural se halló un incremento en TBARS del 18,3% (p=0,014). Esta investigación demuestra la importancia de la utilización de biomarcadores de daño oxidativo en el seguimiento clínico de pacientes con LES, con el fn de establecer pautas de tratamiento adecuadas y considerar la relación entre la exposición ambiental a plaguicidas y el aumento de daño oxidativo en pacientes con LES.

Palabras clave: Estrés oxidativo; Lupus Eritematoso Sistémico; Agroquímicos; Biomarcadores.

Abstract.

The agrochemicals are an effective method to control harmful species of interests to humans, but when they are applied indiscriminately, they can cause environmental and health damage to people. Systemic Lupus Erythematosus (SLE) is an autoimmune disease that has a wide range of clinical manifestations and severity. While the etiology of SLE is unknown, it is associated with various environmental causes, being one possibility the exposure to agrochemicals. The aim of this study was to evaluate the possible oxidative damage generated by environmental exposure to agrochemical mixtures in SLE patients and healthy people living in rural areas and compare them with patients and healthy people living in urban, unexposed areas. Forty four patients diagnosed with SLE and 58 healthy individuals (controls) were evaluated, using the following markers: Catalase (CAT), superoxide dismutase (SOD), the oxidized/reduced glutathione ratio (GSH / GSSG) and lipid peroxidation (TBARS). Statistically signifcant differences were found in TBARS and SOD by comparing the results of the urban SLE group with its control and rural SLE group with its control (p <0.01 for both cases). When making comparisons between urban SLE group and the rural SLE group, an increase of 18.3% was found in TBARS (p = 0.014). This research demonstrates the importance of using biomarkers of oxidative stress in the clinical monitoring of patients with SLE, in order to establish guidelines for appropriate treatment and consider the relationship between environmental exposure to pesticides and increased oxidative damage in patients with SLE.

Keywords: Oxidative stress; Systemic Lupus Erythematosus; Agrochemicals; Biomarkers.


 

Introducción

La problemática generada por el uso de agroquímicos se incrementa rápidamente en la provincia de Santa Fe, Argentina. En la década del 90, con el desarrollo del cultivo de soja asociado a tecnologías de semillas transgénicas, la frontera agrícola fue avanzando vertiginosamente (Alvarez y Steinbach 2009). Conjuntamente al auge del cultivo de soja, el consumo de plaguicidas aumentó 858 % en los últimos 22 años (CASAFE 2012). Los agroquímicos constituyen el método más efectivo para controlar vegetales y animales perjudiciales a los intereses del hombre, pero aplicados indiscriminadamente, y mediante la deriva y otros mecanismos de disipación, pueden provocar exposición en personas que viven en áreas rurales (Caffarini y col. 2001). En la región pampeana, la exposición de las personas a los plaguicidas se vió incrementada debido al creciente uso de estos productos (Muñoz de Toro y col. 2006 a, b; Poletta y col. 2012). Es necesario generar una visión amplia que contemple no solamente los efectos agudos derivados de su utilización, sino que explore cambios en la tendencia secular de algunos eventos de salud que podrían poner de manifesto efectos acumulativos del uso de estas sustancias en la salud humana (Carballo y col. 2012).

Es sabido que la exposición a agroquímicos causa diversas alteraciones al organismo (Bolognesi 2003), entre ellas la afectación al normal funcionamiento del sistema endocrino. Ansar Ahmed y col. (2000) postularon una probable relación entre la perturbación endocrina y la alteración de la homeostasis de las células B y T, lo cual podría favorecer estados de desregulación inmune y derivar en una enfermedad autoinmune (EA). Por lo general, se acepta que las EA son el resultado de una compleja interacción entre factores genéticos y ambientales (Lleo y col. 2010). El Lupus Eritematoso Sistémico (LES) es una EA del tejido conectivo que posee un amplio rango de presentación clínica y severidad. Se la asocia con infecciones virales, drogas, anticoncepción oral, dieta, hábito tabáquico, exposición a luz ultravioleta y a compuestos tóxicos, dentro de los cuales podrían estar presentes los agroquímicos. La naturaleza infamatoria del LES implica un estado de estrés oxidativo que contribuye a la disfunción de las células inmunes, producción de autoantígenos y reactivación de autoanticuerpos (Ahsan y col. 2003; Zhang y col. 2010). Es importante considerar que la ocupación de agricultor se ha asociado con enfermedades reumáticas autoinmunes en diferentes poblaciones y usando diferentes diseños de estudio (Clegg y Van Gemert 1999). Por lo tanto, las exposiciones ambientales a los agroquímicos podrían activar determinados mecanismos celulares y así predisponer a algunas personas a desarrollar LES o exacerbar su presentación clínica. Entre los antecedentes que alentaron esta investigación se encuentran los trabajos de Balluz y col. (2001) y Parks y col. (2008), realizados en Estados Unidos, en los cuales se halló una asociación positiva entre la residencia rural y el LES.

