Introducción

Los nematodos de la familia Anisakidae, fundamentalmente los géneros Anisakis, Pseudoterranova y Contracaecum, son reconocidos como agentes etiológicos de la ictiozoonosis parasitaria denominada Anisakiasis o Anisakidosis, enfermedad de transmisión alimentaria relacionada al consumo de productos pesqueros sin cocción. En cuanto a las especies de mayor relevancia para la salud pública, dada su frecuencia de identificación en casos de Anisakidosis humana, se destacan en primer lugar aquellas pertenecientes al complejo Anisakis simplex y en segundo lugar al complejo Pseudoterranova decipiens (^{Timi et al., 2014}). Expertos de la Autoridad Europea en Inocuidad Alimentaria (^{EFSA, 2010}), la definen como una enfermedad de importancia mundial, con aproximadamente 20.000 casos notificados desde 1960. La enfermedad en humanos se da por la ingestión de sus formas infectantes (larvas de tercer estadio) o por reacciones alérgicas contra sus antígenos. La incidencia se vincula estrechamente con la cultura gastronómica, es así que, Japón resulta ser el país mayormente afectado en el mundo, dada su hábito de consumo de preparaciones a base de pescado crudo, como sushi y sashimi (^{EFSA, 2010}). En Europa, se ha mencionado a España con su consumo de anchoíta marinada (^{Bao et al., 2017}) y a nivel regional, Chile y Perú, dado su consumo de ceviche (^{Eiras et al., 2018}).

Los anisákidos son parásitos que tienen un ciclo biológico indirecto que se desarrolla en el medio acuático, con una amplia distribución mundial, teniendo como hospedadores definitivos a mamíferos y aves marinas (George-Nascimento y Urrutia, 2000; ^{Irigoitia et al., 2021}; ^{Mattiucci et al., 2003}; ^{Nadler et al., 2005}). El tercer estadio larvario (L3), forma infectante para los hospedadores definitivos, entre ellos el humano, se encuentra naturalmente en vísceras de diferentes especies de peces y cefalópodos como hospedadores paraténicos, estimando que a nivel mundial son más de 200 las especies de peces y 25 de cefalópodos donde se ha detectado la presencia de L3 de anisákidos (^{Abollo et al., 2001}). El riesgo en la salud pública está dado por la presencia de estos nematodos en el músculo de pescado, porción comestible, ya que luego de la muerte de los ejemplares se da un fenómeno de migración de los parásitos desde vísceras hacia el músculo. Dicha migración se relaciona en forma directa con factores como la evisceración post-captura (^{Cipriani et al., 2016}; ^{Smith y Wootten, 1975}) y la temperatura durante la refrigeración (^{Cipriani et al., 2016}).

Estudios realizados en la región (^{Eiras et al., 2016}; ^{Galeano, 2017}; ^{Irigoitia et al., 2018}; ²⁰²¹; ^{Timi et al., 2001}; ²⁰¹⁴) han identificado como potenciales fuentes de exposición especies de peces que también están presentes en aguas uruguayas y que son de interés comercial para el mercado local y para la exportación. En Brasil, ^{Eiras et al. (2016)} mencionan como hospedadores de L3 a las especies Micropogonias furnieri, Thunnus thynnus, Pomatomus saltatrix, Pargus pargus, Parona signata, Genypterus blacodes y Paralichthys isósceles, mientras que ^{Di Azevedo & Iñiguez (2018)}, detectaron larvas del género Anisakis en M. furnieri y del género Hysterothylacium en M. furnieri, Genypterus brasilensis, y Mullus argentinae. En Argentina, se detectaron estos nematodos en ejemplares de Atlantoraja castelnaui (^{Irigoitia et al., 2018}), Odontesthes bonariensis, Odontesthes argentinensis, Cynoscion guatucupa y Engraulis anchoíta, capturados en la Zona Común de Pesca argentino-uruguaya (^{Galeano, 2017}; ^{Timi et al., 2001}). En referencia a las especies de anisákidos presentes en la región, se destaca la identificación en Argentina de Anisakis pegreffii y Anisakis berlandi (^{Irigoitia et al., 2018}; ²⁰²¹), Contracaecum osculatum (^{Galeano, 2017}) y Pseudoterranova cattani (^{Irigoitia et al., 2018}; ^{Timi et al., 2014}).

