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BAG. Journal of basic and applied genetics

On-line version ISSN 1852-6233

BAG, J. basic appl. genet. vol.18 no.1 Ciudad Autónoma de Buenos Aires Jan./June 2007

 

ARTÍCULOS ORIGINALES

Cariotipo de Odontophrynus cordobae Martino & Sinsch, 2002 (anura, leptodactylidae)

Salas, Nancy E. & Adolfo L. Martino

Ecología, Departamento de Ciencias Naturales, Universidad Nacional de Río Cuarto, Rutas 8 y 36, Km 601 (5800) Río Cuarto, Córdoba, Argentina.

Dra. Nancy Salas, Departamento de Ciencias Naturales, Universidad Nacional de Río Cuarto, Rutas 8 y 36, Km 601 (5800) Río Cuarto, Córdoba, Argentina. nsalas@exa.unrc.edu.ar

RESUMEN

El género Odontophrynus tiene 10 especies descriptas hasta la actualidad, siendo Odontophrynus cordobae la especie definida más recientemente. Utilizando técnicas estándares se describen los cromosomas mitóticos y meióticos de O. cordobae. Los ejemplares estudiados corresponden a 18 individuos machos pertenecientes a ocho localidades de la provincia de Córdoba. El número cromosómico encontrado es de 2n = 22 con los pares 1, 5-7, 10-11 con morfología metacéntrica y los pares 2-4 y 8-9 como submetacéntricos. Los espermatocitos I muestran 11 bivalentes y en los espermatocitos II se contaron 11 díadas. En todos los animales analizados, las constricciones secundarias fueron evidentes en los cromosomas del par 4. El análisis de los cromosomas meióticos confirma la naturaleza diploide de todos los ejemplares estudiados.

ABSTRACT

Odontophrynus genus comprises 10 species. Odontophrynus cordobae is the one most recently defined. The mitotic and meiotic chromosomes of O. cordobae were described by standard techniques. We analyzed 18 males from eight areas of Cordoba province. Their chromosome number is 2n = 22. Pairs 1, 5-7, 10-11 show metacentric morphology and pairs 2-4 and 8-9 are submetacentric. Spermatocytes I show 11 bivalents. and Spermatocytes II show 11 dyads. All animals analyzed evidenced secondary constrictions in chromosomes of pair 4. Meiotic chromosomes confirm the diploid nature of all specimens studied.

Introducción

Desde el punto de vista citogenético las especies del género Odontophrynus, particularmente O. americanus, han sido estudiadas por diferentes autores (Sáez & Brum, 1959 y 1966; Beçak et al., 1966, 1970; Bogart, 1967; Beçak & Pueyro, 1970; Barrio & Pistol de Rubel, 1972; Beçak & Beçak, 1974; Ruiz & Beçak, 1976 a, b; Schmidtke et al., 1976; Ruiz, 1980; Ruiz et al., 1980, 1981; Beçak & Beçak, 1980; Barale et al., 1981; Schmid et al., 1985, Salas et al., 2000). La mayoría de los trabajos citados se han realizado en poblaciones tetraploides y diploides de Brasil, incluso en áreas de simpatría (Beçak et al., 1970a,b). En Argentina, Barrio & Pistol de Rubel (1972) y Baldo et al. (2000) describieron ambas formas diploide/tetraploide, pero siempre referidas a la especie O. americanus.
El género Odontophrynus tiene 10 especies descriptas hasta la actualidad, siendo Odontophrynus cordobae la especie definida más recientemente (Martino & Sinsch, 2002), los autores analizaron poblaciones diploides y tetraploides de Odontophrynus americanus en la provincia de Córdoba (zona central de Argentina), con el objeto de evaluar si ellas representaban un par de especies crípticas o si todas las poblaciones pertenecían a la misma especie. Los trabajos anteriores a Martino y Sinsch (2002) relacionados con el par de especies cripticas O. cordobae/O. americanus fueron todos referidos a O. americanus tetraploide (4n), lo cual representa una confusión en cuanto a la información relacionada a dichas entidades. El objetivo de este trabajo es describir los cromosomas mitóticos y meióticos de individuos provenientes de diferentes poblaciones de Odontophrynus cordobae.

Materiales y Métodos

Los ejemplares estudiados de O. cordobae corresponden a 18 individuos machos pertenecientes a ocho localidades, dos de Elena (S 32º 34´-W 64º 22´), dos del Paraje La Escondida (S 32° 40´-W 64° 31´), dos del Arroyo San Francisco (S 32° 35´-W 64° 29´), tres del camino W (S 32° 34´-W 64° 30´), uno de Berrotarán (S 32° 27´- W 64° 23´), dos de Santa Rosa de Calamuchita (S 32° 04´-W 64° 31´), tres de Rodeo Viejo (´S 32° 21´-64° 40´) y tres de Villa Las Rosas (S 31° 56´-65° 02´) (Figura 1).