En los pacientes con LES se observa un estado oxidante aumentado directamente relacionado con las especies reactivas de oxigeno (EROs). El equilibrio de reducción-oxidación intracelular supone la presencia de compuestos antioxidantes, enzimáticos y no enzimáticos, capaces de destruir o neutralizar las EROs. Cuando este equilibrio se rompe, se produce lo que se conoce como estrés oxidativo (Andresen y col. 2006; Ramos-Ibarra y col. 2006). Este mecanismo general de daño celular se ha asociado con la fsiopatología primaria o la evolución de un número creciente de entidades y síndromes de interés médico-social (Ames y col. 1993). El estrés oxidativo puede ser producido por un amplio abanico de factores entre los que se encuentran los plaguicidas (Banerjee y col. 1999; Halliwell 2002). En este sentido, Simoniello y col. (2010), demostraron que trabajadores agrícolas de la región pampeana expuestos a plaguicidas, presentaron modifcaciones en el equilibrio oxidativo y alteraciones enzimáticas.

A fn de mantener el equilibrio y evitar daños a los componentes celulares, el organismo cuenta con defensas constituidas por enzimas, eliminadores de radicales, sistemas reparadores de biomoléculas y sistemas eliminadores de componentes celulares oxidados. Entre las enzimas se destacan la superóxido dismutasa (SOD), glutatión peroxidasa (GSHPx) y catalasa (CAT) y entre los eliminadores de radicales, el glutatión (GSH). Como biomarcadores de capacidad antioxidante frecuentemente se utilizan las mediciones de la actividad de las enzimas SOD y CAT, debido a que un cambio en las mismas refejan eventos que pueden conducir a un estado de estrés oxidativo (Pérez Gastell y Pérez de Alejo 2000). De igual manera la cuantifcación de la relación glutatión reducido sobre glutatión oxidado (GSH/GSSG) es una buena medida del balance oxidativo de un organismo (Jones y col. 2000; Nogueira y col. 2004) ya que los estresores oxidativos pueden disminuir el contenido de GSH y cambiar el balance dinámico entre GSH y GSSG (Machado y col. 2008). Por otra parte, la peroxidación lipídica (POL) es probablemente el proceso inducido por EROs más investigado, afecta a las estructuras ricas en ácidos grasos poliinsaturados, ya que se altera la permeabilidad de la membrana celular produciéndose edema y muerte celular.

Para la cuantifcación de la POL, la medición de las sustancias reactivas con el ácido tiobarbitúrico (TBARS) se convirtió en el ensayo de elección para el screening o monitoreo, debido a su sensibilidad (Halliwell y Chirico 1993).

Por otra parte, las variables más usadas para describir la exposición a plaguicidas son la butirilcolinesterasa (BChE) y la acetilcolinesterasa (AChE). La disminución de la actividad de estas enzimas se relaciona, fundamentalmente, con exposición a compuestos organofosforados y metilcabamatos (Hernandez y col. 2006).

En el presente trabajo se utilizaron como biomarcadores BChE, AChE, SOD, CAT, GSH/ GSSG y TBARS con el objetivo de evaluar el estrés oxidativo de habitantes de áreas rurales que padecen LES ya que estas personas podrían estar ambientalmente expuestas a agroquímicos y sufrir desbalances en el estado oxidante mayores a los naturalmente generados por la enfermedad del Lupus.

