COMUNICACIONES LIBRES

Genética de microorganismos

 

GMI 1
EXPRESIÓN DIFERENCIAL DE PROTEÍNAS ASOCIADAS A ESTRÉS OXIDATIVO DURANTE LA DECOLORACIÓN DE NEGRO REACTIVO 5 POR Trichosporon Akiyoshidainum

Bulacio Gil N.M.¹, D. Kurt1, H.F. Pajot¹, L.I. Catellanos de Figueroa^1,2, J. Powlowski³.

¹ Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiológicos-CONICET, S.M. de Tucumán, Argentina;
² Universidad Nacional de Tucumán, S.M. de Tucumán, Argentina;
³ Department of Chemistry & Biochemistry, Concordia University.7141 Sherbrooke St. W. Montreal, QC, Canadá (H4B1R6).
E-mail: natalia_bulaciogil@hotmail.com.ar

Trichosporon akiyoshidainum es una levadura basidiomicetacea capaz de remover colorantes textiles mediante procesos oxidativos. Durante la decoloracion se induce un eficiente sistema antioxidante en respuesta al estres oxidativo generado. Para caracterizar este sistema, se realizo un analisis in silico del genoma de la levadura con el que se identificaron 16 genes de tiorredoxinas (TRX) y un gen de metionina sulfoxido reductasa, tres genes de catalasa (CAT), cinco de superoxido dismutasa (SOD), una de glutation reductasa (GSR), 11 genes de glutation transferasa (GST) y seis genes de peroxirredoxina (PRX). El analisis de cromatografia liquida acoplada a espectrometria de masas en tandem permitio identificar proteinas expresadas diferencialmente durante la decoloracion de Negro Reactivo 5 (NR5). En medios con NR5, una proteina SOD, dos PRX, dos TRX reductasas y una GSR, se sobreexpresaron con respecto al medio control. Dos TRX y dos GST solo pudieron detectarse en medio con NR5. Sorprendentemente, se detecto una disminucion de CAT en presencia del colorante. Otras proteinas involucradas en el sistema de detoxificacion fueron identificadas en ambas condiciones. Estos resultados sugieren que T. akiyoshidainum cuenta con un amplio espectro de genes que estarian involucrados en la respuesta del estres oxidativo y en la detoxificacion celular. Muchos de estos genes se expresan diferencialmente en presencia del colorante NR5, formando un activo sistema de detoxificacion que permite resistir las altas concentraciones de peroxido y/o radicales libres que serian necesarios para la degradacion de este colorante textil.

GMI 2
MICROHETEROGENEIDAD DEL GEN 16S RRNA DE UNA CEPA DE Streptomyces sp. AISLADA DE MUESTRAS DE SUELO DE LA PROVINCIA DE MISIONES

Kleinbielen T.S.^1,2, C. Centeno^1,2, J. Urquiza^1,2, S. Valle Lisboa^1,2, I.A. Wolin^1,2, D. Galeano^1,2, P. Martina^1,2, J.A. Ferreras^1,2.

¹ Instituto de Biología Subtropical (UNaM-CONICET);
² Facultad de Ciencias Exactas, Químicas y Naturales, UNaM.
E-mail: juf2003@gmail.com

