COMUNICACIONES LIBRES

Genómica y genética molecular

 

GGM 1
DIVERSIDAD GENÉTICA EN POBLACIONES REMANENTES DE Cedrela fissilis EN LA SELVA PARANAENSE

Soldati MC^1,4, L Fornés^2,4, S Barth³, E Eskiviski³, N Zelener^1,4.

¹IRB-CIRN, INTA Castelar,
²INTA-EEA Famaillá,
³INTA-EEA Montecarlo,
⁴Miembros de LAFORGEN.
e-mail: mcsoldati@yahoo.com.ar

El cedro misionero (Cedrela fissilis), recurso altamente valorado en el mercado forestal, está categorizado como especie"En Peligro" (IUCN 2013) debido a una intensa presión antrópica que ha promovido el drástico decrecimiento del tamaño, conectividad, sanidad y valor económico de sus poblaciones naturales en la Selva Paranaense. A fin de conservar las poblaciones remanentes de la especie como generadores de bienes y servicios ambientales, e identificar futuras fuentes de selección para programas de mejora, es esencial conocer sus actuales niveles de diversidad genética y la estructuración de la misma. Con este objetivo se realizaron análisis genómicos en 8 poblaciones remanentes localizadas en el rango de distribución natural de la especie en Argentina, utilizando 10 marcadores SSR. Se observaron altos niveles de diversidad intrapoblacional, siendo la He promedio de 0.82 (ds= 0,04). La diferenciación genética, estimada a través de un AMOVA, fue moderada (PhiPT= 0,06; p= 0,001). Un análisis bayesiano permitió identificar 4 grupos genéticos, distribuidos de forma heterogénea entre las poblaciones, uno de ellos presente de forma casi exclusiva (≈93 %) en una población localizada al sur de la distribución de la especie, en la provincia de Corrientes. A pesar del alto grado de deterioro del recurso, estos resultados preliminares sugieren niveles de diversidad genética adecuados para la implementación de estrategias de conservación, incluyendo la preservación de poblaciones con mayor y/o particular diversidad.

GGM 2
RESPUESTA TRANSCRIPCIONAL DE Solanum tuberosum A Myzus persicae: ¿PARTICIPA EL ENDOSIMBIONTE DEL ÁFIDO?

Machado Assefh CR^1,2, G Lopez Isasmendi^1,2, AE Alvarez¹.

¹Cátedra de Química Biológica y Biología Molecular. Facultad de Ciencias Naturales. Universidad Nacional de Salta (UNSa). Salta, Argentina,
²Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET). Argentina.
e-mail: cristina.machado@conicet.gov.ar

El pulgón verde del duraznero Myzus persicae Sulzer, es la plaga de mayor importancia en el cultivo de papa. Al igual que todos los áfidos, se asocia con la bacteria endosimbiótica Buchnera aphidicola. Los perfiles transcripcionales de Solanum tuberosum infestada por M. persicae muestra cambios en la expresión de un gran número de genes: 1) relacionados a la patogénesis (PR), 2) de la vía del ácido salicílico (SA) y ácido jasmónico (JA) y 3) genes del metabolismo celular. Muchos de estos genes están relacionados con procesos de cambio del estado fisiológico de la planta que pasa de fuente a sumidero, lo que sugiere una manipulación por parte del áfido. Estos cambios estarían mediados por un efector, que podría tratarse de un componente salival sintetizado por el insecto o su endosimbionte, B. aphidicola. Se evaluó la participación de B. aphidicola en la manipulación que realiza M. persicae en la fisiología de la plantas. Se analizó la expresión de genes de S. tuberosum por RT-qPCR en respuesta a áfidos aposimbióticos (tratados en dieta con antibiótico), áfidos normales en dieta control y áfidos normales criados en planta. Se evaluaron genes de distintas vías de defensa (SA, JA, y etileno) y genes PR que se expresan en S. tuberosum en respuesta a M. persicae. Las plantas expuestas a áfidos aposimbióticos mostraron diferencias en la expresión del gen pr1 (vía del SA) y del gen lox (vía del JA) en relación a los áfidos normales, lo que sugiere la participación de B. aphidicola en la manipulación de la fisiología de la planta por parte del áfido.

GGM 3
TRANSCRIPTÓMICA DE LA INTERACCIÓN ENTRE Citrus limon Y UNA VARIANTE DE Xanthomonas citri ssp. citri

Orce IG¹, LN Sendín¹, C Luque², M Arias², R Roeschlin³, MR Marano³, AP Castagnaro¹, MP Filippone¹.

¹Estación Exp. Agroind. Obispo Colombres,
²Cátedra de Anatomía Vegetal. Facultad de Ciencias Naturales e Instituto Miguel Lillo. Universidad Nacional de Tucumán,
³Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas (UNR). Instituto de Biología Molecular de Rosario (IBR).
e-mail: georginaorce@yahoo.com

La bacteria Xanthomonas citri subsp. citri (XC) es el agente causal de la cancrosis de los cítricos. Recientemente se identificó una nueva variante, Xcc AT, que induce una respuesta de tipo hipersensible en Citrus limon. Con el objetivo de analizar los genes que se expresan diferencialmente durante la interacción, se realizó un análisis transcripcional utilizando la técnica cDNA-AFLP, 48 horas post-inoculación con las cepas Xcc AT y XC. Se seleccionaron 121 fragmentos derivados de transcriptos polimórficos obtenidos con 18 combinaciones de cebadores, de los cuales fueron secuenciados 62 y comparados con las bases de datos de nucleótidos y proteínas disponibles. En el análisis de la expresión global, se observó que el 16 % de las secuencias no presentó homología con secuencias depositadas en las base de datos. El resto presentó similitud a secuencias de genes involucrados en el metabolismo (15 %), genes de resistencia (15 %), transcripción y traducción (13 %), energía (10 %), señalización celular (5 %), estructura celular (5 %) y transporte de proteínas (2 %). Otro grupo presentó elevada similitud con proteínas no caracterizadas (8 %) o con genes que se expresan en cítricos sin una función conocida (11 %). Estos resultados permitieron realizar las primeras hipótesis de los mecanismos involucrados en la resistencia y susceptibilidad de Citrus limon a XC y proveer una categorización inicial de los posibles genes involucrados en los eventos tempranos de reconocimiento y señalización y que podrían utilizarse para la generación de estrategias biotecnológicas en el manejo de la enfermedad.

GGM 4
GENÓMICA COMPARADA DE TRIATOMINOS: ANÁLISIS EVOLUTIVO DE GENES DE DESARROLLO EMBRIONARIO

Pascual A¹, A Lavore^1,2, R Rivera Pomar^1,2.