Materiales y métodos

Población en estudio

Se invitaron a participar del estudio los pacientes con LES que se encontraban en seguimiento en el Servicio de Reumatología del Hospital Provincial José María Cullen de la ciudad de Santa Fe (Argentina) entre octubre de 2012 y diciembre de 2013. Por cada paciente con LES se invitó a participar una persona del mismo sexo y semejante edad, que resida en la misma localidad pero que no padezca LES para formar parte de la población control. En total aceptaron participar 102 personas, cuyo rango de edades era de 18 a 69 años. Dentro de estos, 44 eran pacientes con diagnóstico de LES (American College of Rheumatology 1997), y 58 personas sanas que conformaron el grupo control. Los participantes de ambos grupos fueron divididos en: I) residencia actual e histórica en la ciudad de Santa Fe o Santo Tomé, departamento La Capital, que no tenían contacto directo o indirecto con agroquímicos (urbanos), II) residentes de distintos departamentos de la región centro-norte de la provincia de Santa Fe en los que se desarrolla una intensa actividad agrícola (rurales). A todos los voluntarios se les explicó los objetivos del trabajo y se obtuvo el consentimiento informado según las normativas establecidas por el Comité Asesor de Ética y Seguridad de la Investigación de la Facultad de Bioquímica y Cs. Biológicas de la Universidad Nacional del Litoral. Además, se realizó una encuesta que incluyó datos socio-demográficos: edad, sexo, localidad, localización de la vivienda respecto a la zona de cultivo, servicio de salud; hábitos: consumo y frecuencia de cigarrillos y alcohol, enfermedad actual o crónica; datos laborales: tipo de trabajo, antigüedad laboral, horas de la jornada (Simoniello y col. 2008, 2010).

Se midió el SLEDAI o índice de actividad de la enfermedad en los pacientes con LES al momento de la toma de muestra de sangre (Bombardier y col. 1992). Este índice mide la severidad y compromiso sistémico de la enfermedad. El SLEDAI es un sistema de puntuación cuyo rango va desde 0 a 105 e incluye la revisión de diversos sistemas. Se seleccionaron exclusivamente pacientes con una actividad leve o inactiva, con una puntuación baja (de 0 a 4). Además al tratarse de personas con LES, en la anamnesis de los pacientes se consideraron variables clínicas como edad al diagnóstico, tiempo de evolución, tratamiento recibido en la actualidad (Roverano y col. 2001).

Obtención de las muestras

De cada donante se obtuvo una muestra de sangre (5 ml) por punción venosa, utilizando como anticoagulante una solución equilibrada de sales sódicas y potásicas de EDTA de pH 7,2 (Wiener lab). Las muestras así preparadas fueron transportadas refrigeradas al laboratorio y procesadas dentro de las 2 h. Se centrifugaron a 1000 g durante 10 minutos para la separación de los eritrocitos. La capa leucocitaria y el plasma se removieron y los eritrocitos restantes se lavaron tres veces en solución salina fría (8,9 g l-1de NaCl) por centrifugación 5 minutos a 1300 g y 4 ºC. Se realizó el dosaje de hemoglobina en sangre entera (Método de cianometahemoglobina de Drabkin 1970) con la fnalidad de expresar los resultados en relación a la concentración de hemoglobina en la muestra. Las alícuotas de los glóbulos rojos se mantuvieron a -80 °C para las determinaciones del estado oxidativo por un tiempo no superior a ocho semanas.

Marcadores de exposición a organofosforados y carbamatos

La AChE hidroliza a la acetiltiocolina y su actividad puede ser medida utilizando el método de Ellman et al (1961). Se empleó como muestra una dilución 1/10 del paquete globular lavado y como sustrato yoduro de acetil tiocolina, 156 mmol/l (Sigma A 5751). El producto de la hidrólisis reacciona con el ácido 5,5-ditiobis-2 nitro benzoico (DTNB, Sigma 8130) en solución tampón de fosfatos, pH 7,2 formando el compuesto coloreado que fue medido a 405 nm. La actividad de la enzima se determinó a temperatura constante de 30 ºC± 2º C (23). Para la determinación de BChE se utilizó un kit de reactivos comercial (Wiener lab®).