En Uruguay, la forma adulta de anisákidos se ha encontrado en ejemplares de franciscana (Pontoporia blainvillei) (^{Danilewicz et al., 2002}) y lobo marino (Arctocephalus australis) (^{Katz et al., 2012}). En referencia a recursos pesqueros de origen marino, estuarino y dulceacuícola destinadas al consumo humano, se destaca que los géneros Anisakis, Pseudoterranova y Contracaecum se han identificado en vísceras de calamar (Ilex argentinus) y de peces como Merluccius hubbsi, Cynoscion guatucupa, (^{Botto et al., 1976}; ^{Friss de Kereki, 2009}), y específicamente el género Contracaecum se encontró en Hoplias malabaricus (^{Delgado et al., 2003}) y en Odontesthes argentinensis (^{Vettorazzi, 2016}).

A pesar de estos importantes hallazgos en Uruguay (^{Botto et al., 1976}; ^{Delgado et al., 2003}; ^{Friss de Kereki, 2009}; ^{Vettorazzi, 2016}), en el país no se ha detectado la presencia de estos nematodos de transmisión alimentaria en la musculatura de pescado como porción comestible. Sumado a esto, Uruguay, más concretamente Montevideo, ha sido testigo de un fenómeno de carácter mundial, dado por el aumento del consumo de preparaciones a base de pescado crudo. En una encuesta preliminar, entre el 2017 y el 2020, el departamento de Montevideo pasó de tener 12 a 47 locales de elaboración y venta de platos a base de pescado crudo (sushi, sashimi, ceviche) (datos sin publicar). A partir de los resultados de dicha encuesta, se seleccionaron para el presente estudio tres de las especies nacionales mayormente utilizadas para la elaboración de estos alimentos.

Esta variación del perfil de consumo de pescado motiva el objetivo del presente trabajo en cuanto a la necesidad de conocer la probabilidad de ocurrencia y nivel de infestación de anisákidos en el tejido muscular, teniendo como hipótesis que las características de manejo del pescado fresco en la cadena de comercialización de Uruguay permiten la migración de larvas hacia el músculo.

Materiales y métodos

Muestreo

Para este estudio se analizaron en total 233 ejemplares de tres especies de pescado con interés comercial (Tabla 1), Micropogonias furnieri (Corvina rubia, n=94), Macrodon ancylodon (Pescadilla de red, n=102) y Cynoscion guatucupa (Pescadilla de calada, n=37). Los ejemplares fueron capturados en aguas del Río de la Plata y Océano Atlántico (frente a Punta del Este, Maldonado), por buques pesqueros nacionales, del tipo industrial y artesanal, que operaron durante los meses de febrero y agosto de 2021.

Tabla 1 Número total de ejemplares y características biológicas de las especies de pescado provenientes de la costa este de Uruguay 

La totalidad de la muestra refiere a pescado entero (con vísceras), mantenido en refrigeración (0-5°C) desde su captura y hasta su procesamiento. El procesamiento y análisis del pescado para el diagnóstico de parásitos se realizó en la planta piloto y en el laboratorio de análisis de la Unidad de Ciencia y Tecnología de Productos Pesqueros (Facultad de Veterinaria, UdelaR. Montevideo, Uruguay). Cada ejemplar fue identificado en forma individual con la siguiente información: tipo de embarcación/zona de pesca/puerto o zona de desembarque/especie/longitud total/peso/fecha de procesado.

Resultados

Un total de 575 larvas de anisákidos, considerando cavidad celómica (562 larvas) y tejido muscular (13 larvas), fueron recuperadas de dos de las especies de pescado evaluadas, C. guatucupa y M. ancylodon, con un rango de máximo y mínimo de 1 a 149 larvas y 1 a 72 larvas, respectivamente. En la Figura 1 se muestran imágenes de nematodos detectados en cavidad celómica de ejemplares de ambas especies. En cuanto a la especie M. furnieri, en ninguno de los 94 ejemplares evaluados se evidenciaron parásitos con ninguna de las técnicas de diagnóstico utilizadas.