¹Centro de Bioinvestigaciones, Universidad del Noroeste de la provincia de Buenos Aires,
²Centro Regional de Estudios Genómicos, Universidad Nacional de La Plata.
e-mail: agustinapascual07@gmail.com

El desarrollo de la genómica de insectos tiene un gran impacto en la entomología básica y aplicada al control de plagas o a insectos beneficiosos. Recientemente un consorcio internacional del cual nuestro laboratorio forma parte completó el secuenciamiento del genoma de Rhodnius prolixus, un insecto modelo vector de la enfermedad de Chagas. Con el fin de ampliar el conocimiento del genoma de triatominos, secuenciamos y ensamblamos el transcriptoma de tres especies de la Familia Reduviidae de distintas regiones de América: Triatoma dimidiata, Triatoma pallidipennis y Triatoma infestans. La secuenciación abarcó todos los estadios de la vida de los insectos. Usando la información generada realizamos la búsqueda y análisis del complemento total de los genes implicados en el desarrollo embrionario de insectos, desde estadios embrionarios temprano hasta el desarrollo post-embrionario. Con ese fin, generamos una base de datos de aproximadamente 1700 genes con los que se realizó una búsqueda por similitud de secuencia utilizando el algoritmo blastall para comparar nuestra base de datos con los transcriptomas de las tres especies del género Triatoma y de R. prolixus. De esta forma identificamos un amplio repertorio de genes en las cuatro especies analizadas con un alto nivel de conservación de secuencia. Los genes se compararon con los conocidos en otros insectos y se determinaron las diferentes tasas de evolución. A partir de los resultados obtenidos, se seleccionaron alguno de los genes para su validación funcional por RT-PCR y ARNi parental.

GGM 5
GENÓMICA COMPARADA DE LA RESISTENCIA A INSECTICIDAS EN TRIATOMINOS

Traverso L¹, S Ons², G Mougabure Cueto³, A Lavore¹, R Rivera Pomar^1,2.

¹Centro de Bioinvestigaciones, Universidad Nacional del Noroeste de la Provincia de Buenos Aires,
²Centro Regional de Estudios Genómicos, Universidad Nacional de La Plata,
³Centro de Investigaciones en Plagas CITEDEF-CONICET.
e-mail: lucilamtraverso@gmail.com

El conocimiento del genoma de los insectos nos permite analizar de manera global los genes que se relacionan con la resistencia a insecticidas, información relevante para el control de vectores de enfermedades. Rhodnius prolixus es un vector de la enfermedad de Chagas cuyo genoma ha sido secuenciado. En nuestro laboratorio secuenciamos el transcriptoma de tres triatominos vectores de Chagas: T. dimidiata, T. pallidipennis y T. infestans. Con el fin de determinar vías de resistencia a insecticidas, identificamos genes relacionados a cambios de expresión génica en respuesta a insecticidas, como en Anopheles gambiae y Drosophila melanogaster, o en hemípteros como Cimex lectularius. Generamos una base de datos de genes relacionados con resistencia y realizamos una búsqueda (blastall) en los transcriptomas de los cuatro vectores. Identificamos un amplio repertorio de genes a partir del análisis de transcriptos relacionados a detoxificación metabólica, transcriptos que codifican para proteínas cuticulares y de respuesta a insecticidas. Varios de estos genes se encontraron conservados en diversas especies, tales como superóxido dismutasa, catalasa, glutatión peroxidasa, citocromo P450 y glutatión S-transferasa. En base a estos estudios se comenzaron análisis de genómica funcional por secuenciamiento masivo de transcriptomas en respuesta a insecticidas para contribuir a un mejor conocimiento de los procesos de resistencia en triatominos. Este proyecto fue financiado por el Subsidio de Fortalecimiento de Centros e Institutos (UNNOBA) y PICT 2011-0135 (ANPCyT).

GGM 6
IDENTIFICACIÓN DE GRANDES INDELS MEDIANTE TILLING DE CLOROPLASTOS EN CEBADA

Lencina F^1,2, AM Landau¹, MG Pacheco¹, K Kobayashi², A Prina¹.

¹Instituto de Genética"E. A. Favret", CICVyA, CNIA, INTA Castelar,
²Laboratorio de Agrobiotecnología, Departamento de Fisiología, Biología Celular y Molecular, FCEN, UBA.
e-mail: flencina@cnia.inta.gov.ar

Mediante la aplicación de la técnica de genética reversa conocida como TILLING (Targeting Induced Local Lesions in Genomes) a nivel del genoma nuclear, se han reportado numerosos casos de sustituciones y de pequeños INDELS de una o dos bases, pero son escasos los reportes de INDELS de tamaños superiores, siendo 30 pb el tamaño máximo detectado. A través de la adaptación del TILLING para la detección de polimorfismos del genoma de los cloroplastos (plastoma), se analizaron plantas de cebada portadoras del genotipo mutador de los cloroplastos (cpm/cpm), el que se utilizó como mutágeno biológico del plastoma. Además de numerosas mutaciones puntuales, se identificaron 4 INDELS con tamaños de 15, 45, 79 y 620 pb, localizándose uno de ellos en el gen rps3, otro en el gen psbA y los otros dos en regiones intergénicas. Llamativamente, estos INDELS se ubicaron entre regiones repetidas directas de longitud variable, lo que sugiere que su origen podría estar relacionado con eventos de recombinación homóloga. Este fenómeno particular detectado en el plastoma y cuya frecuencia podría estar aumentada debido a una acción indirecta del efecto mutador, permite demostrar que es posible la identificación de grandes INDELS por TILLING. Es interesante mencionar que el fragmento perdido por la deleción en el gen rps3 tampoco se encuentra en la versión normal del mismo gen del maíz, lo que sugiere que un evento similar al aquí detallado ocurrió espontáneamente en la historia evolutiva del gen del maíz.

GGM 7
ANÁLISIS DE LA VARIABILIDAD GENÉTICA DE Acca sellowiana (BERG) BURRET POR EL USO DE DNA DE CLOROPLASTO.

Olkoski D, JM Otálora, VS Petry, GHF Klabunde, RO Nodari.

