COMUNICACIONES LIBRES

Génetica humana

 

GH 1
COMPARACIÓN DE PCR-ASO Y EL MÉTODO TETRA PRIMER ARMS-PCR PARA IDENTIFICAR EL RS4731702 (C/T) DEL GEN KRüPPEL-LIKE FACTOR 14

Alvarez M.F.¹, S.E. Siewert¹, I.I. González¹, G. Fernández¹, M.S. Ojeda¹.

¹Universidad Nacional de San Luis.
E-mail: micaalvarez925@gmail.com

El factor de transcripcion Kruppel-like factor 14 (KLF14) ejerce un efecto pleiotropico sobre 10 genes asociados a una cascada de eventos en el metabolismo lipidico. Diversos estudios han demostrado su relacion con los niveles de HDL-c en suero y con la predisposicion a la Diabetes Mellitus Tipo 2. Entre los SNPs identificado se encuentra el rs 4731702 (C/T) a ~14kb upstream de KLF14, que podria actuar en cis influyendo en la expresion del gen. Las metodologias comunmente utilizadas para detectar SNPs son la PCR-ASO, PCR-RLFP y la secuenciacion, las cuales demandan mayores tiempos y costos onerosos. Objetivo: Utilizar un metodo rapido, sensible, confiable y de bajo costo para detectar el rs4731702 (C/T) en pacientes Diabeticos Tipo 2 y no diabeticos (Co). Metodos: Se estudiaron 12 Co y 11 Diabeticos Tipo 2. El ADN genomico se extrajo con el kit QIAmp DNA Blood Mini Spin. Los genotipos se determinaron mediante PCR-ASO y la tecnica tetra-primers ARMS-PCR, para lo cual se disenaron dos set de primers. Los productos de PCR se separaron mediante electroforesis en agarosa al 2 %. Resultados: La determinacion de los genotipos (C/C, C/T, T/T) del rs 4731702 en diabeticos vs. Co, arrojo los siguientes porcentajes: 54,5 % vs. 41, 7%; 36,4 % vs. 50 %; 9,1 % vs. 8,3 % respectivamente. Conclusion: Los resultados mostraron una concordancia del 100 % entre ambas metodologias de genotificacion del rs4731702(C/T) del gen KLF14, por lo que podemos inferir que la tecnica tetra-primers ARMS-PCR constituye un metodo recomendable para una rapida y segura genotipificacion de SNPs.

GH 2
APLICACIÓN DE LA TÉCNICA DE HIGH RESOLUTION MELTING PARA EL SCREENING GENÉTICO EN CASCADA FAMILIAR EN CASOS DE HIPERCOLESTEROLEMIA FAMILAR

Quintana S.¹, V. Di Gerónimo¹, Y. Videla^1,2, J. Pérez Maturo^1,2, V. Bañares^3,6, L. Schreier^4,6, P. Corral^5,6.

¹Laboratorio de Biología Molecular, Fares Taie Instituto de Análisis, Mar del Plata.
²FCEyN, Universidad Nacional de Mar del Plata.
³Centro Nacional de Genética Médica (CENAGEM), ANLIS.
⁴Laboratorio de Lípidos y Aterosclerosis, Facultad de Farmacia y Bioquímica, Universidad de Buenos Aires.
⁵Facultad de Medicina, Universidad FASTA, Mar del Plata.
⁶Red Iberoamericana de Hipercolesterolemia Familiar.
E-mail: biologiamolecular@farestaie.com.ar