Marcadores de estado oxidativo

Actividad de catalasa (CAT) Para determinar CAT por espectroscopia UV, se utilizó el método de Aebi (1984). A 3 ml de H2O2 54 mM en 50 mM de solución tampón de fosfatos, pH 7 se le adicionaron 10 µl de hemolizado (Glóbulos rojos lavados al 1 %). La disminución de H2O2 se midió a 240 nm a 25 ºC en 60 seg. La actividad de CAT se calculó por diferencia de absorbancia a 240 nm en espectrofotómetro Genwey Geneva UV-Visible y los resultados se expresan como kUg-1Hb.

Porcentaje de inhibición de la enzima superóxido dismutasa (SOD)

Se utilizó el kit de reactivos Sigma 19160. La SOD cataliza la dismutación del anión superóxido en peróxido de hidrógeno y oxígeno molecular. La tasa de la reducción de oxigeno está linealmente relacionada con la actividad de la xantina oxidasa (XO), y es inhibida por la acción de SOD. Las lecturas se realizaron a 440 nm utilizando un lector de placa Rayto. Los resultados se expresan como el porcentaje de la actividad de SOD.

Relación glutatión reducido/oxidado (GSH/GSSG)

Se utilizó la técnica propuesta por Venturino y col. (2001), para determinar los tioles totales (GSH+GSSG) presentes en la muestra. En esta técnica se utiliza la enzima Glutation Reductasa (GR) que logra la conversión cuantitativa del GSSG en GSH. La técnica usa el equilibrio de la reacción desplazado hacia GSH en forma prácticamente total. La determinación colorimétrica de tioles totales se realizó con DTNB a 412 nm medida espectrofotométricamente con espectrofotómetro Genwey Geneva UV-Visible (Ellman 1959). Los resultados se expresan a través de la relación GSH/GSSG.

Determinación de sustancias reactivas con el ácido tiobarbitúrico (TBARS) La medición de la POL fue realizada mediante el método descripto por Buege y Aust (1978). El Malondialdehido (MDA) forma un 1,2 aducto con el ácido Tiobarbitúrico (TBA), lo que produce el complejo MDA:TBA (1:2) una base de Schiff color rosa fuorescente, que fue medida por espectrofotometría a 532 nm con espectrofotómetro Genwey Geneva UV-Visible. Los resultados se expresan como nmol de TBARS g-1Hb.

Análisis estadístico

El análisis estadístico se realizó con el programa SPSS, versión 17.0. Las muestras fueron codifcadas en el momento de la extracción y decodifcados antes del análisis estadístico para la comparación. La distribución de las variables se evaluó mediante la prueba de Kolmogorov-Smirnov y la homogeneidad de varianza se testeó utilizando la prueba de Levene. Las variables categóricas se resumieron mediante frecuencias y porcentajes, mientras que las variables continuas fueron presentadas como la media y el desvío estándar o la mediana. Se analizó la independencia estadística de variables cualitativas mediante la prueba χ2 o la de Fisher exacta según correspondiera. Las comparaciones univariadas entre grupos se realizaron mediante Mann-Whitney o la prueba T- Student, según correspondía. Los factores de confusión continuos (edad, tiempo residencia) se dicotomizaron calculando la mediana y comparando los grupos generados con los valores superiores e inferiores a esta.

Un valor de p < 0,05 se consideró estadísticamente signifcativo.