Universidade Federal de Santa Catarina.
e-mail: klabunde.gustavo@gmail.com

Acca sellowiana (Myrtaceae), conocida como feijoa, es un arbusto fructífero con potencial económico, distribuido entre el sur de Brasil, Argentina y el norte de Uruguay. El objetivo de este trabajo fue el de caracterizar la diversidad genética de esta especie utilizando secuencias de DNA de cloroplasto y así determinar sus relaciones evolutivas y filogeográficas. Fueron secuenciados los marcadores de plastidio trnH-psbA e trnS-trnG de 30 poblaciones, generando 1021 pb alineadas y 10 haplotipos. La diversidad nucleotídica (π) fue de 0,00211, mientras que la haplotípica (Hd) fue de 0,8167. Se observó una alta estructuración genética entre las poblaciones ( ST = 0,892; p<0,001) indicando flujo genético restricto y/o ausente en pequeñas distancias y una baja relación entre la distancia genética y geográfica (r= 0,382; p<0,0019) con la prueba de Mantel. Ocho de los 10 haplotipos se encuentran ubicados en el norte de la distribución natural de la especie indicando que esta región es el mayor centro de biodiversidad. De forma general fueron encontrados dos patrones de distribución de la diversidad, en la región con latitud inferior a 29o 32’ S la especie se encuentra en altitudes superiores a 500 msnm en asociación con el bosque de araucaria, la diversidad es mayor. Entre tanto a partir de la latitud 29o 65’ S, la especie ocurre en altitudes inferiores a los 400 msnm, diversidad menor y señales de dispersión reciente. Estas dos regiones no comparten haplotipos. Se recomienda la utilización de otros marcadores moleculares para entender mejor la historia evolutiva de la especie.

GGM 8
VARIABILIDAD DE SSR FUNCIONALES EN ESPECIES DEL GÉNERO Prosopis

Pomponio MF¹, C Acuña², V Pentreath³, AR Verga⁴, S Marcucci², S Torales¹.

¹IRB-CIRN, INTA Castelar,
²IB-CCVyA, INTA Castelar,
³Universidad Nacional de la Patagonia San Juan Bosco,
⁴Instituto de Fisiología y Recursos Genéticos Vegetales, CIAP, INTA.
e-mail: fpomponio@cnia.inta.gov.ar

Un total de 13 marcadores microsatélites (SSRs) polimórficos, localizados en genes de estrés abiótico y metabólicos provenientes del transcriptoma de Prosopis alba, fueron analizados en 20 individuos de P. alba y transferidos a P. denudans, P. chilensis, P. flexuosa e híbridos interespecíficos. Se observó un 93 % de transferibilidad y un alto porcentaje de SSRs resultaron polimórficos en las otras especies (64 % en P. denudans y P. chilensis y 73 % en P. flexuosa y los híbridos). La identidad de los amplicones obtenidos en las especies e híbridos fue analizada por secuenciación automática y alineamiento múltiple. Todas las especies presentaron alelos exclusivos y permitieron la diferenciación de las mismas. Los híbridos también mostraron alelos exclusivos pero no pudieron diferenciarse de las especies parentales P. flexuosa y P. chilensis. El número de alelos en todos los loci varió de 2 a 9, respecto a los valores de PIC observados, de las 48 combinaciones de locus-especie analizadas, 14 presentaron valores superiores a 0,5. Como era esperable para microsatélites que derivan de regiones altamente conservadas, se obtuvo una alta transferibilidad a otras especies y un nivel de polimorfismo menor comparado con los SSRs genómicos. Este conjunto de marcadores complementará a los ya desarrollados en P. chilensis y P. alba. Por ser marcadores funcionales resultan de particular interés para su utilización en futuros estudios de asociación con caracteres adaptativos, así como estudios poblacionales de carácter evolutivo en el género Prosopis

GGM 9
MÉTODO ECONÓMICO DE GENOTIPIFICACIÓN POR FLUORESCENCIA DE SSR EN Anadenanthera colubrina var. cebil

Goncalves AL^1,2, ME Barrandeguy^1,3,4, MV García^1,3,4.

¹Cátedra de Genética de Poblaciones y Cuantitativa. Departamento de Genética. FCEQyN. UNaM,
²Comité Ejecutivo de Desarrollo e Innovación Tecnológica de Misiones,
³Instituto de Biología Subtropical,
⁴Consejo Nacional de Investigaciones y Técnicas.
e-mail: alej.gonc@gmail.com

La genotipificación empleando microsatélites (SSRs) se realiza, generalmente, mediante electroforesis capilar y un sistema de detección láser. Para ello, uno de los cebadores de cada locus debe llevar una marca fluorescente. Dado que incorporar una marca fluorescente por cada par de cebadores es costoso, se ensayó el método propuesto por Schuelke (2000) en el cual se emplea un único cebador universal marcado con fluorescencia. Se genotipificaron 10 individuos de Anadenanthera colubrina var. cebil (Leguminoseae) mediante cuatro loci SSRnu específicos aplicando los dos métodos, es decir: empleando una marca fluorescente por cada par de cebadores SSRs específicos y empleando el método de Schuelke (2000). En este último se empleó el cebador universal M13 marcado con el fluoróforo FAM en su extremo 5’. Al extremo 5’ de los cebadores SSRs forward se incorporó el cebador M13 y se utilizaron los cebadores reverse originales. Estos cebadores se utilizaron en una proporción 0,3:0,4:1, respectivamente. Se requieren temperaturas diferentes de hibridación para el cebador universal marcado y para los cebadores SSRs específicos para asegurar el éxito de este método. Ambos métodos permitieron genotipificar a los individuos de manera eficaz aunque el método de Schuelke resulta más eficiente ya que el empleo de un único cebador marcado para genotipificar múltiples loci reduce los costos de manera proporcional al número de regiones analizadas.

GGM 10
ANÁLISIS DE EXPRESIÓN DE RGL2 EN SEMILLAS DORMANTES Y NO DORMANTES DE GIRASOL (Helianthus annuus L.)

Roselló PL^1,3, M Calafat¹, A Andrade², ML Molas¹.

¹Facultad de Agronomía, UNLPam. Ruta 35 km 334. CP 6300,
²CONICET- Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, UNRC,
³Facultad de Ciencias Exactas, Químicas y Naturales, UNAM.
e-mail: pauros_03@hotmail.com

Las semillas de girasol (Helianthus annuus L.) recién cosechadas se consideran dormantes porque no logran germinar aún en condiciones favorables. La incapacidad de germinar constituye un problema para la producción eficiente de las semillas de girasol que deben ser sembradas luego de la cosecha. El control de la dormición y la germinación se lleva a cabo por la acción simultánea de Ácido Abscísico (ABA) y Giberelinas (GAs). La pérdida de la dormición implica la degradación de ABA y un incremento en la biosíntesis de GAs. Con el fin de comprender las bases genéticas de este fenómeno se estudió la expresión del gen RGL2 (RGA-like 2), un intermediario en la señalización de GAs perteneciente a la subfamilia DELLA. Se ha propuesto que RGL2 controla un mecanismo de inhibición de la germinación y su expresión disminuye o desaparece en presencia de GAs, lo cual desencadenaría la germinación. La expresión de RGL2 se analizó mediante PCR semicuantitativa en semillas secas y embebidas (3 y 6 horas) de una línea dormida (B123) y no dormida (B91) de girasol. En semillas secas de la línea B123, RGL2 presentó un nivel de expresión de 1,31 veces en relación al control interno de Actina. Luego de iniciada la imbibición se observó una disminución de los transcriptos a valores de 0,86 a las 3 hs y 0,79 a las 6 hs. Por su parte, en la línea B91, RGL2 presentó niveles muy bajos de expresión tanto en semillas secas (019) como en semillas embebidas (016). Estos resultados sugieren que RGL2 actuaría como un regulador negativo en la germinación de semillas de girasol.