Se sabe que distintas especies bacterianas pueden tener mas de una copia del operon que codifica para el gen 16S rRNA y que un porcentaje de ellas pueden presentar micro-heterogeneidad (<2%) o macro-heterogeneidad (>2%) entre las copias. Como este fenomeno puede afectar la interpretacion de los resultados de los diferentes estudios de diversidad microbiana, es de suma importancia conocer que tan general es la presencia o no de copias heterogeneas de este gen en un mismo organismo. En este trabajo reportamos la presencia de al menos dos variantes del gen 16S rRNA de una cepa de Streptomyces sp. aislada de muestras de suelo de la provincia de Misiones. El gen 16S rRNA se amplifico casi en su totalidad a partir de los oligos universales 27F y 1492R y la secuencia se obtuvo a partir del ensamblaje de las secuencias obtenidas a partir de los oligos antes mencionados y los oligos internos universales 518F y 800R. Usando la herramienta BLAST se determino una identidad del 99% principalmente con S. chartreusis, pero tambien otras especies como S. resistomycificus, S. osmaniensis, y otras cepas no determinadas. En el analisis del electroferograma se pudo observar la presencia de mas de un pico de altura similar entre las posiciones 953 y 968 de la secuencia parcial obtenida. Al estar presente esta superposicion en las diferentes secuencias con diferentes oligos, se descarto que se deba a un error de lectura y se considero la presencia de al menos dos variantes del gen. Esta region de micro-heterogeneidad se encuentra entre la region V5 y V6 y quedo determinada como SSWYYAGAGATRGYSS.

GMI 3
DETECCIÓN DE Enterococcus PATÓGENOS EN AGUAS AMBIENTALES DE SALTA, ARGENTINA

Agüero E.I.¹, V.B. Rajal^2,3, H.A. Cristóbal^1,2.

¹ Facultad de Ciencias Naturales, Universidad Nacional de Salta (UNSa);
² Instituto de Investigaciones para la Industria Química (INIQUI)-CONICET, UNSa;
³ Facultad de Ingeniería, UNSa, Salta, Argentina.
E-mail: hacristobal@gmail.com

El rio Arenales atraviesa la ciudad de Salta y recibe el impacto de actividades antropicas que deterioran su calidad; el contacto con estas aguas representa un riesgo para la salud humana. El objetivo del trabajo fue detectar Enterococcus patogenos en aguas recreativas por PCR en tiempo real (qPCR). Se monitorearon cuatro puntos del rio desde abril de 2013 hasta enero de 2014. Dos litros de agua se concentraron por ultrafiltracion, se detectaron Enterococcus por cultivo y se extrajo el ADN empleando un kit comercial. A partir de una serie de diluciones del ADN del control positivo se amplificaron los genes de virulencia cylA y ace mediante qPCR y se construyeron las curvas estandares. Los genes y cebadores usados fueron seleccionados a partir de la evaluacion de cebadores publicados empleando herramientas bioinformaticas. Los recuentos mostraron que la contaminacion fue superior a la permitida para aguas recreativas (61 UFC/100 ml) en los puntos analizados. Los resultados de los ensayos in silico (NCBI-primer- Blast) permitieron evaluar los cebadores para ace, con ampliaciones de 517, 499, 688 y 107 pb; y para el gen cylA, con productos de 616, 300, 108 y 94 pb. Los sistemas seleccionados mostraron una eficiencia del 96 y 97% para los genes ace y cylA, respectivamente. De las 36 muestras de aguas concentradas, 14 y 17 fueron positivas para ace y cylA, respectivamente por qPCR. Los resultados confirmaron la contaminacion del rio, y la implementacion de marcadores geneticos permite el diagnostico de la presencia de una cepa patogena en las muestras ambientales.

GMI 4
UTILIZACIÓN DE LA METODOLOGÍA RAPD-PCR PARA LA IDENTIFICACIÓN DE MICROORGANISMOS AISLADOS DEL SALAR HOMBRE MUERTO

Orce I.G.¹, F.L. Martinez¹, M. Aparicio¹, V. Irazusta^1,2, V. Rajal^1,3.