Figura 1 Detección de nematodos en cavidad celómica de C. guatucupa y M. ancylodon capturados por buques pesqueros de Uruguay. a. nematodos identificados en cavidad celómica de un ejemplar de C. guatucupa (total de larvas=149); b. nematodos identificados en cavidad celómica de un ejemplar de M. ancylodon (total de larvas=72). 

La especie mayormente parasitada fue C. guatucupa (Tabla 2), donde 17 ejemplares (n=37) presentaron al menos un parásito en alguna de las dos localizaciones evaluadas (cavidad celómica y/o musculatura), equivalente a una prevalencia de 46%, en comparación con M. ancylodon, sobre la cual se identificaron 38 ejemplares parasitados de un total de 102 evaluados, prevalencia de 37,3%. Sin embargo, no se observaron diferencias estadísticamente significativas entre estas dos especies parasitadas en cuanto a la prevalencia.

Tabla 2 Descriptores ecológicos de larvas de anisákidos identificadas en especies de pescado de interés comercial provenientes de las costas uruguayas 

^*cc: cavidad celómica / mu: músculo / P: prevalencia / AM: abundancia media / IM: intensidad media

Respecto del tejido muscular, 3 ejemplares de la especie C. guatucupa y 2 M. ancylodon se encontraban parasitados. Todos estos ejemplares también evidenciaron larvas en cavidad celómica, excepto uno de la especie C. guatucupa que se encontraba parasitado únicamente a nivel muscular, el cual resultó ser a su vez el ejemplar con mayor nivel de infestación en músculo, con 8 larvas registradas. Si bien se aprecia que C. guatucupa registró los mayores índices de infestación (abundancia e intensidad media), tanto en cavidad celómica como en músculo (Tabla 2), se realizó un test de Kruskal Wallis para determinar si la cantidad de anisákidos difería entre especies parasitadas M. ancylodon (n=102) y C. guatucupa (n=37), no detectando diferencias significativas: X.(1) = 1.747, .=0,187. En la Figura 2 se muestran imágenes de larvas de anisákidos detectadas en músculo por dos técnicas de diagnóstico (Candling y Transiluminación UV).

Figura 2.Detección de larvas de anisákidos en tejido muscular de ejemplares de C. guatucupa y M. ancylodon capturados por buques pesqueros de Uruguay. a y b. Anisákidos detectados en tejido muscular de un ejemplar de C. guatucupa por el método de transiluminación simple o “candling” (a) y por método de transiluminación UV (b) (total de larvas=8) / c. Anisákidos detectados en tejido muscular de un ejemplar de C. guatucupa por el método de transiluminación simple o “candling” (total de larvas=2) / d. Anisakido detectado en tejido muscular de un ejemplar de M. ancylodon por el método de transiluminación UV (total de larvas=1). 

En referencia a la asociación estudiada mediante el test de regresión lineal entre el tamaño de los ejemplares (longitud total) y la cantidad de parásitos presentes, si bien se observó que ejemplares de mayor tamaño presentaban un mayor nivel de infestación, no se detectó asociación significativa entre estas variables para la especie M. ancylodon (n=102, R.=0,035, .=0,061), ni para C. guatucupa (n=37, R.=0,024, .=0,365).

De los 575 anisákidos detectados y procesados para la identificación de género, 94 (16,3%) se encontraban con un grado de deterioro que no permitió la correcta visualización de las estructuras digestivas, siendo desestimados para el cálculo de los descriptores ecológicos.

Se identificaron tres géneros de anisákidos (Contracaecum, Pseudoterranova . Anisakis), en ambas especies de pescado parasitadas. El género más prevalente y con mayor intensidad de infestación fue Contracaecum (Figura 3). Específicamente para este género de anisákido, en C. guatucupa se registró una prevalencia (P)=35,1% y una intensidad media (IM)=10,85, mientras que en M. ancyodon los índices registrados fueron P=32,4%; IM=4,67 (Tabla 3).