GGM 11
CARACTERIZACIÓN DE SECUENCIAS DEL GEN LEFTY2 EN CAMÉLIDOS SUDAMERICANOS

Valdecantos PA¹, MB Rivero¹, MS Coria¹, AD Barrera^1,2, M Roldán-Olarte^1,2, DC Miceli^1,2.

¹Instituto de Biología"Dr. Francisco D. Barbieri", Facultad de Bioquímica, Química y Farmacia, UNT,
²Instituto Superior de Investigaciones Biológicas (INSIBIO), CONICET-UNT.
e-mail: pvaldecantos@fbqf.unt.edu.ar

El gen lefty2 se expresa en la mitad izquierda de embriones en desarrollo durante la gastrulación y participa en la determinación de la asimetría izquierda-derecha. La proteína lefty2 presenta un elevado grado de conservación en su secuencia de aminoácidos, con una similitud mayor al 80 % entre diferentes especies de vertebrados. El gen lefty2 está organizado en 4 exones separados por 3 intrones. No se conoce la secuencia de este gen en ninguna de las cuatro especies de camélidos sudamericanos (CS). El objetivo de este trabajo fue caracterizar secuencias del gen lefty2 de vicuña, guanaco, alpaca y llama. En base a secuencias genómicas completas del gen lefty2 de diferentes especies de mamíferos, se diseñaron pares de cebadores específicos para amplificar a cada exón. A partir de muestras de ADN de vicuña, guanaco, alpaca y llama, se obtuvieron por PCR, productos de amplificación específicos (exón 1: 340 pb; exón 2: 198 pb; exón 3: 240 pb; exón 4: 252 pb) que fueron secuenciados. Las secuencias de nucleótidos fueron comparadas, utilizando el programa MEGA 5.1, con secuencias homólogas de primates, artiodáctilos, carnívoros y roedores. Se encontraron diferencias interespecíficas y mutaciones puntuales propias de CS y de artiodáctilos. Se construyeron árboles filogenéticos; los CS se agruparon en un mismo clado monofilético del Orden Artiodactyla. Se diseñaron nuevos cebadores específicos y se amplificó el intrón 1 de lefty2 de Vicugna vicugna y Lama guanicoe; la longitud de este intrón presenta diferencias con Homo sapiens, Bos taurus y Sus scrofa.

GGM 12
MC1R Y ASIP: GENES INVOLUCRADOS EN DEFINIR EL COLOR DE CAPA EN LLAMAS

Daverio MS¹, F Di Rocco¹, F Rigalt², S Romero³, L Vidal Rioja¹.

¹Instituto Multidisciplinario de Biologia Celular (IMBICE),CIC-PBA,CCT-CONICET,Calle 526 e/ 10 y 11, CP(1900), La Plata, Buenos Aires,
²EEA, INTA-Catamarca, Catamarca,
³EEA Abra Pampa, INTA-Jujuy.
e-mail: sdaverio@imbice.gov.ar

La interacción entre los genes MC1R (receptor 1 de melanocortina) y ASIP (péptido de señalización Agouti) controlan el tipo de pigmento eumelánico (marrrón-negro) o feomelánico (rojo-amarillento) producido y su localización. A nivel molecular se identificaron variantes alélicas en el gen MC1R y se caracterizó el exón 4 de ASIP en Llamas (Daverio et al., 2012) pero el rol de ambos genes en la determinación del color de capa es aún desconocido. El objetivo del estudio fue analizar los genotipos de los genes MC1R y ASIP en llamas de distinto color de capa. Se estudiaron 90 llamas agrupadas por color: blanco no albino (BNA), marrón oscuro y negro (MO), marrón claro (MC) y marrón rojizo con cara y extremidades negras (MCN). Mediante PCR se amplificaron y secuenciaron los dos genes. El análisis de los genotipos indicó que la mayoría de los animales con presencia de eumelanina (en diferentes grados de intensidad de color) son portadores del alelo MC1R*1. La combinación de esta variante con ASIP*1/- ó ASIP*3/ASIP*3 resultó asociada a llamas MC y MO, respectivamente. La frecuencia del alelo MC1R*2 presentó diferencias significativas entre los grupos de color de capa, encontrándose en homocigosis solo en BNA. No hubo correlación entre el fenotipo MCN y los genotipos de ambos genes. Se concluye que mutaciones en regiones diferentes a la estudiada podrían explicar el color MCN. Asimismo, los alelos de ASIP determinan los fenotipos MC y MO.

GGM 13
IDENTIFICACIÓN DE SNPS ÚTILES EN LA DETECCIÓN DE HÍBRIDOS EN CAMÉLIDOS SUDAMERICANOS DOMÉSTICOS

Lorenzo YE¹, MS Daverio¹, LB Vidal Rioja¹, WE Johnson², F Di Rocco¹.

¹Instituto Multidisciplinario de Biología Celular (IMBICE), CIC-PBA, CCT-CONICET, Calle 526 e/ 10 y 11, CP(1900), La Plata, Buenos Aires,
²Smithsonian Conservation Biology Institute, Front Royal, Virginia, USA.
e-mail: yesicalorenzo@hotmail.com

Los polimorfismos de un solo nucleótido (SNPs) han mostrado ser útiles en la determinación de ancestría e identificación de híbridos. Existen cuatro especies de camélidos sudamericanos. Las dos silvestres, el guanaco y la vicuña, dieron origen por domesticación a la llama, y la alpaca respectivamente. La ocurrencia de hibridación entre las formas domésticas dificulta la correcta asignación de especie, siendo el ADN mitocondrial de utilidad limitada. Utilizando información disponible a partir de la secuenciación del genoma completo de la alpaca (KB632434.1), se seleccionaron 4 marcadores de un panel de 20, con el objetivo de evaluar su utilidad en la determinación de ancestría en llamas argentinas. Para ello, se secuenciaron 4 fragmentos de 600-700 pb, en una muestra de 102 camélidos de las 4 especies, incluyendo una población de llamas de la provincia de Catamarca (n= 34). Se encontró un total de 13 polimorfismos, seleccionándose entre ellos 4 marcadores no ligados. Utilizando el programa Structure, y asumiendo dos poblaciones ancestrales (K= 2), se evaluó la probabilidad de pertenencia de las muestras a cada uno de los clusters (qs). La mayoría de las llamas analizadas se agruparon en el cluster de guanacos (qs>0.98). Siete animales (20 %) presentaron valores más bajos de qs (0,34-0.88), mostrando evidencias de mezcla. En las alpacas se observó una alta proporción de animales heterocigotas y ancestría mezclada. La aplicación de marcadores como los aquí descriptos, será de utilidad en problemas de asignación de especie y en la identificación de híbridos en camélidos domésticos.