Resultados

Ambos grupos (pacientes y controles) no presentaron diferencias signifcativas al considerar sexo y lugar de residencia como factor (Chi cuadrado, p > 0,05). A partir de los datos obtenidos de las encuestas, los pacientes con LES, al igual que los controles, fueron divididos en urbanos y rurales en función de su domicilio de residencia. Los resultados de la actividad enzimática de BChE fueron 7052,56 ± 786,22 U l-1 y 5879,33 ± 631,56 U l -1 para personas pertenecientes a ámbitos urbanos y rurales,respectivamente (p < 0,01). Los valores medios hallados para AChE fueron 7389,15 ± 884,31 U l-1 de eritrocitos, para las personas de Santa Fe y Santo Tome mientras que para las personas de las comunidades rurales fue de 6012,20 ± 526,28 U l-1 de eritrocitos (p < 0,01). El domicilio de residencia y los marcadores de exposición permitieron formar 4 subgrupos: LES urbano, control urbano, LES rural, control rural. En cada uno se calculó la edad promedio de las personas y se lo caracterizó considerando el hábito de fumar y de consumir alcohol (Tabla 1).

Tabla 1. Descripción de la población estudiada, en cuanto a número de personas incluidas, edades promedio, consumo de tabaco y alcohol.

La distribución por sexo, tanto en los casos como en los controles, sigue la proporción esperada para la patología lúpica, la relación mujer/varón es de 9 a 1. Al comparar las edades entre ambos subgrupos de pacientes con LES no se encontraron diferencias signifcativas (p = 0,521; Test-T). Del análisis de los datos clínicos de los pacientes con LES se pudo observar que el 71 % de los pacientes consume más de una medicación, al analizar el consumo de corticoides, hidroxicloroquina e inmunosupresores, se observó que los porcentajes de consumo de cada fármaco, en ambos subgrupos analizados es similar (p > 0,085).

Utilizando el índice SLICC, la proporción de pacientes urbanos con daño crónico (17 de 40) no es estadísticamente diferente de la proporción de pacientes rurales (11 de 32) (p = 0,838). Tampoco se encontraron diferencias estadísticamente signifcativas en tiempo de evolución (p = 0,607) ni en edad de diagnóstico (p = 0,343) entre ambos grupos. Los resultados obtenidos de los parámetros de estado oxidativo CAT y GSH/GSSG de los controles y los de pacientes con LES considerando el lugar de residencia (urbano o rural) no arrojaron diferencias signifcativas en las comparaciones realizadas (Tabla 2).

Tabla 2. Resultados obtenidos para CAT (kU g-1 Hb) y GSH/GSSG en pacientes con LES y controles según residencia urbana o rural.

Al comparar los valores de SOD del subgrupo de pacientes con LES urbano con el subgrupo control urbano por un lado, y el subgrupo de pacientes con LES rural con el control rural por otro, se encontraron diferencias estadísticamente signifcativas (p < 0,001; Test-T). Estas diferencias pueden observarse en la figura 1, la cual muestra un aumento estadísticamente signifcativo del 69,5 % para los niveles de SOD en el subgrupo de pacientes con LES urbanos con respecto al control urbano (p < 0,001; Test-T). También muestra un aumento del 34,9 % para los niveles de SOD en el subgrupo de pacientes con LES rural con respecto al control del mismo origen (p < 0,001; Test-T). La comparación de SOD entre pacientes con LES urbanos y rurales no arrojó diferencias significativas.


Figura 1. Box-Plots de los resultados de SOD de los pacientes con LES y los controles considerando el origen de su residencia (urbanos y rurales). Los resultados se expresan en porcentaje de actividad de la enzima SOD. *p < 0,001; Test-T.

Por otro lado, en la figura 2 pueden observares los resultados obtenidos para TBARS. Se encontró un aumento estadísticamente significativo del 25,8 % en el subgrupo de pacientes con LES urbano con respecto al control urbano (p < 0,001; Test-T). También se halló un aumento estadísticamente significativo del 25,4 % en el subgrupo de pacientes con LES rural con respecto al control del mismo origen (p < 0,001; Test-T). Además, el subgrupo de pacientes con LES rurales mostró un incremento significativo del 18,3 % respecto a los pacientes con LES urbano (p = 0,014; Test-T).


Figura 2. Box-Plots de los resultados de TBARS de los pacientes con LES y los controles considerando el origen de su residencia (urbanos y controles). Los resultados son expresados en nmol de TBARS g-1Hb. *p < 0,001; ** p = 0,014; Test-T.