¹ Instituto de Investigaciones para la Industria Química (INIQUI), CONICET-Universidad Nacional de Salta (UNSa);
² Facultad de Ciencias Naturales, UNSa;
³ Facultad de Ingeniería, UNSa. E-mail: vbrajal@gmail.com

El Salar del Hombre Muerto se encuentra en la provincia de Catamarca, Argentina. Por su elevada concentracion de litio, es considerado un ambiente extremo con microorganismos adaptados especificamente para poder sobrevivir y proliferar en el. El objetivo del presente trabajo fue implementar una metodologia economica que permita identificar a nivel de especie y/o genero los aislamientos obtenidos del Salar Hombre Muerto, principalmente del genero Bacillus. Para ello se aplico la tecnica RAPD-PCR (de Random amplified polymorphism) utilizando el cebador S30 descripto para el genero Bacillus por Kuom y cols. La amplificacion de ADN extraido a partir de cultivos puros de B. atrophaeus, B. licheniformis, B. subtilis y B. pumilus, permitio obtener perfiles de amplificacion diferentes para cada una de las especies. Los productos de amplificacion obtenidos variaron entre 0,5 y 2,5 Kb. Tambien se amplifico ADN extraido a partir de cultivos puros de Brevibacterium sp., Micrococcus y Kocuria sp. para evaluar la extension de dicha metodologia a otros generos. La utilizacion de esta tecnica permitio identificar 12 de los 24 aislamientos obtenidos del Salar Hombre Muerto, lo cual se corroboro a traves de la secuenciacion del gen 16S ADN ribosomal. Ademas se comprobo la extension de esta metodologia a otros generos como Micrococcus, Brevibacterium y Kocuria observandose bandas diferenciales entre 0,6 y 2,5 Kb. Para mejorar la caracterizacion de los aislados obtenidos, se espera en el corto plazo contar con una amplia variedad de perfiles de amplificacion.

GMI 5
VARIABILIDAD GENOTÍPICA DE AISLAMIENTOS DE Sclerotinia sclerotiorum EN LOTES DE CULTIVO DE POROTO EN SALTA Y JUJUY

Aban C.^1,2, G. Taboada^1,2, Y. Spedaletti^1,2, M. Aparicio¹, N.E. Casalderrey², M.O. Chocobar², R.N. Curti³, M. Galvan^1,2.

¹ CONICET;
² INTA;
³ UNSa.
E-mail: clap.aban@gmail.com  martazgalvan@gmail.com

En los ultimos anos el Moho Blanco del poroto, causado por el hongo Sclerotinia sclerotiorum, ha adquirido gran importancia en la region del Noroeste Argentino (NOA), ya que la enfermedad se presenta con mayor severidad y se ha detectado un incremento en el area de prevalencia. Los danos economicos producidos por S. sclerotiorum en el cultivo de poroto pueden llegar al 80% y alcanzar el 100% bajo condiciones ambientales favorables para el desarrollo del patogeno en cultivares sensibles. El objetivo del presente trabajo fue caracterizar la variabilidad genotipica de aislamientos de S. sclerotiorum en las principales areas de produccion de poroto del NOA. Para ello, se realizo un relevamiento en 6 lotes de cultivo de poroto en Salta y Jujuy, obteniendose un total de 116 aislamientos que fueron analizados mediante tecnicas moleculares y de compatibilidad micelial (MCG). Empleando ADN obtenido a partir de micelio los aislamientos se identificaron como S. sclerotiorum analizando las secuencias ITS-ADNr. Ademas se realizo la amplificacion de ADN mediante PCR empleando 11 cebadores URP (Universal Rice Primers) observandose gran variabilidad genetica entre los aislamientos evaluados. Por otro lado, se determinaron los MCG contrastando cada aislamiento con si mismo y contra todos los demas, identificandose un total de 52 MCGs, los cuales fueron unicos para cada lote. Los resultados revelan la existencia de gran variabilidad entre y dentro de los lotes analizados y representan un aporte importante para la busqueda de fuentes de resistencia a la enfermedad.

GMI 6
PATOGENICIDAD DE AISLAMIENTOS DE Sclerotinia sclerotiorum ASOCIADOS A MOHO BLANCO EN POROTO

Abán C.^1,2, G. Taboada^1,2, Y. Spedaletti^1,2, M. Aparicio¹, N.E. Casalderrey², M.O. Chocobar², R.N. Curti³, M. Galván^1,2.