GGM 14
ASOCIACIÓN DE UN SNP DEL PROMOTOR 1XB DEL GEN CAST CON TERNEZA DE LA CARNE EN NOVILLOS BRANGUS

Motter MM¹, PM Corva², G Marrube¹, MC Miquel², J Papaleo Mazzucco², EL Villarreal², ML Melucci², CA Mezzadra², A Schor³, LA Soria¹.

¹Facultad de Ciencias Veterinarias, UBA,
²Unidad Integrada Balcarce (EEA-INTA/Fac. Cs. Agrarias, UNMDP),
³Facultad de Agronomía, UBA.
e-mail: lsoria@fvet.uba.ar

La calpastatina es el inhibidor de las calpaínas, las enzimas que integran uno de los sistemas proteolíticos del músculo esquelético responsable de la tiernización postmortem de la carne. Una de las cuatro isoformas de dicha enzima, denominada CAST-II, se expresa a partir del promotor 1xb. La re-secuenciación comparativa de dicho promotor (1053 pb, 98.444.965-98.446.017 de AC_000164, UMD 3.1) en toros Angus y Brahman permitió confirmar el SNP C/G (#rs 137189823, posición 98.445.200), hallar un Indel (CGGGGGCGGGG, 98.445.729-98.445.741) y dos nuevos SNPs en 98.445.715 (C/T) y 98.445.763 (C/G), donde la mutación C/T elimina un sitio de unión para el factor de transcripción SP1. El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto del SNP C/T sobre terneza (resistencia al corte, RC) de la carne en novillos Brangus. Mediante secuenciación se determinaron los genotipos de todos los novillos con valores extremos de RC (n= 35) de un total de 247, clasificados en dos grupos: alta (≥8 kg, n= 18) y baja (≤5 kg, n= 17). Se observó una distribución similar de ambos genotipos homocigotas en cada grupo, hallándose 5 y 6 novillos TT con bajo y alto RC, respectivamente y 11 animales CC en cada grupo. Las medias por mínimos cuadrados de cada genotipo fueron 7,34±0,59 kg y 7,40±0,84 kg para CC y TT, respectivamente. Se concluye que bajo las presentes condiciones, no se detectó un efecto significativo del SNP sobre RC, lo que indicaría que el marcador no tiene efecto sobre la terneza o el mismo es sumamente pequeño como para ser de relevancia es una estrategia de Selección Asistida por Marcadores.

GGM 15
CARACTERIZACIÓN DE POLIMORFISMOS EN EL GEN BOVINO HSL INVOLUCRADO EN EL METABOLISMO LIPÍDICO

Goszczynski DE, DM Posik, G Giovambattista, MV Ripoli.

Instituto de Genética Veterinaria (IGEVET), CCT La Plata - CONICET - Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Nacional de La Plata.
e-mail: dango147@gmail.com

HSL (LIPE) es una enzima citoplasmática involucrada en el suministro de ácidos grasos, catalizando la hidrólisis de triglicéridos, diacilgliceroles y ésteres de colesterol. Algunos autores detectaron diferencias en los perfiles de expresión de este gen en animales con diferente calidad de carne, sugiriendo un papel importante sobre el desarrollo de ciertos caracteres productivos. Por lo tanto, su caracterización en diferentes razas bovinas se vuelve un tema de interés para la industria de la carne. Algunos polimorfismos han sido reportados, pero poco se conoce sobre su distribución y efecto en razas bovinas. El objetivo del presente trabajo consistió en caracterizar la variabilidad genética del gen HSL en un panel de 40 muestras correspondientes a razas criadas en Argentina, con diferente grado de marmoleo (Angus, Hereford, Holstein, Criollo, Galoway, Wagyu, Brahman y Nelore). La detección de SNPs se realizó por medio de PCR-secuenciación directa y el uso de programas y herramientas de alineamiento online. Se detectaron 20 SNPs, de los cuales 5 son inéditos: un SNP en el intrón 1 en Holstein, dos SNPs en el intrón 4 en cebuinos (Brahman y Nelore) y dos polimorfismos en el exón 8 en razas cebuinas. Con el fin de validar algunos de los SNPs hallados se diseñarán métodos de tipificación poblacional. La información resultante será de importancia para realizar trabajos de asociación entre polimorfismos del HSL y el grado de marmoleo en bovinos.

GGM 16
MARCADORES INMUNES EN UNA FAMILIA DE CABALLOS CRIOLLO

Sadaba SA¹, F Ortega², CM Corbi Botto¹, MH Carino¹, EE Villegas Castagnasso¹, P Peral Garcia¹, S Diaz¹.

¹IGEVET,
²CABAÑA DE CABALLOS CRIOLLOS-Asoc. Coop. INTA Leales, Tucumán, Argentina.
e-mail: sdiaz@fcv.unlp.edu.ar

La Hipersensibilidad dérmica a la picadura de insectos (IBH) es la enfermedad de la piel más común en caballos; consiste en una dermatitis crónica, recurrente y estacional, causada por reacción alérgica a especies del género Culicoides. Estudios de las posibles causas genéticas de IBH en equinos reportaron su asociación con el ELA. Para determinar las características de diversos marcadores inmunes, incluso de clase II del ELA, se estudió una familia de caballos Criollo Argentino, compuesta por un padrillo afectado por IBH y 17 medio hermanos paternos. Se analizaron los STRs UM011, COR112 y STR2, el gen IL12B, y 2 los genes ELA-DRA y ELA-DRB2. Los microsatélites se amplificaron por PCR-primers fluorescentes, evidenciando un grado de polimorfismo apreciable. La pirosecuenciación de los marcadores ELA-DRA e IL12Be6, reveló la presencia de dos alelos para IL12Be6, y tres alelos para DRA. ELA-DRB2 se tipificó por PCR-RFLP y secuenciaron diferentes variantes para confirmar la identidad del alelo, resultando mas frecuentes *3 y *7. El locus ELA-DRA mostró los alelos *1, *2 y *3. Se estimaron desequilibrio de ligamiento e índices de diversidad génica y los haplotipos en la línea familiar. Como parte de la primera caracterización genética a nivel de genes inmunes y en concordancia con el análisis de otros marcadores genéticos en esta raza, el grupo familiar presenta considerable diversidad en los genes inmunes, con alto potencial de ser loci candidatos para estudios de asociación genética.