Figura 3. Representatividad de los géneros de anisákidos identificados en los ejemplares parasitados de C. guatucupa y M. ancylodon mediante visualización de estructuras digestivas al microscopio (N=481 larvas). 

Tabla 3 Descriptores ecológicos de parasitismo de los diferentes géneros de anisákidos detectados en C guatucupa y M ancylodon 

^*P: prevalencia / AM: abundancia media / IM: intensidad media

A nivel del tejido muscular, en la especie C. guatucupa se constataron 4 Pseudoterranova sp., 3 Anisakis sp. y 1 Contracaecum sp., mientras que en ejemplares de M. ancyodon se identificaron 2 Contracaecumsp. y 1 Pseudoterranova sp. En la Figura 4 se detallan las diferencias morfológicas del aparato digestivo visualizadas al microscopio para cada género de anisákido.

Figura 4.  Diferenciación morfológica de los géneros de anisákidos identificados en las especies C. guatucupa y M. ancylodon, por la técnica de aclaración con lactofenol y visualización al microscopio. a. Género Contracaecum recuperado de cavidad celómica de M. ancylodon: esófago (a1), ventrículo (a2), apéndice ventricular (a3), ciego intestinal (a4) / b. Género Pseudoterranova recuperado de músculo de C. guatucupa: esófago (b1), ventrículo (b2), ciego intestinal (b3) / c. Género Anisakis recuperado de músculo de C. guatucupa: esófago (c1), ventrículo (c2), intestino (c3). 

Discusión

Son numerosos los trabajos científicos dirigidos a detectar la presencia y distribución de estos parásitos zoonóticos en aguas del suroeste atlántico, así como la prevalencia y nivel de infestación de diferentes especies de pescados, óseos y cartilaginosos, que son de interés comercial. Los estudios realizados en Argentina revisten particular interés dado que es un país que comparte con Uruguay zonas de captura y aprovechamiento de los recursos pesqueros. Incluso en algunos trabajos, parte de las muestras de pescado obtenidas provenían de la zona común de pesca argentino-uruguaya, lo cual hace que los reportes de especies hospedadoras puedan ser consideradas como un diagnóstico de situación de los recursos pesqueros capturados por buques uruguayos. Dentro de estos reportes, se puede mencionar que los géneros de anisákidos identificados en el presente trabajo han sido diagnosticados en especies de peces óseos como Engraulis anchoita (anchoita), Trichiurus lepturus (pez sable), Percophis brasiliensis (pez palo), Pagrus pagrus (pargo rosado), Acanthistius patachonicus (mero de la Patagonia), Pseudopercis semifasciata (salmón de mar); Odontesthes bonariensis (pejerrey), Prionotus nudigula (tostelin rojo), Genypterus blacodes (abadejo), Merluccius hubbsi (merluza argentina), Patagonotothen ramsayi (nototenia), Scomber japonicus (caballa) y Paralichthys isoseles (lenguado) (^{Braicovich y Timi, 2008}; ^{Hernández-Orts et al., 2013}; ^{Mancini et al., 2014}; ^{Soares et al., 2018}; ^{Timi et al., 2001}; ²⁰¹⁴). Cabe destacar que estos autores no solo detectaron anisákidos a nivel de cavidad celómica sino también en el tejido muscular. En referencia a especies de peces cartilaginosos como hospedadores, se destacan dos reportes. ^{Knoff et al. (2001)}, constataron la presencia de anisákidos en tiburones y rayas capturados en costas de Brasil y más recientemente, ^{Irigoitia et al. (2018)} identificaron las especies Anisakis berlandi, Anisakis pegreffi y Pseudoterranova cattani en vísceras de rayas (Sympterygia bonapartii, Zearaja chilensis y Atlantoraja castelnaui).