La Hipercolesterolemia Familiar (HF) heterocigota presenta un patron de herencia autosomica dominante con penetrancia cercana al 100 %, por lo cual es imperativo el screening en cascada familiar a partir de un caso indice (CI) detectado. El presente trabajo tiene como objetivo describir la aplicacion de la tecnica de High Resolution Melting (HRM) para el cribado en cascada familiar para la deteccion de casos de HF heterocigotas. Se estudiaron dos familias, la familia 1 con un CI donde se detecto la variante c.2043C˃A y la familia 2 en la cual el CI presento la variante 1003G>A, ambas en heterocigosis. Los CI fueron estudiados por secuenciacion del gen del receptor de la lipoproteina de baja densidad (RLDL). Se estudiaron en forma fenotipica 16 familiares con lazo sanguineo en la familia 1, y 4 en la familia 2. Se rastreo la herencia de las mutaciones en cada familia en forma puntual con la tecnica HRM. El analisis por HRM se llevo a cabo con Evagreen como intercalante fluorescente. En la familia 1 se detectaron 9 casos por la tecnica HRM y la correlacion entre el fenotipo presentado por los pacientes y el genotipo fue del 100 %. En la familia 2 se detectaron 3 casos, en uno de los casos no existio correlacion entre el fenotipo y genotipo. El analisis por HRM es un metodo no destructivo para deteccion de mutaciones en el gen RLDL con alta sensibilidad y rapidez (<1,5 horas). La implementacion de una estrategia de screening en cascada genetica permite detectar certeramente nuevos pacientes, evaluarlos, estudiarlos cardiologicamente y actuar en forma preventiva.

GH 3
DIAGNÓSTICO FAMILIAR DE SÍNDROME DE FRAGILIDAD DEL CROMOSOMA X A PARTIR DE UN ABUELO ASINTOMÁTICO

Flores R.C.¹, L. Espeche², M. Ludokoski¹, A. Soto¹, C. Cheroki¹, R. Espindola¹, G. Cribb Libardi¹, M.E. Heis¹.

¹Hospital Escuela de Agudos Ramón Madariaga, Posadas, Misiones.
²Centro Nacional de Genética Médica "Dr. Eduardo Castilla", CABA.
E-mail: rominacflores@gmail.com

El Sindrome de X fragil (FRAX) es la causa mas frecuente de retardo mental (RM) heredado por expansion del triplete CGG en promotor del gen FMR1 (Xq27.3). Segun la expansion genera premutacion (52 a 200 repeticiones) con expresion parcial de proteina FMRP o mutacion completa (mas de 200 repeticiones) con ausencia de FMRP. La mutacion completa define en varones un fenotipo tipico, no en mujeres. La pre-mutacion puede expresarse como Sindrome de tremor/ataxia (FXTAS) o falla ovarica precoz (FOP). El objetivo es la descripcion de un pedigree con individuos afectados por FRAX a raiz de la consulta de una mujer con tres hijos con trastorno de espectro autista (TEA). Se realizo evaluacion clinica y estudio molecular del gen FMR1 a uno de los hijos (A1) y madre (C1). Se detecto mutacion completa en A1 y pre-mutacion en C1, confirmandose el diagnostico de FRAX en sus tres hijos. Ya que hermanas y medio hermanas de C1 via paterna (sin relacion de parentesco entre abuelas de los ninos) tenian hijos con RM, solicitamos estudio molecular al abuelo (F1) de 70 anos asintomatico detectandose pre-mutacion. El diagnostico molecular y el pedigree de tres generaciones permitieron identificar el estado del gen FMR1 (pre-mutado o mutado) en tres individuos del grupo familiar que posibilitaron el diagnostico y asesoramiento de dos familias cuyas mujeres, a partir del mismo progenitor masculino, presentaban hijos e hijas con diagnostico de RM. Se pudo confirmar el estado de portadoras obligadas de todas las hijas mujeres de F1 y, en consecuencia, diagnostico de FRAX en todos sus nietos con RM.

GH 4
ASOCIACIÓN DEL POLIMORFISMO GENÉTICO TLR2 DEL -196 PARA -174 Y LA CARCINOGÉNESIS GÁSTRICA

Oliveira J.G.¹, L.R. Trevizani¹, W. Orcini¹, M.D. Susi¹, S.L.M. Payão^1,2, G.M. Bovolini¹.