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ASOCIACIÓN GENÉTICA ENTRE LA QUERATITIS SUPERFICIAL CRÓNICA Y LOS PROMOTORES DE DLA-DRB1, DLA-DQB1 Y DLA-DQA1

Barrientos LS¹, G Zapata², JA Crespi¹, DM Posik¹, S Diaz¹, V It, P Peral Garcia¹, G. Giovambattista¹.

¹Instituto de Genética Veterinaria (IGEVET), CCT La Plata -CONICET- Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Nacional de La Plata,
²Departamento de Clínicas, Facultad de Ciencias Veterinarias, UNLP, La Plata, Buenos Aires, Argentina.
e-mail: ggiovam@fcv.unlp.edu.ar

La queratitis superficial crónica (QSC) canina es una enfermedad inflamatoria corneal. La raza más afectada es el Ovejero Alemán. En la QSC hay sobreexpresión de los genes del Complejo Mayor de Histocompatibilidad de Clase II en el centro corneal. Con el objetivo de investigar los factores genéticos que podrían estar asociados al desarrollo de la QSC, los promotores (URR) de los genes de clase II DLA-DRB1, DLA-DQA1 y DLA-DQB1 se secuenciaron en 68 perros, incluyendo 40 animales afectados. El análisis de desequilibrio de ligamiento (LD) permitió identificar dos bloques de LD (r2 ¡Ü 45), con dos haplotipos para el DLA-DRB1 y cinco para el DLA-DQB1, respectivamente. La asociación entre la QSC y los alelos/haplotipos del URR-DLA, evaluados utilizando un estudio de caso-control clásico, mostró una asociación significativa entre el SNP DQB1*-154 [C/T] (p= 0.014), donde el alelo T incrementaría el riesgo a desarrollar la enfermedad (OR= 2.93, 95 % CI= 1.18-7.54). La asociación haplotípica mostró una asociación significativa entre el haplotipo URR-DQB*TATC y la QSC (P= 0,014, OR= 2.87, 95 %, CI= 1.16-7.37). Además, los resultados obtenidos mostraron que los perros homocigotas para el SNP URR-DRB*69 [C/T] presentaron un riesgo mayor para el desarrollo de la QSC que los heterocigotas (p= 0.03; OR= 4.36, 95 %). Estos resultados respaldan los estudios previos que sostienen que la QSC es una enfermedad inmunomediada y que tipificación de los genes DLA de clase II podrían ser usados para la identificación temprana de los animales susceptibles facilitando el diagnóstico de la QSC.

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CARACTERIZACIÓN DE LINAJES PATERNOS EN POBLACIONES DEL NOROESTE Y CENTRO-OESTE DE ARGENTINA

Jurado LS¹, J Beltramo¹, MS Schwab^1,2, JMB Motti^1,2, M Muzzio^1,2,5, V Ramallo^1,4, EL Alfaro³, JE Dipierri³, CM Bravi^1,2, G Bailliet¹.

¹Laboratorio de Genética Molecular Poblacional. IMBICE. La Plata. Argentina,
²Facultad de Ciencias Naturales, UNLP. Argentina,
³INBIAL, UNJu. Argentina,
⁴Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Porto Alegre, Brasil,
⁵Stanford University School of Medicine, Department of Genetics. Stanford, California,
⁶Facultad de Ciencias Económicas. UNLP- CICPA.
e-mail: lsjurado@imbice.gov.ar

El cromosoma Y debido a su herencia paterna no sufre recombinación permitiendo así la reconstrucción filogenética de los linajes paternos. En la Argentina, la composición de las poblaciones se vio influenciada por la inmigración europea durante los siglos XIX y XX. Con el fin de determinar el origen continental de los linajes paternos de las poblaciones actuales del Noroeste y Centro-Oeste del país se analizaron 944 individuos provenientes de poblaciones urbanas y suburbanas de Mendoza, San Juan, La Rioja, Catamarca, Salta, Jujuy y Tucumán, se caracterizaron mediante amplificación alelo específica para los haplogrupo más frecuentes en Argentina (R1, R, J2, F, K(xQXR), Q1a3*, Q1a3a, G1, G2, I1, I2, J1, E). Los productos fueron visualizados en geles de poliacrilamida al 10 % y teñidos con GelRed. Los haplogrupos que presentaron una mayor frecuencia fueron R1, Q1a3a, F y E, lo que evidencia las fuentes principales que contribuyen al acervo genético americano. A partir del análisis de varianza molecular de la frecuencia de los haplogrupos, se encontró un grado de diferenciación entre las poblaciones de Fst= 0,0512 (p=>0.001). Las diferencias entre las poblaciones estudiadas puede ser el resultado de los procesos que formaron la estructura genética actual, la cual está conformada por una variedad de linajes paternos provenientes de los diferentes continentes que protagonizaron los sucesos migratorios más importantes.

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DETERMINACIÓN DE MUTACIONES EN EL EXÓN 20 DEL GEN PIK3CA: EVALUACIÓN DE LA TÉCNICA LIS- SSCP

Acosta KB¹, MP Marks¹, MM Tibolla², PD Zapata¹.

¹Laboratorio de Biotecnología Molecular, InBioMis - FCEQyN, UNaM.,
²Cátedra de Bioquímica Clínica III - FCEQyN, UNAM.
e-mail: acostakb@yahoo.com.ar

El exón 20 del gen PIK3CA codifica el dominio quinasa de la subunidad catalítica de las PI3Ks de la clase IA (p110α). Estudios previos han reportado que la mutación de A→G que lleva a la sustitución de histidina (H) por arginina (R) en la posición 1047 dentro del exón 20 de este gen, alteraría el bucle de activación y por lo tanto, su interacción con los sustratos fosfatidilinositoles. En este contexto se evaluó la utilidad de la técnica de Polimorfismo Conformacional de Cadenas Simples en soluciones con baja fuerza iónica, denominado LIS-SSCP, con el fin de determinar la presencia de la mutación hotspot H1047R en el exón 20 del gen PIK3CA en muestras de carcinoma mamario. Con este propósito se diluyeron 5ul de productos de amplificación en 10ul de Buffer LIS modificado (10 % sacarosa y 0,01 % azul de bromofenol). Las muestras se desnaturalizaron durante 10-15 minutos a 95º C e inmediatamente en hielo durante 5 minutos. Se sembraron y corrieron en geles de poliacrilamida al 10 % no desnaturalizantes a temperatura de 8-10º C. La corrida electroforética fue llevada a cabo en TBE 0,5X a 20mA durante 17 hs. Los geles fueron teñidos con nitrato de plata. Los distintos patrones de bandas observados fueron corroborados por secuenciación. Se logró identificar alelos mutantes y normales mediante la técnica de LIS-SSCP, lo que permitirá determinar la frecuencia de la mutación H1047R en el exón 20 y establecer su asociación respecto al riesgo de desarrollo de cáncer de mama en un estudio de caso-control.