La presencia de larvas de anisákidos también se ha registrado en especies de aguas continentales. En Uruguay, el género Contracaecum fue reportado en Hoplias malabaricus (tararira) por ^{Delgado et al. (2003)}. Más en la actualidad, dos estudios reportaron nuevas especies hospedadoras obtenidas de lagunas costeras del departamento de Rocha. ^{Delgado y García (2015)} identificaron estos nematodos en peces ornamentales de la familia Rivulidae, confirmando por técnicas moleculares la existencia de dos especies diferentes de Contracaecum (sp1 y sp2), mientras que ^{Vettorazzi (2016)} registró en la especie una prevalencia entre 5 y 21% y una intensidad media de infestación de 1,25 en Odontesthes argentinensis (pejerrey).

Micropogonias furnieri (corvina rubia) ha sido mencionada en la literatura científica como hospedador de anisákidos (^{Eiras et al., 2016}; ^{Falla-Zuñiga et al., 202}1). ^{Sardella et al. (1995)}, enfocaron su trabajo en la presencia de estos nematodos zoonóticos en la cavidad celómica, mesenterio y vísceras de esta especie bentónica y costera, registrando una prevalencia de 0,4% para el género Anisakis. En Brasil, ^{Di Azevedo & Iñiguez (2018)}, también identificaron esta especie como hospedadora de los géneros Anisakis e Hysterothylacium, registrando índices de prevalencia/intensidad media/abundancia media de 1,7% /1,0 / 0,017 y 3,3% / 1,0 / 0,03 respectivamente para los dos géneros mencionados. Únicamente para el caso del Hysterothylacium, los autores detectaron la presencia de larvas en el tejido muscular. Sin embargo, en el presente estudio no se constató la presencia de anisákidos en ninguno de los ejemplares analizados (n=94).

En referencia al hallazgo de larvas de anisákidos en la especie Macrodon ancyodon (pescadilla de red), se identifica como un nuevo hospedador en Uruguay, dada la ausencia de trabajos científicos en el país que señalen esta especie como susceptible. A nivel regional, en Brasil, ^{Sabas y Luque (2003)}, ^{Fujimuto et al. (2012)} y ^{Eiras et al. (2016)}, identificaron a esta especie como hospedadora de anisákidos, alojados en vísceras o cavidad celómica, pero a diferencia del presente estudio, no evaluaron la presencia de larvas a nivel muscular.

La especie Cynoscion guatucupa (pescadilla de calada), que resultó ser la especie con mayor prevalencia y cantidad de parásitos en el presente trabajo, ha sido estudiada por diferentes autores nacionales. ^{Botto et al. (1976)}, realizaron una evaluación que incluyó la pescadilla de calada como objetivo, anteriormente denominada Cynoscion striatus, así como otras especies de interés comercial como la merluza (Merluccius hubbsi), anchoíta (Engraulis sp.) y burriqueta (Menthicirrhus martinicensis). Los autores identificaron la presencia de larvas de anisákidos en vísceras de C. striatus . M. hubbsi, reportando prevalencias de 6,3% y 79,5%, respectivamente, índice sensiblemente menor al registrado en el presente trabajo para C. guatucupa. ^{Timi et al. (2005}), ^{Fontenelle et al. (2013)} y ^{Galeano (2017)}, de igual forma, detectaron anisákidos en vísceras y cavidad abdominal de esta especie de pescado, capturado en costas uruguayas, argentinas y brasileras, destacando la presencia del género Hysterothylacium, el cual no se constató en el presente estudio.