Como factores de confusión se analizaron la edad, el hábito de fumar y el tiempo de residencia (Tabla 3). En estos análisis, los parámetros de estado oxidativo fueron comparados en cada subgrupo, no obteniéndose diferencias significativas en ninguna de las comparaciones. El factor consumo de alcohol no se consideró debido al bajo número de personas con este hábito.

Tabla 3. Comparación de parámetros de estado oxidativo considerando la edad (≤ 32 vs >32), tiempo de residencia (<26 vs ≥ 26) y consumo de tabaco como factores de confusión en pacientes con LES y controles categorizados según su residencia.

Discusión

En la mayoría de los individuos que desarrollan LES, la enfermedad se produce como resultado de una mezcla entre su carga genética y los factores medio ambientales. Debido a la contribución de las hormonas sexuales quizás, las mujeres superen el umbral riesgo-enfermedad más fácilmente que los hombres, es decir, con una carga genética y una exposición ambiental relativamente menor (Mohan 2006). En la actualidad, está claro que la patología inmune asociada con EA como el LES comienza muchos años antes que las manifestaciones clínicas, pudiendo estar influenciada por factores ambientales experimentados en la vida temprana. Es posible, que un individuo genéticamente susceptible a desarrollar LES sólo alcance el "umbral" y desarrolle la enfermedad si es expuesto a múltiples estímulos ambientales durante su infancia (Edwards y Cooper 2006). La exposición ambiental a agroquímicos, evaluada en este trabajo a través de las enzimas colinesterasas, puede claramente ser un estímulo y constituir un riesgo real para las poblaciones rurales que se encuentran rodeadas por campos de explotaciones agrícolas. El análisis estadístico para la enzima CAT (Tabla 2) no evidenció diferencias significativas en ninguna de las comparaciones. Shah y col. (2011 y 2013) reportaron una disminución en la actividad de esta enzima en pacientes con LES con respecto a personas sanas, mientras que Mansour y col. (2008) reportan un aumento. Zhang y col. (2010) encontraron una correlación negativa entre CAT y el índice de severidad SLEDAI de los pacientes. Asimismo, la comparación de la relación GSH/GSSG entre las distintas poblaciones no fueron significativas (Tabla 2). Shah y col. (2013) observaron una disminución de GSH/GSSG en pacientes con LES respecto a los controles, hallando también una correlación negativa entre GSH/GSSG y el SLEDAI.

Las correlaciones negativas entre CAT y SLEDAI y entre GSH/GSSG y SLEDAI encontradas en estos trabajos previos ponen de manifesto que ambos marcadores podrían modificarse en función de la severidad y el compromiso sistémico de la enfermedad del LES. En el presente estudio, se seleccionaron exclusivamente pacientes con una actividad leve o inactiva con una puntuación baja (de 0 a 4) con el fin de disminuir factores clínicos confundentes, lo que podría explicar la falta de diferencias significativas tanto en CAT como en GSH/GSSG.

El aumento de la actividad de SOD (Figura 1) coincide con el hallado por Zhang y col. (2010), en el cual compararon un grupo de personas sanas con uno de pacientes con LES, mientras que otros autores reportaron una disminución en la actividad de SOD en pacientes con LES (Turgay y col. 2007; Shah y col. 2011).