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POLIMORFISMO A380T EN LA INTEGRINA A6: DISEÑO DE CEBADORES Y OPTIMIZACIÓN DE LA TÉCNICA DE PCR

Acosta KB, MN Lorenzini Campos, MM Tiscornia, PD Zapata.

Laboratorio de Biotecnología Molecular - FCEQyN, UNaM - InBioMis.
e-mail: melinalorenzini@hotmail.com

La subunidad α6 de la integrina α6β4 es codificada por el gen ITGA6 (2q31.1). Mutaciones en este gen puede llevar a proteínas truncas o de secuencia modificada que podrían favorecer el desarrollo tumoral y, en particular, la progresión y metástasis. El objetivo del trabajo fue diseñar cebadores por medio de estudios bioinformáticos para amplificar la región genómica de α6 que contiene el polimorfismo A380T y optimizar las condiciones de la técnica de la Reacción en Cadena de Polimerasa (PCR) para su análisis en muestras de cáncer de mama y controles. Los cebadores fueron diseñados mediante la secuencia del gen ITGA6 de la base de datos del GenBank en el NCBI (National Center for Biotechnology Information) y su herramienta Primer BLAST. Se tuvieron en cuenta la cantidad de bases (18-24 pb), temperaturas de hibridación cercanas (dentro de los 5º C) y contenido de G:C entre 40-60 %. Los parámetros ensayados para la optimización de la PCR fueron: concentración de MgCl2, temperatura de hibridación (Tm) y las condiciones de ciclado. Los cebadores diseñados con Primer BLAST mostraron parámetros acordes con las características buscadas y fueron eficientes para la amplificación de la región genómica de ITGA6 que contiene el polimorfismo A380T y se logró optimizar la técnica de la PCR con 1,5mM de MgCl2, 5pmol de cada cebador y una Tm de 58º C. La técnica optimizada permitirá mediante RFLP (Polimorfismo de Longitud de Fragmentos de Restricción), analizar la relación del polimorfismo A380T de la integrina α6 con el desarrollo de cáncer de mama en muestras clínicas.

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ESTUDIO DE LAS MUTACIONES HOTSPOT EN EL GEN PIK3CA: ESTANDARIZACIÓN DE LA PCR Y SELECCIÓN DE ENZIMAS

Marks MP¹, KB Acosta¹, MM Tibolla², PD Zapata¹.

¹Laboratorio de Biotecnología Molecular, Instituto de Biotecnología Misiones (InBioMis) - FCEQyN, UNaM,
²Cátedra de Bioquímica Clínica III, FCEQyN - UnaM.
e-mail: paula.marks@hotmail.com

La mayoría de las mutaciones encontradas en el gen PIK3CA residen en regiones denominadas hotspots y resultan en formas oncogénicas con actividad quinasa elevada. El presente trabajo tiene como objetivo estandarizar la técnica de la Reacción en Cadena de Polimerasa (PCR) y seleccionar enzimas de restricción para el estudio de las mutaciones hotspot E542K y E545K en el gen PIK3CA en muestras de pacientes con cáncer de mama. Para la optimización de la técnica se utilizaron muestras de ADN extraídas de biopsias de carcinoma mamario mediante el método de salting out modificado (TEC/SDS) y se utilizaron los cebadores descriptos por Fendri et al., 2009. Se ajustaron los valores de MgCl2 y la concentración de cada uno de los cebadores así como las condiciones de ciclado. Las enzimas de restricción para el estudio de las mutaciones fueron seleccionadas utilizando el programa NEBcutter V2.0 disponible en línea (http://tools.neb.com/NEBcutter2/). Se ha logrado estandarizar la técnica de PCR bajo las siguientes condiciones: 5pmol de cada cebador, 3,5mM de MgCl2 y una temperatura de hibridación de 62º C. Para el análisis de las mutaciones E542K y E545K, los productos de PCR serán sometidos a una digestión con las enzimas de restricción Hpy188I y TspRI, respectivamente. Ambas mutaciones alteran el sitio de restricción de estas enzimas, de esta manera la digestión de los productos manifestará la ausencia de las mutaciones estudiadas. El análisis de los datos obtenidos permitirá evaluar si existe asociación entre estas mutaciones y el riesgo de desarrollo de cáncer de mama.

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ESTUDIO MOLECULAR DEL PROTOONCOGEN RET EN FAMILIAS CON NEOPLASIA ENDOCRINA MÚLTIPLE TIPO 2 (MEN2)

Visich A¹, N Gonza², M Plaza de Rivero³, M Nallar⁴.

¹Laboratorio de Genética, Fundación BIOGEN,
²Hospital de Endocrinología Arturo Oñativia,
³Fundación BIOGEN,
⁴Hospital de Endocrinología Arturo Oñativia.
e-mail: avisich@biogen.org.ar

Se han descripto distintas mutaciones del protooncogen Ret en todas las formas clínicas del MEN2 (MEN2A, MEN2B y el CMTF). Algunas causan tumores medulares de tiroides muy agresivos, mientras que otras se asocian a una presentación más leve y quienes las poseen podrían controlarse y tratarse más adelante. Estudios de correlación genotipo-fenotipo brindan conocimiento para personalizar el tratamiento de cada paciente acorde a su mutación específica. Describimos los hallazgos genéticos en 3 flias con MEN2A (10, 8 y 6 miembros) y 1 con CMTF (4 miembros), a partir de la identificación de la mutación en el caso índice. Para el análisis molecular se amplificaron por PCR los exones 10 y 11 del protooncogen RET y se digirieron los productos con enzimas de restricción (RFLP). Estudiamos en total 23/28 individuos e identificamos las mutaciones C609R, C634R y C634Y. En 1 flia MEN2A (C609R), 3 niños resultaron portadores: 2 con calcitonina aumentada que ya fueron tiroidectomizados (8 y 11 años) y el 3ro tiene programada su intervención (5 años). En la flia MEN2A (C634R), 4/8 hermanos fueron +, presentando sintomatología 3. En la flia MEN2A (C634Y), 2 niños + fueron tiroidectomizados (12 y 6 años). La mutación C634Y en la flia CMTF fue encontrada en los 4 miembros estudiados, 2 de ellos asintomáticos. Los estudios moleculares resultaron fundamentales para confirmar la naturaleza de la enfermedad, la detección temprana de individuos portadores y la aplicación de un tratamiento preventivo (tiroidectomía) en los pacientes positivos para mutaciones del protooncogen RET.