Por su parte, ^{Friss de Kereki (2009)} y ^{Delgado (2010)}, detectaron nuevamente la presencia de estos nematodos en muestras de C. guatucupa, con una prevalencia de 36%, intensidad y abundancia media de 9,4 y 3,3 respectivamente. Estos valores resultan inferiores a los índices reportados en el presente estudio, diferencia puede estar explicada por la época del año. El muestreo realizado por dichas autoras se llevó a cabo en los meses de abril y mayo (otoño), mientras que, en el presente estudio, la muestra se conformó en su mayoría por pescado capturado en verano (febrero), lo que podría sugerir que épocas del año con mayor temperatura favorecería la presencia de parásitos en el medio acuático y consecuentemente en los hospederos. Por otra parte, las autoras también identificaron los 3 géneros de anisákidos en C. guatucupa. Sin embargo, de forma contraria a los presentes hallazgos, constataron que el género menos prevalente fue Contracaecum (23% de las larvas identificadas), seguido por Anisakis 32% y Pseudoterranova como el género de mayor ocurrencia, representando el 45% de las larvas halladas e identificadas. En ninguno de los trabajos llevados a cabo en Uruguay, donde se evaluó la presencia y nivel de infestación con estos nematodos zoonóticos, se mencionó el tejido muscular (porción comestible de pescado) como sitio de localización de larvas, dado que la metodología de diagnóstico aplicada en esos estudios se limitó a la inspección visual simple de los filetes de pescado.

En tal sentido, y considerando el desarrollo e implementación de técnicas de diagnóstico más sensibles para la detección de nematodos en músculo, los hallazgos del presente estudio donde se mencionan las especies C. guatucupa y M. ancylodon como parasitadas a nivel muscular, se destaca como el primer reporte científico en Uruguay que demuestra la migración de larvas desde vísceras hacia la porción comestible de especies de pescado que son comercializadas en el país y destinadas a la exportación. Más destacable aún, ambas son especies de interés para preparaciones gastronómicas a base de pescado crudo, como sushi, sashimi y ceviche (datos sin publicar).

A nivel regional, en Brasil, ^{Rodrigues et al. (2010)}, evaluaron ejemplares de Cynoscion sp. sobre un tamaño de muestra más elevado (n=92). Los autores no solo constataron la presencia de larvas de anisákidos en cavidad celómica, sino que al igual que en el presente trabajo, identificaron el parásito en el tejido muscular. Las prevalencias reportadas por estos autores fueron de 67,3%; 30,76% y 3,84 para los géneros Contracaecum, Anisakis . Pseusoterranova, respectivamente, coincidiendo con los resultados del presente estudio, donde se identifica al género Contracaecum como el más prevalente.

En referencia al factor talla de ejemplar, y su relación con la presencia y cantidad de parásitos presentes, los resultados del actual trabajo están en concordancia con lo reportado por ^{Sardella et al. (1995)}, ya que, si bien no se constató una asociación estadísticamente significativa, los ejemplares de mayor tamaño presentaron una mayor frecuencia de infestación, incluso una mayor intensidad de infestación con parásitos. ^{Botto et al. (1976)}, también evaluaron esta relación en M. hubbsi (merluza), aunque en este caso sí reportaron una significancia estadística en la asociación entre estas dos variables, resaltando que el grupo de ejemplares de mayor tamaño presentó una mayor prevalencia (33% en menores de 50cm vs 92,5% en ejemplares de 50cm o más), así como un mayor nivel de infestación. Dado que en peces la talla se toma como referencia para definir la edad del ejemplar, se podría pensar que los individuos de mayor edad tengan más probabilidad de estar parasitados que los juveniles, incluso con un mayor número de larvas por un posible efecto acumulativo.

La ratificación de la presencia de los tres géneros de anisákidos (Contracaecum. Anisakis . Pseuderranova), si bien aporta información sobre estos parásitos en aguas uruguayas y sus recursos hidrobiológicos, hace imperativo profundizar en estudios más enfocados a las especies de anisákidos mediante técnicas moleculares, así como investigar qué otros recursos pesqueros estarían involucrados en el ciclo biológico y podrían ser fuentes de estos agentes zoonóticos.

Se destaca la presencia de estos nematodos en la musculatura de ambas especies parasitadas (C. guatucupa y M. ancylodon), que comprueba la migración de larvas desde vísceras. Este hallazgo representa el primer reporte en el país de anisákidos con esta localización, lo que a su vez confirma la existencia de un riesgo real de contraer Anisakidosis en humanos, cuando estas especies de pescado se consumen sin un previo tratamiento de inactivación o destrucción.