¹Universidade do Sagrado Coração.
²Faculdade de Medicina de Marília.
E-mail: juliana.usc2012@yahoo.com.br

Actualmente el cancer gastrico representa el cuarto tumor maligno mas frecuente en el mundo. Polimorfismos genicos de factores involucrados en el proceso inflamatorio pueden modular el patron de respuesta inmune del hospedero. Asi, el objetivo de este estudio fue evaluar la asociacion de los polimorfismos TLR2 del -196 para -174 en el riesgo de la carcinogenesis gastrica. En este estudio, el polimorfismo fue genotipado por las tecnicas de PCR-alelo especifico en 326 muestras de biopsias gastricas, habiendo 21 pacientes con cancer gastrico- CG; 233 pacientes con gastritis cronica-GC y 72 pacientes control-C. Las frecuencias genotipicas en el grupo de GC para D/D (delecion/delecion), I/D (insercion/delecion) y I/I (insercion/ insercion) fueron de 2 %, 20 % y 78 %, respectivamente, en cuanto las frecuencias alelicas para I y D fueron de 0,88 y 0,12, respectivamente. En el grupo de CG las frecuencias genotipicas para D/D, I/D y I/I fueron de 0 %, 14 % y 86 %, respectivamente, en cuanto las frecuencias alelicas para I y D de 0,93 y 0,07, respectivamente. En el grupo C se obtuvo una frecuencia genotipica para D/D, I/D, I/I de 3 %, 28 % y 69 % respectivamente, y frecuencia alelica para I y D de 0,83 y 0,17, respectivamente. En el modelo codominante fue observado el efecto protector del genotipo I/D entre los grupos GC y C, diferencia estadisticamente significante (OR=0,44, 95 % IC=0,20-0,95, p=0,04). Nuestros datos indican que el genotipo heterocigoto para el polimorfismo TLR2 I/D puede estar asociado en el proceso de carcinogenesis gastrica.

GH 5
ROL DE NRF2 EN LA REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN DE SCARB1 EN PACIENTES DIABÉTICOS TIPO 2

Siewert S.¹, G.V. Mendoza¹, I.I. Gonzalez¹, M.S. Ojeda¹.

¹Facultad de Química, Bioquímica y Farmacia, Universidad Nacional de San Luis.
E-mail: msojeda@unsl.edu.ar

El factor de transcripcion Nrf2 regula la expresion de numerosos genes de enzimas antioxidantes mediante su union a una secuencia especifica del ADN conocida como ARE. Estudios recientes proveen evidencias que Nrf2 estaria involucrado en la modulacion de la homeostasis lipidica hepatica, a traves de la expresion de genes lipogenicos. Hemos identificado dos secuencias ARE-like en la zona promotora y una secuencia ARE en el primer intron del Receptor Scavenger Clase B tipo I (SCARB1) primer receptor descripto de las HDL-c. El objetivo del trabajo es analizar la correlacion entre las expresiones de SCARB1 y de Nrf2 en pacientes diabeticos tipo 2 y controles. Se determinaron parametros bioquimicos y niveles de TBAR´S en suero de ambos grupos. La RT se realizo con AMV transcriptasa reversa y hexameros. Para la PCR se disenaron primers especificos para SCARB1 y para Nrf2. Los productos de PCR se separaron mediante electroforesis en gel de agarosa al 2 %. La expresion de SCARB1 y de Nrf2 fue mayor en Co respecto DT2 (p<0,0001 y p=0,0041, respectivamente). La expresion de SCARB1 se correlaciono negativamente con Glucemia (r=-0,54; p<0,0001) y con los niveles de TBAR´S (-0,81; p<0,0001); y positivamente con niveles de expresion de Nrf2 (0,31; p=0,03). En la bibliografia consultada no se encontraron resultados que demuestren que Nrf2 podria estar involucrado como una nueva via de senalizacion en la regulacion de la expresion de SCARB1. Se requieren estudios posteriores para identificar la interaccion funcional de Nrf2 con las secuencias ARE identificadas.

GH 6
ANÁLISIS DE HAPLOTIPOS DE LOS GENES FABP-2 Y CETP AJUSTADOS A LA DISLIPIDEMIA EN PACIENTES DIABÉTICOS TIPO 2

Gonzalez I.I.¹, S. Siewert¹, G. Fernadez¹, L. Correa¹, M.S. Ojeda¹.