Figura 1. Terra típica Poblaciones de muestreo Ciudades de referencia

Los cromosomas mitóticos y meióticos fueron preparados a partir de intestino, médula ósea, bazo y testículo, luego de un tratamiento en vivo con colchicina. Todas las técnicas, tratamiento de hipotonía, fijación de células y tinciones se realizaron siguiendo los métodos descriptos en los trabajos de Barale et al. (1981); Schmid, (1978a, b); Schimd et al. (1979) y Schimd et al. (1990).
Los preparados, una vez secos y teñidos, fueron montados en Bálsamo del Cánada y observados con microscopio de fluorescencia marca Zeiss Axiophot D- 7082 con camara digital Axiocam HRC Zeiss. Las imágenes observadas fueron capturadas con el programa Axio Vision versión 4.3. Los cariotipos fueron confeccionados utilizando el programa de análisis de imágenes Adobe Photoshop versión CS 2. Se armaron dos cariotipos por cada ejemplar de cada localidad, se contaron 300 metafases y 360 figuras meióticas. Se efectuaron mediciones milimétricas del largo de cada cromosoma para obtener la relación entre los brazos cromosómicos (r), el índice centromérico (i) y la longitud cromosómica para cada par, determinando la correspondiente morfología cromosómica, modificada de Levan et al. (1964) por Aiassa et al. (2001). La medición se realizó con calibre digital Mahr 16ES.

Resultados

O. cordobae presenta los pares 1, 5-7, 10-11 con morfología metacéntrica con valores de r entre 1.28 y 1.13, y los pares 2-4 y 8-9 son submetacéntricos, con valores de r entre 2.02 y 1.53 (Tabla I). Los cromosomas 1-4 son grandes, con una longitud cromosómica relativa entre 14.09% y 10.64%. Los pares 5-7 son medianos (longitud cromosómica relativa entre 8.70% y 7.12%), mientras que los pares 8-11 son más pequeños con longitud cromosómica entre 5.15% y 3.53% (Figura 2).

Tabla I. Media y desvío estándar de r, i, longitud relativa y morfología de cada par cromosómico de O. cordobae (2n = 22).


Figura 2. Cariotipo de Odontophrynus cordobae

Los espermatocitos I muestran 11 bivalentes y en los espermatocitos II se contaron 11 díadas (Figura 3). En todos los animales analizados, las constricciones secundarias fueron evidentes en los cromosomas del par 4 (Figura 2).


Figura 3. (A) Primera metafase meiótica mostrando los 11 bivalentes. (B) Segunda metafase miótica mostrando las 11 díadas.

Discusión

La morfología cromosómica observada en las poblaciones analizadas de O. cordobae de la zona central de Argentina, fueron comparadas con la información existente de las poblaciones diploides de Brasil. En los trabajos de Beçak et al.,1970a, se describe la morfología de los pares cromosómicos, los cuales en la mayoría de los casos coinciden con nuestros resultados, a excepción del par 4. Los mencionados autores describen aquella morfología como acrocéntrica, mientras que para nosotros el par 4 es submetacéntrico. Bogart & Wasserman (1972) y Barrio y Pistol de Rubel (1972) definen el par 10 como submetacéntrico, mientras que nuestros resultados mostraron una morfología metacéntrica. Debemos mencionar que en el trabajo de Barrio y Pistol de Rubel (1972), la figura 4 no representa el cariotipo de un ejemplar de O. cordobae (sensu O. americanus diploide) sino a la especie O. lavillai Cei, 1985.
La constitución cromosómica de O. cordobae conserva la misma morfología de los pares 1-7 y 10-11 que su contrapartida críptica O. americanus. La diferencia se presenta en los pares 8 y 9 que son submetacéntricos para O. cordobae, mientras que para O. americanus la morfología es metacéntrica (Salas, 2004; Salas, en prensa)
Si consideramos la posición de las Constricciones Secundarias (CS) en el par 11, como el cariotipo común diploide de un posible ancestro en común, tal como se registra en O. occidentalis, O. cultripes y O. americanus (este último en poblaciones diploides de Brasil), por rearreglos cromosómicos, podrían haberse traslocado al par 4, dando lugar al cariotipo actual de O. cordobae. En las poblaciones analizadas de O. cordobae, las CS en el par 11 no se observaron en ningún ejemplar. Las observaciones de los cromosomas durante la meiosis I y II son las mismas que las observadas en las demás especies diploides. (Beçak et al., 1967; Beçak & Beçak, 1974; Ruiz et al. 1981).
El análisis de los cromosomas meióticos a partir de testículo, confirma la naturaleza diploide de todos los ejemplares estudiados.

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