Zhang y col. (2010) mostraron mayor actividad de SOD en pacientes con LES que en los controles pero una relación inversa entre la actividad de SOD y el SLEDAI. Estos investigadores plantean la hipótesis que los pacientes con LES tienen un incremento en las citoquinas proinfamatorias, que podrían generar como consecuencia, un aumento en la producción de EROs. El aumento de estas especies incrementaría la actividad de SOD para contrarrestar posibles daños, pero cuando los pacientes tienen un aumento de la actividad de la enfermedad (SLEDAI) durante un tiempo prolongado, SOD sería masivamente consumida, resultando en una disminución significativa de su actividad. Tosson y col. (2006) encontraron resultados similares. En estudios previos consultados (Turgay y col. 2007; Zhang y col. 2010; Shah y col. 2011) se observaron diferencias en la actividad de SOD en pacientes con LES con respecto a los controles, ya sea hallándose un aumento o una disminución en su actividad. Las variaciones en la severidad de la enfermedad podrían explicar las diferencias halladas en otros estudios respecto a la actividad de esta enzima. En este trabajo, el aumento de la actividad de SOD se explicaría por los bajos valores de SLEDAI de los pacientes. Los resultados de TBARS (Figura 2) concuerdan con los hallados en otras investigaciones, Tewthanom (2008) y Shah y col. (2011) hallaron un incremento en plasma y Shah y col. (2010) en eritrocitos de pacientes con LES. Un aumento en TBARS indicaría una producción excesiva de EROs generada por los mecanismos de patogenicidad propios del LES (Shah y col. 2011). Cuando se analizaron los resultados obtenidos para los pacientes con LES considerando la residencia, se detectó un aumento en TBARS del 18,3 % en los pacientes de zonas rurales respecto a los de zonas urbanas. La POL, expresada como un incremento de TBARS, se ha sugerido como uno de los mecanismos moleculares implicados en la toxicidad inducida por agroquímicos (Banerjee y col. 1999). Varios autores reportaron un incremento de MDA en humanos y animales ante la exposición a distintos pesticidas (Kale y col. 1999; Gultekin y col. 2000; Prakasam y col. 2001; Nasuti y col. 2003; Catalgol y col. 2007), resultados que coinciden con los de Kisby y col. (2009) y Simoniello y col. (2010) que evaluaron personas expuestas ocupacionalmente a mezclas de plaguicidas.

Otros trabajos han intentado establecer una relación entre la exposición ambiental a agroquímicos y la enfermedad de LES. Balluz y col. (2001) estudiaron una población de Estados Unidos expuesta ambientalmente a mezclas de agroquímicos en la cual la prevalencia de la enfermedad era superior a la media del país. Si bien no lograron establecer una asociación estadística entre la enfermedad y la exposición a agroquímicos, encontraron en esta población elevados niveles de metabolitos de plaguicidas, superiores a la media de referencia de Estados Unidos. Por otro lado, Parks y col. (2008) encontraron una asociación positiva entre la residencia rural y LES. No se hallaron diferencias significativas para ninguno de los factores de confusión considerados (Tabla 3). Los resultados para el factor edad coinciden con los de Pansarasa y col. (1999) quienes establecieron que los marcadores GSSG, POL y SOD, se modifican significativamente después de la séptima década de vida y que CAT y GSH no se muestran modificados por la edad. Si bien el hábito de fumar está asociado a estrés oxidativo, la ausencia de diferencias significativas en los marcadores evaluados, se podría relacionar con la frecuencia y cantidad de cigarrillos consumidos, como también con el consumo de antioxidantes que podrían influir en el estado oxidativo, entre otros factores (Rodríguez Perón y col. 2001; Valko y col. 2007; Valverde y Rojas 2009, Simoniello y col. 2010).

La mayoría de las personas incluidas en el estudio poseían una residencia superior a 10 años, en este contexto, el tiempo de exposición a supuestos estresores ambientales fue elevado para todos los casos y explicaría la ausencia de diferencias observando este factor.

Conclusión

Los pacientes con LES residentes en zonas rurales de la Provincia de Santa Fe (Argentina) poseen niveles de POL superiores a los pacientes residentes en zonas urbanas (Santa Fe y Santo Tome).

Sin dejar de considerar las limitaciones del presente trabajo, esta evidencia permite relacionar la residencia rural con la patología del LES. Basándose en estos resultados y en trabajos previos que vinculan al LES con el ambiente rural, se podría sugerir que los pacientes con LES habitantes de zonas rurales estarían en riesgo de sufrir niveles de daño oxidativo superiores a los propios generados por la enfermedad.

Agradecimientos

Los autores agradecen a las personas que aceptaron participar en este trabajo y a médicos y enfermeras de los Hospitales Provinciales: Cullen, Protomédico e Iturraspe. Además, los autores agradecen a la Mg. Ing. Liliana Contini (Unidad de Biometría, departamento Matemática, Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas, UNL, Santa Fe, Argentina) por su asistencia estadística. M.F. Simoniello a CAI+D UNL Nº 50120110100196.

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