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ESTUDIOS MOLECULARES EN GENES DE RIESGO EN PACIENTES CON CÁNCER DE MAMA

Gautier M¹, P Jablonski¹, L Alterman¹, M Reynoso², L Nuñez³, R Valdez⁴, D Montoya⁵, J Schiaffi⁶, R Cerretini¹.

¹Centro Nacional de Genética Medica,
²Hospital Interzonal de Agudos Evita de Lanús,
³CEMIC,
⁴Hospital Militar Central
⁵Hospital de Oncología Angel Roffo,
⁶Hospital Bernardino Rivadavia.
e-mail: marienescribime@hotmail.com

El cáncer de mama (CM) es una enfermedad compleja y heterogénea de etiología multifactorial. El objetivo del trabajo fue analizar por PCR-RFLP y secuenciación la presencia de variantes genéticas (VG) de riesgo asociadas a CM con el fin de aportar al conocimiento de la epidemiología genética local. Se estudiaron los genes TP53, MDM2 XRCC3, XRCC1, RAD51 y XPD de baja penetrancia, Chek2 de moderado riesgo n= 195 y BRCA1/2 de alta susceptibilidad al CM n= 132. Nuestros resultados muestran una asociación significativa entre la presencia de A) los alelos TP53 IVS6/A OR: 2,09 (1,20-3,67) y TP53 IVS3 ins16pb OR: 211 (1,22-3,64) y CM con historia familiar (HF); B) XRCC3 (Thr241Met) OR:1,96 (1,29-2,99) y OR:211 (1,39-3,21) y XPD (Lys751Gln) OR:1,71 (114-2,56) y OR:1,71 (114-2,56) y CM con /sin HF. C) XRCC1 (Arg399Gln) OR:1,54 (1,04-2,30) y CM con HF. Las VGs CHEK2 1100delC, CHEK2IVS2+1G>A y CHEK2 IIe157Thr (430 T>C) no se han encontrado en nuestra población de estudio. Las VGs 187_188 delG (12/32); 5385_5386 ins C (12/32) en BRCA1 y 6174 delT (9/32) en BRCA2 fueron encontradas en 32/132 pacientes de la etnia judía con CM y /o Cáncer de Ovario. Una paciente fue un compuesto heterocigota 187_188 delG y 6174 delT. Las diferencias étnicas determinan distintas susceptibilidades a la carcinogénesis por lo que seguir investigando en VGs de riesgo en CM desconocidas en nuestra población resulta de importancia.

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ALUPATÍAS: CARACTERIZACIÓN DE UNA DELECIÓN DEL EXÓN 10 DEL F8 INVOLUCRANDO A UN ALU COMO CAUSA DE HEMOFILIA A SEVERA.

Abelleyro MM, LC Rossetti, CP Radic, VD Marchione, M Candela, IB Larripa, CD De Brasi.

Laboratorio de Genética Molecular de la Hemofilia, IMEX, CONICET-Academia Nacional de Medicina, Argentina.
e-mail: cdebrasi@hematologia.anm.edu.ar

Las grandes deleciones del gen del factor VIII (F8) representan 8-15 % de las hemofilias A (HA) severas (s). En HA, aunque fueron caracterizadas pocas grandes deleciones con sus puntos de ruptura, pudieron involucrarse mecanismos de recombinación homóloga, entre secuencias repetidas, y no-homóloga. Este trabajo presenta la caracterización molecular completa de una gran deleción del F8 detectada en un paciente con HAs por ausencia consistente de amplificación del exón 10. La amplificación por PCR de larga distancia desde el exón 9 al 11 sobre muestra de la madre del paciente mostró dos productos, el alelo normal predicho 9,419kb y el mutado, 6,2kb (la muestra del paciente no presentaba calidad suficiente para amplificación >2kb). El análisis de restricción múltiple del alelo mutado permitió diseñar primers en el IVS9 e IVS10 para la amplificación estándar de la deleción en muestras del paciente y su madre. La secuenciación del producto del alelo mutado (987bp) permitió caracterizar una deleción de 3147bp (ChrX:154190654-154187507). La ruptura 5’-IVS9 involucra un residuo de un elemento LINE/L2 y la 3’-IVS10, un elemento AluJb casi completo y sólo presenta microhomología en los extremos comunes AATTT indicando un mecanismo de recombinación no-homologa. La recurrencia de elementos Alu en las rupturas asociadas a grandes rearreglos genómicos (por recombinación homóloga o no-homóloga) confirmada en nuestro paciente con HAs sugiere reenfocar la investigación in vitro de los mecanismos involucrados sobre estas repeticiones abundantes en el genoma humano (n= 106).

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ANÁLISIS FUNCIONAL DEL GEN HUNCHBACK DE Rhodnius prolixus, VECTOR DE LA ENFERMEDAD DE CHAGAS

Rolandelli A¹, A Lavore¹, R Rivera Pomar^1,2.

¹Centro de Bio-investigaciones (UNNOBA-CIC),
²Centro Regional de Estudios Genómicos (UNLP).
e-mail: alavore@gmail.com

El estudio de expresión y función de los genes de desarrollo involucrados en la determinación temprana del eje antero-posterior de embriones es crucial para el entendimiento de los eventos morfogenéticos que culminan en la formación del patrón corporal de los organismos. Dentro de los genes con implicancias en el desarrollo embrionario, los genes gap son los responsables de la correcta formación de grandes dominios corporales a lo largo del eje antero-posterior del insecto. En este trabajo caracterizamos estructural y funcionalmente del ortólogo del gen gap Hunchback (Hb) en R. prolixus, insecto vector de la enfermedad del Chagas. Se identifico una unidad de transcripción que codifica para el factor de transcripción Hb el cual consta de 651 aminoácidos. Este posee 8 dominios de unión al ADN de tipo zinc finger y 4 dominios box característicos de la familia de proteínas Hb con alta similitud de secuencia con otros ortólogos del gen Hunchback. Se estudió la función de Hb-Rp mediante ARNi parental. Los fenotipos generados por la disminución en la expresión del gen mostraron defectos que afectan la región abdominal, donde se produce una marcada compactación y pérdida de segmentos en la región posterior del embrión; y por el otro, en la región anterior, pérdida del primer segmento torácico, apéndices torácicos deformados y ausencia de apéndices en los segmentos gnatales. La pérdida de regiones corporales y las deficiencias en la correcta formación de los segmentos cercanos a las deleciones, corrobora que el gen Hb-Rp actúa como un verdadero gen gap en la región cefálica y abdominal.