¹ CONICET;
² INTA EEA Salta;
³ UNSa.
E-mail: clap.aban@gmail.com, martazgalvan@gmail.com

En el Noroeste de Argentina el rendimiento del cultivo de poroto se ve afectado por diversas enfermedades fungicas, entre ellas el moho blanco causado por Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) de Bary. El estudio de la variabilidad patogenica de los aislamientos en la region es de gran importancia para desarrollar variedades con una resistencia duradera. Con este objetivo se realizo un ensayo de patogenicidad en invernadero (straw test) utilizando plantas de poroto negro (Leales 24) de 28 dias de crecimiento bajo un diseno en bloques completos al azar con tres repeticiones. Los tratamientos fueron 116 aislamientos de S. sclerotiorum. Las plantas se inocularon cortando el tallo principal y depositando discos de APG (Agar Papa Glucosado) con micelio de 48 hs de activo crecimiento. Plantas inoculadas con discos de APG sin micelio se utilizaron como control. Las plantas se mantuvieron en camara de crecimiento a 22 ± 2° C, con una humedad relativa mayor a 80% durante ocho dias. Posteriormente se evaluo la severidad midiendo la longitud de infeccion sobre el tallo principal. Los datos se analizaron mediante un modelo lineal generalizado y las medias de tratamientos se compararon utilizando la prueba DGC. Los resultados revelaron que los aislamientos de S. sclerotiorum mostraron variabilidad patogenica en la region, detectandose dos grupos: uno de elevada agresividad y otro de menor agresividad. Con base en estos resultados se seleccionaron los aislamientos de mayor agresividad para estudios posteriores conducentes a la busqueda de genotipos resistentes en el germoplasma de poroto.

GMI 7
CARACTERIZACIÓN MOLECULAR DE NEMATODOS ENTOMOPATÓGENOS AISLADOS EN LA PROVINCIA DE SANTA FE

Lax P.¹, J.C. Rondan Dueñas², E. Del Valle³, N. Cuellar¹, M.E. Doucet¹.

¹ IDEA (CONICET-UNC) y Centro de Zoología Aplicada, FCEFyN, UNC, Córdoba;
² CEPROCOR, Córdoba;
³ FCA, UNL, Santa Fe.
E-mail: laxpaola@gmail.com

Los nematodos entomopatogenos son parasitos obligados de insectos; sus bacterias simbiontes producen toxinas que ocasionan la muerte del hospedador. Por esa razon son potenciales agentes de control biologico de plagas. En la provincia de Santa Fe se realizaron prospecciones en sitios destinados a la agricultura. A partir de muestras de suelo se obtuvieron 5 aislados con caracteristicas morfologicas correspondientes al genero Steinernema y uno a Heterorhabditis. El objetivo del presente trabajo fue identificar a nivel especifico esos aislados mediante el analisis de los segmentos de expansion D2-D3 del gen 28S rRNA. El ADN se extrajo a partir de juveniles infectivos; se realizo la amplificacion y secuenciacion de esa region. Las secuencias obtenidas fueron comparadas con otras disponibles en el GenBank y se evaluaron las relaciones filogeneticas en base al analisis de Neigbour Joining y Maximum Likelihood. Dos de los aislados provenientes de las localidades de Cabal y Colonia Campo del Medio se agruparon con secuencias conocidas de S. diaprepesi; individuos de Cululu, Esperanza y Videla se unieron con S. rarum mientras que el aislado de Saladero Mariano Cabal lo hizo con H. bacteriophora. En todos los casos, se obtuvieron porcentajes de similitud genetica que oscilaron entre el 99-100% con respecto a las secuencias publicadas en GenBank. Los resultados revelan que se amplia la distribucion de estas especies en Argentina; en el caso particular de S. diaprepesi, constituyen nuevos registros para este organismo que recientemente fue citado por primera vez en nuestro pais.