¹Universidad Nacional de San Luis. E-mail: irmacarlini@yahoo.com.ar

La Diabetes Mellitus Tipo 2 (DMT2) es una enfermedad compleja en donde los factores geneticos desempenan un rol importante en la homeostasis lipidica. Entre los genes involucrados en el metabolismo lipidico se pueden mencionar Fatty Acid Binding Protein 2 (FABP-2) que interviene en la transferencia de acidos grasos en el intestino delgado, y Cholesterol Ester Transfer Protein (CETP) que participa en el transporte reverso de colesterol. El objetivo es evaluar la asociacion de haplotipos de los SNPs rs708272 y rs1799883 de los genes FABP-2 y CETP con el perfil lipidico en pacientes Diabeticos Tipo 2. Se estudiaron individuos controles (Co) y DMT2. Los polimorfismos de los genes CETP (rs708272-B1/B2) y de FABP-2 (rs1799883- A/T) fueron genotipificados mediante PCR-RLFP. Parametros lipidicos se relacionaron con los haplotipos correspondientes mediante el estadistico SNPStats. No se observaron diferencias significativas en las frecuencias alelicas de CETP y FABP-2 entre Co y DMT2. Los modelos de herencia fueron ajustados por dislipemia y genero, estableciendose un modelo de herencia dominante para CETP [OR =2,78; IC 95 % (1,06-7,32); p=0,035] y recesivo para FABP-2 [diferencia=0,18; IC 95 % (0,03-1,03); p=0,04). Se obtuvieron cuatro haplotipos, siendo B1-A el mas frecuente (0,42). Solo el haplotipo B1-T se asocio con la dislipemia [OR=0,518; IC 95 % (0,296-0,907); p=0,02]. Los resultados del analisis de haplotipos demuestran que las combinaciones geneticas de los alelos de CETP y de FABP-2 podrian contribuir en la susceptibilidad de desarrollar dislipidemia en pacientes DMT2.

GH 7
ANÁLISIS DEL SNP G399A DEL GEN XRCC1 EN RELACIÓN A LA RADIODERMITIS DESARROLLADA EN PACIENTES SOMETIDOS A TRATAMIENTOS RADIANTES CONVENCIONALES

Córdoba E.E.^1,2, M.C. Abba³, E. Lacunza³, A.M. Güerci^1,2.

¹Instituto de Genética Veterinaria, IGEVET-CONICET-UNLP.
²Centro Integrado de Oncología, CIO La Plata Terapia Radiante.
³Centro de Investigaciones Inmunológicas Básicas y Aplicadas, CINIBA.
E-mail: allycordoba@hotmail.com

Las reacciones adversas en el tejido normal que acompanan a la Radioterapia (RT) varian considerablemente entre los pacientes y constituyen la limitante del tratamiento en ≥10 % de los casos. La radiodermitis es el efecto mas comun en pacientes con cancer de mama. La variabilidad de este rasgo se debe en un 80 % a genes que participan en vias radioinducidas como las de reparacion del ADN. En consecuencia, este estudio persiguio evaluar la asociacion entre el SNP G399A de XRCC1 y radiodermitis en pacientes con cancer de mama sometidas a RT. El trabajo incluyo 70 pacientes tratadas con una dosis total de 50G y tratamiento 3D. Las extracciones de ADN genomico se realizaron a partir de muestras de sangre e hisopado bucal y el genotipado mediante PCR- RFLP. La radiotoxicidad fue evaluada por el score del Radiation Therapy Oncology Group. Ademas, se realizo una entrevista de anamnesis y se tomo consentimiento informado. Se estimaron las frecuencias genicas y genotipicas, equilibrio de Hardy-Weinberg y se realizo un analisis multivariado con SPSS (v.19). El 63 % de las pacientes presento radiodermitis de grado ≥2. No se observaron diferencias significativas entre las frecuencias genotipicas de G399A- XRCC1 y radiodermitis (p>0,05). Sin embargo, se encontro que pacientes con IMC?25 presentaron menor toxicidad (p=0,03) y que aquellas con un tamano de mama mediana y grande manifestaron mayor grado de radiodermitis (p=0,02). Si bien la eficacia de la reparacion del ADN es esencial en este fenotipo, factores extrinsecos inherentes al paciente deben ser necesariamente considerados.